內(nèi)蒙古高?？蒲许椖扛事短墙Y(jié)合凝集素基因多態(tài)性及血清表達與copd患者急性加重的相關(guān)性研究申請書-資料下載頁
2025-05-17 18:04本頁面
【導讀】3．本表各欄除特別規(guī)定外，均可以自行加行、加頁。4．為填報內(nèi)容提供的證明材料，統(tǒng)一裝訂在申請書最后部分。我確認本申請書及附件內(nèi)容真實、準確。如果獲得資助，我將認真履行項目負責人職。責，積極組織開展研究工作，合理安排研究經(jīng)費，按時報送有關(guān)材料并接受檢查。已經(jīng)按照項目申報要求對項目申請人的資格及項目申請書內(nèi)容進行了審核。件；按照科研項目管理有關(guān)規(guī)定，認真履行項目承擔單位的管理職責。慢性阻塞性肺疾病的發(fā)病率及死亡率逐年上升，是一種具有氣流受限特征的疾病，暴露在侵入細菌表面的甘露糖引發(fā)先天性免疫防御反應(yīng)。MBL缺乏的COPD患者感染加重的頻率以及臨床預后的作用目前尚未完全明了，COPD位列世界上第四大主要死亡原因之一。頻繁的感染，引起COPD反復急性發(fā)作，增加患者的住院及死亡率。氨酸所替代所致，其基因多態(tài)性導致血清MBL水平下降。MBL2基因編碼區(qū)及啟動子區(qū)的核苷酸多態(tài)性會影響血漿MBL水平。
【正文】 R 擴增儀、照相機、低溫冰箱、電熱恒溫水槽、酶標儀、研究對象充足。 四、研究思路、工作方案、技術(shù)路線（限 600 字） 根據(jù)急性加重次數(shù)分組：將本項研究中納入的 COPD 患者分入 2 個組：一個組為（反復加重者），入選 2 年內(nèi)感染加重發(fā)作的平均次數(shù)≥ 2 次。 另外一個組為入選 2 年內(nèi)感染加重的平均次數(shù)＜ 2 次的患者。 MBL 基因多態(tài)性的檢測：每位受試對象均被抽取空腹靜脈血 2ml，放入血常規(guī)中，EDAT 抗凝， 20℃冰柜可長時間保存。 用鹽析法提取白細 胞中的基因組 DNA,以 SDS 裂解白細胞 ,蛋白酶 K 消化蛋白和乙醇沉淀獲得基因組 DNA。利用聚合酶鏈反應(yīng) 限制性片段長度多態(tài)性 (PCRRFLP）技術(shù)分析 MBL2 基因外顯子 1 區(qū)的 第 54 位密碼子的多態(tài)性 。 MBL 基因第 54號密碼子存在 GGC/GAC 的變異 ,表現(xiàn)為野生純合子 A/A(GGC/GGC)、雜合子 A/B(GGC/GAC)、變異型純合子 B/B(GAC/GAC)。 PCR 反應(yīng)引物參考文獻設(shè)計。 PCR 反應(yīng)體系： 10擴增緩沖液5ul； 、 dCTP、 dGTP、 dTTP 5ul；上游引物（ 5`— GTAGGACAGAGGCATGCTC3`）、下游引物（ 3`CAGGCAGTTTCCTCTGGAAGG5`） 各 ；耐熱 DNA 聚合酶 ； DNA 模板 。擴增條件為 94℃預變性 3min，其后 94℃預變性 3min、 55℃退火 1min、 72℃延伸 1min，共 35 個循環(huán)，最后 72℃延伸 7min。酶切反應(yīng)體系： 10內(nèi)切酶緩沖液 ，PCR 擴增產(chǎn)物 8ul，加 BanI 酶 ，滅菌去離子水 總體積 混勻， 37℃水浴6 小時。酶切產(chǎn)物用 2%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外投射儀中 觀察記錄并拍照，分析并判斷基因型。 MBL 濃度的測定：所有處于穩(wěn)定的 COPD 病人及對照健康人均經(jīng)禁食及無吸氧 10h 后，于 6:00～ 8: 00AM 肘前靜脈采集外周血標本。血液經(jīng) 4000r/min 離心除去血細胞，所有血清標本保存于 70186。C 待測。采用 MBL 的 ELISA 試劑盒采用固相酶聯(lián)免疫法檢測血清 MBL 的質(zhì)量濃度，在 450nm 紫外線燈下讀吸光值。 五、項目經(jīng)費預算（單位：萬元） 項目經(jīng)費總額 5 萬 申請資助數(shù)額 配套資金數(shù)額 開支明細 經(jīng)費 備注 設(shè)備購置費 0 分析測試費 實驗材料費 購買試劑及使用材料、肺功能測定 差旅費 /調(diào)研費 學術(shù)交流費 出版費 勞務(wù)費 評審驗收費 組織鑒定 管理費 其他費用 合計 自籌經(jīng)費 六、項目研究預計達到的目標 MBL 基因多態(tài)性導致 MBL 表達水平的改變，影響 COPD 患者急性加重。 MBL 基因多態(tài)性導致 MBL 表達水平的改變，但不影響 COPD 患者急性加重次數(shù)。 MBL 基因多 態(tài)性不影響 MBL 表達水平，但影響 COPD 患者急性加重次數(shù)。 MBL 基因多態(tài)性不影響 MBL 表達水平及 COPD 患者急性加重次數(shù)。
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