無病毒植物的培養(yǎng)ppt課件-資料下載頁
2025-01-05 11:58本頁面
【正文】 12~13 M 線 狀 650 12~13 ? 靈敏度高和能在植物粗提取液中定量測定病毒。 ? 目前運用負染和超薄切片電鏡觀察能夠診斷和鑒別病毒到屬的水平。 ? 1973年， Derrick把電鏡與免疫學(xué)技術(shù)相結(jié)合，建立了更為靈敏的免疫吸附電鏡技術(shù)，該技術(shù)已成為植物病毒研究的一個重要手段。 方法的優(yōu)點 (四 )分子生物學(xué)方法 在植物病毒鑒定中采用的分子生物學(xué)方法主要是檢測病毒的核酸。 一般都具有快速、簡便、靈敏度高、特異性強等特點。 核酸雜交技術(shù)的原理 :采用帶有放射性或非放射性物質(zhì)標記的已知序列核酸單鏈作為探針，在一定條件下與靶病毒的核酸單鏈退火形成雜交雙鏈。通過雜交信號的檢測，鑒定樣本中有無相應(yīng)病毒的基因。 ? 19世紀末以來，許多國家開始用聚合酶鏈式反應(yīng) (PCR)技術(shù)檢測果樹病毒，并取得很好的效果。 ? 常用的有聚合酶鏈式反應(yīng) (polymerase chain reaction， PCR)技術(shù)， 即利用已知病毒的核苷酸序列或同組病毒的相似序列區(qū)域來設(shè)計引物，將待測樣品用 PCR技術(shù)體外擴增 DNA，擴增后的產(chǎn)物可進行限制性片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)、隨機擴增多態(tài)性 DNA(random amplified polymorphic DNA RAPD)、擴增片段長度多態(tài)性 (amplified fragment length polymorphism， AFLP)、變性梯度凝膠電泳(denaturing grade gel electrophoresis， DGGE)、單鏈構(gòu)象多態(tài)性 (singlestrandconformation polymorphism， SSCP)、探針交叉雜交等技術(shù)分析檢測病毒是否存在。 由于多數(shù)植物病毒核酸是 RNA，在進行 PCR檢測前，需以 RNA為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄生成 cDNA后，再利用病毒核酸特有的序列設(shè)計的引物進行PCR反應(yīng)，即可知道在寄主中是否有病毒存在。 RNA病毒和類病毒等在寄主體內(nèi)可形成雙鏈RNA(dsRNA)，而一般情況下植物體內(nèi)不存在dsRNA，因此 dsRNA分析也可用于植物病毒鑒定。 利用 DNA雜交和熒光標記技術(shù)相結(jié)合的基因芯片技術(shù)也是植物病毒快速檢測的重要發(fā)展方向。 在實際應(yīng)用中，為了提高檢測的可靠性，往往用幾種方法同時鑒定。最后選擇出的無毒苗即可進行擴增繁殖，用于生產(chǎn)。但在無毒種苗的擴增繁殖和應(yīng)用過程中應(yīng)注意防止再度感染。 植物脫毒苗生產(chǎn)應(yīng)用尚不普遍，原因如下： ①基礎(chǔ)研究跟不上，諸如病毒特性與寄主的關(guān)系，各植物種體內(nèi)都有什么病毒等。 ②脫毒培養(yǎng)后如何快速檢測。 ③得到脫毒原種苗后，如何保存 ?如何防止再度侵染等。 四、無毒原種苗的繁殖 ? 經(jīng)莖尖培養(yǎng)法，熱處理法、微體嫁接法獲得的無病毒株數(shù)量是很有限的，需擴大繁殖才能滿足生產(chǎn)需要。 ? 一方面充分發(fā)揮組織培養(yǎng)作用，在室內(nèi)加速繁殖；另一方面加速田間繁殖。 ? 與此同時對脫毒株系進行植物學(xué)性狀鑒定，遺傳穩(wěn)定性鑒定，并根據(jù)病毒鑒定結(jié)果，淘汰有毒株系，保留性狀優(yōu)良無毒株系。 五、無毒原種的保存 ? 無毒植株并不具有額外的抗病性，它們有可能很快又被重新感染。為了解決這個問題，應(yīng)將無毒原種種在溫室或防蟲罩內(nèi)滅過菌的土壤中。 ? 在大規(guī)模繁殖這些植物的時候，應(yīng)把它們 種在田間的隔離區(qū)內(nèi) ，其中應(yīng)很少有或完全沒有重新感染的機會。 ? 另外一種更容易也是更便宜的方法，是把由 莖尖得到的并已經(jīng)過脫毒檢驗的植物通過離體培養(yǎng)進行繁殖 六、脫毒植株的應(yīng)用 ? 在研究特定病毒對寄主植物的影響時，無毒植株是非常有用的實驗材料。 ? 更重要的是，主要是通過莖尖培養(yǎng)所得到的無毒植株的發(fā)育情況表明，很多病毒能在寄主植物中造成生活力、品質(zhì)和產(chǎn)量的嚴重損失。 ? 通過把已知病毒引入無毒植株，并比較同一個無性系的感病株和無毒株的表現(xiàn)，可以對病毒造成的產(chǎn)量損失做出更精確的估計。 ? 通過莖尖培養(yǎng)的方法， Stone(1973)由 — 個品種的水仙中獲得了一個無阿拉伯花葉病毒和水仙退化病毒的無性系。 ? 這種無毒鱗莖比普通原種長得快，生活力強，比受侵染的植株花大，顏色豐富，每個莖的花多。大黃脫毒后葉柄產(chǎn)量增加了 60％－ 90％。 ? 天竺葵的很多品種帶有不表現(xiàn)癥狀的病毒。據(jù)報道，由其莖尖培養(yǎng)產(chǎn)生的植株比未受過處理的植株生活力強，產(chǎn)生插條的數(shù)目多 20％一 30％，而且這些插條很容易生根。 七、病毒以外病原菌的離體消除方法 ? 莖尖培養(yǎng)和愈傷組織培養(yǎng)主要用于消除病毒，但有些證據(jù)表明，也可通過培養(yǎng)消除其他病原菌如類菌質(zhì)體、細菌和真菌。 ? jacoli(1978)指出，胡蘿卜外植體經(jīng)過反復(fù)轉(zhuǎn)管后，其中感染的星黃菌 (類菌質(zhì)體狀小體 )逐漸退化并在 80d內(nèi)消失。 ? 培養(yǎng)的植物組織內(nèi)帶有的細菌和真菌，由于在培養(yǎng)基上增殖很快，在一般情況下很容易表現(xiàn)出來。 ? 通過莖尖培養(yǎng)已經(jīng)在花葉 萬年青和天竺葵 中消除了這類周身侵染的 細菌 。 ? 在 康乃馨 中已經(jīng)消除了由 薔薇鐮孢霉 引起的莖腐病。 ? 無毒種苗在實際應(yīng)用中的問題是再度感染，如何防止再度感染，必須建立一種體系。 ? 在這種體系中應(yīng)做到： 研究、繁殖、生產(chǎn)嚴格分工。 原原種和原種的繁殖，必須在隔離的網(wǎng)室中進行；良種的繁殖，可采用集團隔離即在無毒源和其他病蟲害的大田中進行。良種提供農(nóng)家生產(chǎn)，經(jīng) 2— 3年后再度感染，可全部更新。 (1)熱處理為什么可以去除部分植物病毒 ?熱處理方法分為幾種，常用的是哪一種 ? (2)如何鑒定莖尖培養(yǎng)而成的脫毒苗確實是無毒的 ? (3)為什么用微莖尖組織培養(yǎng)形成的試管苗一般是無毒的 ? 思考題
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