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2025-08-12 15:06本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】D2500-00&D2501-00&D2502-00加入20ml100%的乙醇;配制瓊脂糖EB凝膠,電泳以分離DNA片段.任何類(lèi)型或等級(jí)的瓊脂糖都可以使用.我們強(qiáng)烈的推薦使用新鮮的TAE/TBE電泳緩沖液.不要重復(fù)使用電泳緩沖液,舊的電泳緩沖液PH會(huì)增加而降低DNA的。注意:DNA在紫外燈下的曝光的時(shí)間不要超過(guò)30秒,同時(shí)在紫外燈下操作的時(shí)候一定要戴保護(hù)眼鏡.則其體積為;加入等倍凝膠體積的BindingBuffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中溫浴7min至。重要提醒:在凝膠完全溶解之后,注意凝膠-BindingBuffer混合物的pH值.如果其pH值大于8的話,DNA的產(chǎn)量將大大。,則意味著核酸的純度>90%.另一方面,如果純化產(chǎn)物的產(chǎn)量較低時(shí),可以用瓊脂糖EB電泳估算產(chǎn)物的濃度.載體
【正文】 . 把柱子裝在一個(gè)干凈的 ,加入 30~50μl洗脫液或滅菌水上柱子膜上 ,10,000g離心 1分鐘 ,離心管中的溶液就是純化的 DNA產(chǎn)物 ,保存于 20度 . 如果再洗脫一次的話可以把殘余的 DNA 洗脫出來(lái) ,不過(guò)那樣的濃度就會(huì)較低 . DNA的產(chǎn)量及質(zhì)量 :把純化產(chǎn)物的樣品稀釋一定的倍數(shù)后 ,分別在 260nm和 280nm下測(cè)其光吸收值 ,回收得到的 DNA的濃度可按以下公式來(lái)計(jì)算 : DNA濃度 =光吸收 26050稀釋倍數(shù) μg/ml長(zhǎng)度大于 500bp的片段通常能純化得到 80%的產(chǎn)量 . 而 50bp~500bp 的帶則可達(dá)到 55%~80%的回收率 .(光吸收 260/光吸收 280)的比率是核酸純度的一個(gè)標(biāo)記 .如果此值,則意味著核酸的純度 90%.另一方面 ,如果純化產(chǎn)物的產(chǎn)量較低時(shí) ,可以用瓊脂糖 EB 電泳估算產(chǎn)物的濃度 .載體
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