無病毒植物的培養(yǎng)ppt課件-資料下載頁
2025-01-05 11:58本頁面
【正文】 12~13 M 線 狀 650 12~13 ? 靈敏度高和能在植物粗提取液中定量測定病毒。 ? 目前運(yùn)用負(fù)染和超薄切片電鏡觀察能夠診斷和鑒別病毒到屬的水平。 ? 1973年， Derrick把電鏡與免疫學(xué)技術(shù)相結(jié)合，建立了更為靈敏的免疫吸附電鏡技術(shù)，該技術(shù)已成為植物病毒研究的一個(gè)重要手段。 方法的優(yōu)點(diǎn) (四 )分子生物學(xué)方法 在植物病毒鑒定中采用的分子生物學(xué)方法主要是檢測病毒的核酸。 一般都具有快速、簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)。 核酸雜交技術(shù)的原理 :采用帶有放射性或非放射性物質(zhì)標(biāo)記的已知序列核酸單鏈作為探針，在一定條件下與靶病毒的核酸單鏈退火形成雜交雙鏈。通過雜交信號的檢測，鑒定樣本中有無相應(yīng)病毒的基因。 ? 19世紀(jì)末以來，許多國家開始用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR)技術(shù)檢測果樹病毒，并取得很好的效果。 ? 常用的有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (polymerase chain reaction， PCR)技術(shù)， 即利用已知病毒的核苷酸序列或同組病毒的相似序列區(qū)域來設(shè)計(jì)引物，將待測樣品用 PCR技術(shù)體外擴(kuò)增 DNA，擴(kuò)增后的產(chǎn)物可進(jìn)行限制性片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 DNA(random amplified polymorphic DNA RAPD)、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性 (amplified fragment length polymorphism， AFLP)、變性梯度凝膠電泳(denaturing grade gel electrophoresis， DGGE)、單鏈構(gòu)象多態(tài)性 (singlestrandconformation polymorphism， SSCP)、探針交叉雜交等技術(shù)分析檢測病毒是否存在。 由于多數(shù)植物病毒核酸是 RNA，在進(jìn)行 PCR檢測前，需以 RNA為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄生成 cDNA后，再利用病毒核酸特有的序列設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，即可知道在寄主中是否有病毒存在。 RNA病毒和類病毒等在寄主體內(nèi)可形成雙鏈RNA(dsRNA)，而一般情況下植物體內(nèi)不存在dsRNA，因此 dsRNA分析也可用于植物病毒鑒定。 利用 DNA雜交和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合的基因芯片技術(shù)也是植物病毒快速檢測的重要發(fā)展方向。 在實(shí)際應(yīng)用中，為了提高檢測的可靠性，往往用幾種方法同時(shí)鑒定。最后選擇出的無毒苗即可進(jìn)行擴(kuò)增繁殖，用于生產(chǎn)。但在無毒種苗的擴(kuò)增繁殖和應(yīng)用過程中應(yīng)注意防止再度感染。 植物脫毒苗生產(chǎn)應(yīng)用尚不普遍，原因如下： ①基礎(chǔ)研究跟不上，諸如病毒特性與寄主的關(guān)系，各植物種體內(nèi)都有什么病毒等。 ②脫毒培養(yǎng)后如何快速檢測。 ③得到脫毒原種苗后，如何保存 ?如何防止再度侵染等。 四、無毒原種苗的繁殖 ? 經(jīng)莖尖培養(yǎng)法，熱處理法、微體嫁接法獲得的無病毒株數(shù)量是很有限的，需擴(kuò)大繁殖才能滿足生產(chǎn)需要。 ? 一方面充分發(fā)揮組織培養(yǎng)作用，在室內(nèi)加速繁殖；另一方面加速田間繁殖。 ? 與此同時(shí)對脫毒株系進(jìn)行植物學(xué)性狀鑒定，遺傳穩(wěn)定性鑒定，并根據(jù)病毒鑒定結(jié)果，淘汰有毒株系，保留性狀優(yōu)良無毒株系。 五、無毒原種的保存 ? 無毒植株并不具有額外的抗病性，它們有可能很快又被重新感染。為了解決這個(gè)問題，應(yīng)將無毒原種種在溫室或防蟲罩內(nèi)滅過菌的土壤中。 ? 在大規(guī)模繁殖這些植物的時(shí)候，應(yīng)把它們 種在田間的隔離區(qū)內(nèi) ，其中應(yīng)很少有或完全沒有重新感染的機(jī)會(huì)。 ? 另外一種更容易也是更便宜的方法，是把由 莖尖得到的并已經(jīng)過脫毒檢驗(yàn)的植物通過離體培養(yǎng)進(jìn)行繁殖 六、脫毒植株的應(yīng)用 ? 在研究特定病毒對寄主植物的影響時(shí)，無毒植株是非常有用的實(shí)驗(yàn)材料。 ? 更重要的是，主要是通過莖尖培養(yǎng)所得到的無毒植株的發(fā)育情況表明，很多病毒能在寄主植物中造成生活力、品質(zhì)和產(chǎn)量的嚴(yán)重?fù)p失。 ? 通過把已知病毒引入無毒植株，并比較同一個(gè)無性系的感病株和無毒株的表現(xiàn)，可以對病毒造成的產(chǎn)量損失做出更精確的估計(jì)。 ? 通過莖尖培養(yǎng)的方法， Stone(1973)由 — 個(gè)品種的水仙中獲得了一個(gè)無阿拉伯花葉病毒和水仙退化病毒的無性系。 ? 這種無毒鱗莖比普通原種長得快，生活力強(qiáng)，比受侵染的植株花大，顏色豐富，每個(gè)莖的花多。大黃脫毒后葉柄產(chǎn)量增加了 60％－ 90％。 ? 天竺葵的很多品種帶有不表現(xiàn)癥狀的病毒。據(jù)報(bào)道，由其莖尖培養(yǎng)產(chǎn)生的植株比未受過處理的植株生活力強(qiáng)，產(chǎn)生插條的數(shù)目多 20％一 30％，而且這些插條很容易生根。 七、病毒以外病原菌的離體消除方法 ? 莖尖培養(yǎng)和愈傷組織培養(yǎng)主要用于消除病毒，但有些證據(jù)表明，也可通過培養(yǎng)消除其他病原菌如類菌質(zhì)體、細(xì)菌和真菌。 ? jacoli(1978)指出，胡蘿卜外植體經(jīng)過反復(fù)轉(zhuǎn)管后，其中感染的星黃菌 (類菌質(zhì)體狀小體 )逐漸退化并在 80d內(nèi)消失。 ? 培養(yǎng)的植物組織內(nèi)帶有的細(xì)菌和真菌，由于在培養(yǎng)基上增殖很快，在一般情況下很容易表現(xiàn)出來。 ? 通過莖尖培養(yǎng)已經(jīng)在花葉 萬年青和天竺葵 中消除了這類周身侵染的 細(xì)菌 。 ? 在 康乃馨 中已經(jīng)消除了由 薔薇鐮孢霉 引起的莖腐病。 ? 無毒種苗在實(shí)際應(yīng)用中的問題是再度感染，如何防止再度感染，必須建立一種體系。 ? 在這種體系中應(yīng)做到： 研究、繁殖、生產(chǎn)嚴(yán)格分工。 原原種和原種的繁殖，必須在隔離的網(wǎng)室中進(jìn)行；良種的繁殖，可采用集團(tuán)隔離即在無毒源和其他病蟲害的大田中進(jìn)行。良種提供農(nóng)家生產(chǎn)，經(jīng) 2— 3年后再度感染，可全部更新。 (1)熱處理為什么可以去除部分植物病毒 ?熱處理方法分為幾種，常用的是哪一種 ? (2)如何鑒定莖尖培養(yǎng)而成的脫毒苗確實(shí)是無毒的 ? (3)為什么用微莖尖組織培養(yǎng)形成的試管苗一般是無毒的 ? 思考題
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