免疫原和抗血清的制備概要(編輯修改稿)
2024-10-03 13:54 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 旋渦混合 第十五頁，共四十九頁。 抗體的制備 ? 多 克隆抗體的制備 ? 單克隆抗體的制備 第十六頁，共四十九頁。 第二節(jié) 抗血清的制備 ? 免疫原 +佐劑 → 刺沖動物機體 → 獲得抗血清 ? 一 .動物的選擇 ，太近不易產(chǎn)生良好的抗體，甚至不產(chǎn)生 ：量大，選大動物 量少，選小動物 ： R型〔兔型〕 H型〔馬型〕 ： ? 蛋白質(zhì) Ag大局部動物皆適合，常用家兔、山羊 IgE對綿羊，胰島素對家兔， ? 酶對山羊免疫時不產(chǎn)生 Ab ，酶多用豚鼠 ： 雄性 稚齡、健康、正常、無感染 第十七頁，共四十九頁。 二、免疫前準(zhǔn)備 ? ： 3d ，觀察是否健康、正常、無感染 ? ：耳靜脈取血 ? 第十八頁，共四十九頁。 二、免疫劑量、時間和途徑選擇原那么： ：大動物 小動物 1〕免疫劑量不要過大， Ag過量，易產(chǎn)生免疫抑制 2〕第一次免疫劑量要小，屢次免疫后可加大劑量 3〕選擇適宜的免疫劑量，要根據(jù) Ag性強弱，分子量大 小，動物大小，免疫時間而定。 ： 1〕間隔時間短，易產(chǎn)生免疫抑制 一般第 2次間要有 1020d， 2次以后 710d 2〕半抗原間隔時間長 ：多點注射，〔足掌、腋窩 L結(jié)周圍，背部兩側(cè)，頜下，耳 后皮內(nèi)或皮下注射〕 Ag珍貴，采取微量注射法 第十九頁，共四十九頁。 免疫程序： ? ? 第二十頁，共四十九頁。 試血 ，從耳靜脈取血 別離血清 第二十一頁，共四十九頁。 三 .動物采血法： ? 抗血清鑒定 采血前，禁食動物 24h，防止血脂過高 末次免疫后， 57d之內(nèi)采血。否那么抗血清效價 ↓ ：適于兔、羊 ：適于小動物 免：耳中央 V 100ML 羊：頸 V 15002024ML 小鼠：斷尾或摘除眼球2ML 抗血清別離，滅活 56℃ 30min 第二十二頁，共四十九頁。 第三節(jié) 抗血清的鑒定和保存 ? 一、抗血清的鑒定： 免疫成功， Ab較純 ，含有雜 Ab 免疫不成功 ：免疫雙擴(kuò)散法 ：免疫雙擴(kuò)散法 Ab稀釋法：不稀釋 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 Ag ∴ 1/32作為 Ag效價 Ag+Ab AgAb K值 1091011L/mol之間 K值大， AgAb結(jié)合力大 K值小， AgAb結(jié)合力小 第二十三頁，共四十九頁。 二、抗血清其他鑒定方法 ： 三、抗血清的保存： 1. 4℃ 無菌處理，防腐液體狀態(tài) 36月 ℃ 40℃ 度冰凍保存 5年小包裝 510年 第二十四頁，共四十九頁。 第四節(jié) 抗血清中抗體的純化 ? 目的：除去雜 Ab 除去雜 Ab 1〕吸附劑法 2〕親和層析 IgG抗體的制備： 1〕鹽析法粗提 V－球蛋白 不同飽和度的〔 NH4〕 2SO4或 Na2SO4 2〕離子交換層析法提取 IgG： 常用 DEAE纖維素 IgG帶正電荷，其他 pro帶負(fù)電荷 3〕親和層析法提取特異性 IgG 4〕酶解法制備 F〔 ab〕 2片段 第二十五頁，共四十九頁。 第五節(jié) 單克隆抗體及基因工程抗體 ? 一、單克隆抗體： ? 淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù) ? 單克隆抗體 ? 單克隆與多克隆抗體比較 ? 用途 ? 二、基因工程抗體 第二十六頁，共四十九頁。 一、單克隆抗體 ? 淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù) (kohler milstein) 淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)： 75年才創(chuàng)立的技術(shù)，將在體外不能長期生存的免疫細(xì)胞與在體外能迅速增殖的骨髓瘤細(xì)胞在聚乙二醇的作用下融合產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，所得雜交瘤細(xì)胞繼承了兩種細(xì)胞的能力，即保存了瘤細(xì)胞在體外迅速增殖傳代的能力，又繼承了免疫細(xì)胞合成與分化的能力，淋巴細(xì)胞主要 T細(xì)胞、 B細(xì)胞 (T細(xì)胞與胸腺瘤細(xì)胞融合，可產(chǎn)生分泌淋巴因子的 T細(xì)胞雜交瘤 )B細(xì)胞與 瘤細(xì)胞融合，產(chǎn)生能分泌特異抗體的 B細(xì)胞雜交瘤。 第二十七頁，共四十九頁。 單克隆抗體：
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