一哺乳動物細胞的培養(yǎng)凍存和融合(編輯修改稿)
2025-10-06 02:26 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 含預(yù)冷 Hank’ s液的塑料培養(yǎng)皿中 ， 清洗 23次 。 將清洗后的大腦皮層轉(zhuǎn)到 5 ml離心管內(nèi) ， 參加預(yù)冷的 Hank’ s， 巴氏吸管吹打 ， 直至組織塊完全打散 ， 液體成懸液狀 。 10001200 r/min下離心 10 min左右 。 離心三次 ， 最后一次將 Hank’ s換成 DMEM。 調(diào)整細胞密度 〔 約 4 105 /ml〕 ， 將細胞接種在包被有 % PLL的 75 cm3細胞瓶內(nèi) 〔 培養(yǎng)基為 HDMEM+10% FBS+1%雙抗 〕 。37℃ ， 5% CO2培養(yǎng)三天 ， 第四天換液 。 以后每三天換液 。 第六頁，共十三頁。 【 實驗結(jié)果與分析 】 SD大鼠大腦皮層神經(jīng)類細胞原代培養(yǎng)第三天時 ，培養(yǎng)皿底部有小局部細胞開始貼壁生長；換液后繼續(xù)培養(yǎng)約 6 d左右 ， 細胞鋪滿皿底 ， 并且出現(xiàn)明顯的分層現(xiàn)象 ， 上層細胞形態(tài)比較單一 ， 細胞呈二極或三極狀 ， 主要為未成熟的神經(jīng)元和神經(jīng)前體細胞；下層細胞呈鋪展?fàn)?， 細胞較大 ， 主要為星形膠質(zhì)細胞 。 將混合培養(yǎng)長滿皿底的細胞胰酶消化后重新接種 ， 得到第一代細胞 ， 并反復(fù)按此方法將細胞按 1： 3進行反復(fù)傳代 34次 ， 因為在有血清條件下神經(jīng)元在體外存活時間較短且不能分裂 ， 所以隨著細胞的傳代次數(shù)的增加 ， 神經(jīng)元樣細胞越來越少 ， 細胞形態(tài)也越來越
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