hpv21分型產(chǎn)品操作培訓(xùn)(編輯修改稿)
2025-03-18 08:19 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 裂解時(shí)間。若有蛋白酶 K，則在 56℃ 下裂解直至消化完全，若無(wú)蛋白酶 K則在 100℃ 下裂解直至消化完全。 （ 2）以下與常規(guī)提取相同。 匹基、 達(dá)安等都是使用直接煮沸法提取的 DNA，這樣的 DNA純度較差，對(duì)于凱普 HPV檢測(cè)中的 PCR擴(kuò)增過(guò)程會(huì)產(chǎn)生抑制，所以不能使用。 使用過(guò)柱法試劑盒，比如 QIAGENE提取的 DNA，可以保證其 DNA的純度及濃度，可以使用。 提取 DNA質(zhì)量要求 PCR試劑的制備 ? 1 PCR試劑存放在 20℃ 中避光保存，避免反復(fù)凍融試劑。 ? 2 配制時(shí)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)上的比例和量進(jìn)行混合分裝。 ? 3 試劑準(zhǔn)備區(qū)中進(jìn)行，充分解凍試劑并且點(diǎn)動(dòng)離心后，方可吸取混勻 ? 4 酶與 PCRmix要充分混勻。 ? 5 分裝和加樣時(shí)，不可使用有粉橡膠手套，一般僅能佩戴 薄膜手套 。 ? 6 PCR小管及其他實(shí)驗(yàn)耗材不可長(zhǎng)時(shí)間置于紫外燈下照射，否則會(huì)抑制 PCR擴(kuò)增。 ? 7 有條件的客戶，要對(duì)離心管、移液器吸嘴進(jìn)行高壓滅菌，包裝完整的 PCR小管可直接使用。 ? 8 注意對(duì)移液器的保養(yǎng)，移液器使用后應(yīng)及時(shí)調(diào)回最大量程，并定期進(jìn)行校準(zhǔn)，防止量程偏大或者偏小。 ? 9 加樣時(shí)，盡量做到加完一個(gè)樣，立即關(guān)蓋，再加下一個(gè)樣。加樣完畢后，點(diǎn)動(dòng)離心，清除氣泡。 PCR試劑的制備 擴(kuò)增區(qū) PCR儀的質(zhì)量要求 最好選用進(jìn)口 PCR儀 PCR儀的擴(kuò)增速率不能太高，擴(kuò)增儀的擴(kuò)增速率最好保證 1℃ /s 沒(méi)有熱蓋的 PCR儀要注意加樣后再加一滴礦物油 儀器運(yùn)行的房間一定要打開(kāi)空調(diào) ① 蠕動(dòng)泵損壞 啟動(dòng)蠕動(dòng)泵后聽(tīng)不到蠕動(dòng)泵運(yùn)轉(zhuǎn)的聲音，請(qǐng)送修 。 ② 排液管粘連 這種情況一般出現(xiàn)在新儀器第一次使用或儀器閑置太久后第一次使用。當(dāng)啟動(dòng)蠕動(dòng)泵后聽(tīng)到儀器內(nèi)部有類似“啪啪”的聲音，可判斷是排液管粘連 。 解決方法是：在反應(yīng)室內(nèi)注入水，然后啟動(dòng)蠕動(dòng)泵直到排水即可。 ③排液管堵塞 主要是實(shí)驗(yàn)后清洗不徹底，或使用時(shí)間較久后，實(shí)驗(yàn)液體中的化學(xué)物質(zhì)殘留于排液管內(nèi)形成結(jié)晶物，堵塞了排液管導(dǎo)致不能排液，其現(xiàn)象特征是啟動(dòng)蠕動(dòng)泵后，有蠕動(dòng)泵正常運(yùn)轉(zhuǎn)的聲音，但沒(méi)有液體排出。 解決方法：在反應(yīng)室內(nèi)加蒸餾水 ,升溫至 65℃ 并保持幾分鐘 , 使結(jié)晶物溶化 ,然后排液。反復(fù)幾次使排水管暢通。如若仍不能排液則需要拆出排液管來(lái)清洗或更換排液管。 雜交前配件安裝問(wèn)題解決方法 ④ 密封不良 A 配件組裝不良 多孔板及分隔膜、硅膠圈沒(méi)有放好，形成空隙，造成整個(gè)系統(tǒng)不密封 , 建議重新放置。 B 多孔板問(wèn)題 多孔板因跌落或其他原因造成變形，也會(huì)造成密封不良。另外由于多孔 板加工精度的限制，多孔板的厚度并不完全均勻，在放入反應(yīng)室時(shí)，放置的面或方向不同都會(huì)造成排液速度的變化，有時(shí)甚至?xí)鹋乓郝默F(xiàn)象，如果是這種情況可把多孔板翻轉(zhuǎn)一下。
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