【正文】 合約 1min。 3）離心 10min（ 3000r/min），取 2mL上清（乙酸乙酯層）至 10mL玻璃管中，于 50℃下氮氣吹干。 4）于此玻璃管加入正己烷 1mL，先將殘留物完全溶解后（若未能完全溶解，可能會導(dǎo)致回收率降低），再加入 2mL 原倍萃取 /清洗液，振蕩 1min。 5）將玻璃試管置于 80℃～ 100℃熱水浴中約 3min， 以減少水相與有機相間的乳化現(xiàn)象。 6）離心 10min（ 3000r/min），吸去上層液（正己烷），棄掉，再吸取下層液（水層）備用。 1）將 AOZ試劑盒從冰箱中拿出，回溫至室溫。 2）取出相應(yīng)數(shù)量的微孔，各個標準液和待測樣品各做 2 個平行樣，做好記錄。 3）于適當?shù)奈⒖字蟹謩e加入 50μ L 標準溶液（ 0， ， ， ， ）。 4）于另外微孔中加入 50μ L已完成前處理的樣品溶液。 5）再于每一微孔中另再加入 100μ L已稀釋的酶標記物。 6）輕敲盤子四周，使其充分混合后于室溫（ 25℃）下避光靜置溫育 50min。 7）微孔中的反應(yīng)液甩掉，再將洗液加滿每一微孔后甩掉，重復(fù)洗3 次。 8）最后一次甩掉后，在吸水紙上拍干。 9）于每一微孔中加入底物溶液 100μ L 后，輕敲盤子四周，使 其充分混合。 10）于室溫（ 25℃）下避光靜置溫育 30min。 11）于每一微孔中加入 100μ L反應(yīng)終止液。 12）用酶標儀于波長 450nm下判讀。 數(shù)據(jù)處理 1）計算（ B/B0） 100 值。用樣品和標準溶液吸光度值（ B）除以零標準吸光度值（ B0）再乘以 100。 2）以（ B/B0） 100 值為縱坐標，以樣品濃度的對數(shù)值為橫坐標，做標準對數(shù)曲線。 3）根據(jù)每個樣品的 B/B0 值就可以從曲線上讀出相對應(yīng)樣品的濃度 2 結(jié)果 標準曲線的繪制 AOZ 標準品的 ELISA檢測結(jié)果見表 1。 試驗過程中的注意事項 1） A 回溫試劑（ 20℃ 24℃）。 B恒溫孵育，避免光線照射。 2）、將足夠標準和樣品所用數(shù)量的孔條插入微孔架，標準和樣品做兩個平行實驗，記錄下標準和樣品的位置。 3）加入 50ul 標準或處理好的樣品液到各自的微孔中，每個孔加入樣品或標準時注意更換移液器的吸頭。 4)加入 50ul 酶標記物溶液（紅帽）到每一個微孔底部，充分混合。 5)加入 50ul 抗體溶液（黑帽）到每一個微孔底部充分混合，在室溫孵育 1 小時，覆蓋上薄膜。 6)倒出孔中的流體將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體。用 250ul樣品洗滌緩沖液充入孔中，重復(fù)兩次。 7)加入 100ul 基質(zhì) /發(fā)色劑到每一微孔中，充分混合并在室溫暗處孵育 15 分鐘。 8）加入 100ul反應(yīng)終止液到每一微孔中，混合好在 450nm 處測量吸光值以空氣為空白，必須在加入停止液后 60 分鐘內(nèi)讀取吸光值。 9）試劑盒內(nèi)容物要完全回穩(wěn)后再進行操作，否則，會出現(xiàn)吸光 值偏低或沒有吸光值。 10）溫浴時若室溫太低或太高，請適當延長或縮短溫浴時間，或直接在恒溫培養(yǎng)箱中進行。 11）加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。 12）加樣和洗板過程中，要避免微孔間的相互污染。 13）整個試驗過程中，勿使微孔干燥。 結(jié)論 本試驗用酶聯(lián)免疫法檢測了海利水產(chǎn)有限公司中呋喃唑酮代謝物AOZ的殘留狀況，結(jié)果表明絕大多數(shù)的水產(chǎn)品符合規(guī)定，只有極少數(shù)部分有殘留。用酶聯(lián)免疫法對蝦肉呋喃唑酮代謝物 AOZ 殘留進行測定，操作簡易，不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，樣品預(yù)處 理簡單，作為一種快速篩選手段，在食品工業(yè)中有著廣闊的推廣應(yīng)用前景，尤其在水產(chǎn)品出口企業(yè)中，但酶聯(lián)免疫試劑盒的價格將是最大的制約因素。 參考文獻： [1]景立新 ,孫武平 ,楊欽德 ,等 .分光光度法快速測定海蝦中呋喃唑酮殘留量 [J].光譜實驗室， 2021(5)： 547549 [2]周新 ,張欣祥 ,王磊 ,等 .UPLCMS/MS 測定魚干中的呋喃唑酮代謝物 [J].分析測試學(xué)報 ,2021,26(9):262263 [3]許蓓 ,徐志祥 ,王鳳俠 ,等 .動物性食品中呋喃唑酮代謝物酶聯(lián)免疫檢測方法 的研究 [J].食品研究與開發(fā) ,2021,28(12):145148 [4]羅杰 ,李健 .呋喃唑酮間接競爭 ELISA(ciELISA)檢測法的建立[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報 ,2021,3,35(20):213218 [5]許春蘭 ,院榕生 ,劉小根 ,等 .酶聯(lián)技術(shù)在水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物 AOZ 的檢測中的應(yīng)用 [J].食品研究與開發(fā) ,2021,28(5):124126 [6]吳富忠 ,歐陽立群 .水產(chǎn)品中呋喃唑酮、呋喃西林藥物殘留的HPLC 法測定 [J].中國衛(wèi)生檢驗雜志 ,2021,16(7):812813 [7]艾曉輝，劉長征，羅玉霜，等 .水產(chǎn)品中呋喃唑酮含量的高效液相色譜檢測法 [J].淡水漁業(yè)， 2021， 33(1)： 810 [8]于慧娟，蔡友窮，畢士川，等 .高效液相色譜法測定水產(chǎn)品中呋喃唑酮的殘留量 [J].色譜， 2021， 23(1)： 114 [9]沈美羅 ,宋紅波 ,耿雪冰，等 .酶聯(lián)免疫法測定水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物 AOZ的殘留 [J].水產(chǎn)學(xué)報， 2021， 30(4)： 520524 [10]焦更生，曹會蘭 .原子吸收法間接測定呋喃唑酮 [J].分析試驗室 ,2021,25(8):8890 第五篇：雙熒光素酶報告基因檢測實驗服務(wù) 雙熒光素酶報告基因檢測實驗服務(wù) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)檢測 細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)（抑制或增強）目的蛋白對已知蛋白的調(diào)控啟動子 /增強子檢測病毒 /細胞相互作用 轉(zhuǎn)錄因子 (IFN NFKB,IRF3)藥物誘導(dǎo)作用或效果各種射線處理對細胞因子的調(diào)控研究【晶萊生物】 傳統(tǒng)檢測方法 —— WBSCI 文章必備數(shù)據(jù)（ IF3,調(diào)節(jié)功能研究）。Westernblotting 得到結(jié)果所需時間太久 .操作過程繁瑣，并且需要使用比較昂貴的抗體 .WB結(jié)果缺乏統(tǒng)計學(xué)依據(jù)。人為影響因素太大 熒光素酶報告基因的優(yōu)點 優(yōu)越的靈敏度，比 Westernbloting 靈敏度高 1000 倍以上。具有可靠的統(tǒng)計學(xué)原理，每組實驗重復(fù)三次。高信號值，無內(nèi)源活性。目前主流檢測方法。檢測快，靈敏度高。 我們并不放棄 WB 檢測，在熒光素酶檢測后，樣品在進行 WB 檢測，使實驗更具有說服力。 使用范圍廣，可檢測細胞內(nèi)任何分子。 熒光素 酶報告基因的檢測原理 原理：制備含有 Luc/Rluc的 DNA載體，進行過表達細胞株。 細胞選擇：根據(jù)實驗需要選擇細胞株，通常選擇轉(zhuǎn)染效率較高的293T,Hela細胞及原代細胞等。 轉(zhuǎn)染：將帶有熒光素酶標記的報告基因和目的基因進行過表達 (不同時間點 ). 提供刺激：一般為藥物處理，病毒感染，紫外照射等各種條件刺激。 蛋白收集：采用進口 /國產(chǎn)試劑盒進行收集，實驗重復(fù)三次。 測量熒光： Modulus?單管型多功能熒光計進行檢測。 服務(wù)內(nèi)容： 供 IFNLuc， IFNLuc， ISRELuc， PRDIILuc， ERSELuc，UPRELuc， NFKBLuc 雙熒光素標記的報告基因，可對 IFNα ,IFNβ ,IRF3,NFKB 等通路檢測。 ： 293T,Hela 及常見的原代細胞等。 3.客戶只需根據(jù)實驗需要提供目的基因、熒光素標記的報告基因、表達細胞即可。 ，結(jié)果分析報告。 做實驗，找晶萊！您的科研生涯，我們一路相伴！ 【平臺項目開展范圍】慢病毒，腺病毒， RNAi 類，分子生物實驗，病理實驗，免疫學(xué)實驗，細胞實驗，動物實驗，蛋白組學(xué)實驗，芯片類實驗，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計指導(dǎo)、基金申請指導(dǎo)、 SCI、核心期刊等服務(wù)。