一哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)凍存和融合(編輯修改稿)
2024-10-06 02:26 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 含預(yù)冷 Hank’ s液的塑料培養(yǎng)皿中 ， 清洗 23次 。 將清洗后的大腦皮層轉(zhuǎn)到 5 ml離心管內(nèi) ， 參加預(yù)冷的 Hank’ s， 巴氏吸管吹打 ， 直至組織塊完全打散 ， 液體成懸液狀 。 10001200 r/min下離心 10 min左右 。 離心三次 ， 最后一次將 Hank’ s換成 DMEM。 調(diào)整細(xì)胞密度 〔 約 4 105 /ml〕 ， 將細(xì)胞接種在包被有 % PLL的 75 cm3細(xì)胞瓶?jī)?nèi) 〔 培養(yǎng)基為 HDMEM+10% FBS+1%雙抗 〕 。37℃ ， 5% CO2培養(yǎng)三天 ， 第四天換液 。 以后每三天換液 。 第六頁(yè)，共十三頁(yè)。 【 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 】 SD大鼠大腦皮層神經(jīng)類細(xì)胞原代培養(yǎng)第三天時(shí) ，培養(yǎng)皿底部有小局部細(xì)胞開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)；換液后繼續(xù)培養(yǎng)約 6 d左右 ， 細(xì)胞鋪滿皿底 ， 并且出現(xiàn)明顯的分層現(xiàn)象 ， 上層細(xì)胞形態(tài)比較單一 ， 細(xì)胞呈二極或三極狀 ， 主要為未成熟的神經(jīng)元和神經(jīng)前體細(xì)胞；下層細(xì)胞呈鋪展?fàn)?， 細(xì)胞較大 ， 主要為星形膠質(zhì)細(xì)胞 。 將混合培養(yǎng)長(zhǎng)滿皿底的細(xì)胞胰酶消化后重新接種 ， 得到第一代細(xì)胞 ， 并反復(fù)按此方法將細(xì)胞按 1： 3進(jìn)行反復(fù)傳代 34次 ， 因?yàn)樵谟醒鍡l件下神經(jīng)元在體外存活時(shí)間較短且不能分裂 ， 所以隨著細(xì)胞的傳代次數(shù)的增加 ， 神經(jīng)元樣細(xì)胞越來(lái)越少 ， 細(xì)胞形態(tài)也越來(lái)越
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