11dna重組技術的基本工具1(編輯修改稿)
2025-03-17 16:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 生物在長期演化過程中 ,含有某種限制酶的細菌 ,其 DN A 分子中或者不具備這種限制酶的識別切割序列 ,或者通過甲基化酶將甲基轉移到所識別序列的堿基上 ,使限制酶不能將其切開。這樣 ,盡管細菌中含有某種限制酶也不會使自身的 DNA 被切斷 ,并且可以防止外源 DNA的入侵。 3 . 你 能用圖示表示出 E co R Ⅰ 限制酶是如何切割 DN A 片段的嗎 ? 提示 :如下圖 : 二、基因工程的三種工具 活動與探究 1 . 切割 DNA 的工具是什么 ? 其作用特性是什么 ? 提示 :限制性核酸內(nèi)切酶。限制性核酸內(nèi)切酶能夠識別雙鏈 DNA分子的某種特定核苷酸序列 ,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開 ,因此具有專一性。 2 . 限制酶切割 DN A 時斷開的是哪種化學鍵 ? 切割后產(chǎn)生的 DN A 片段末端通常有哪兩種形式 ? 如何區(qū)分它們 ? 提示 :限制酶切割的是核苷酸之間的磷酸二酯鍵 ,而不是堿基對之間的氫鍵。 DNA 分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的 DNA 片段末端通常有兩種形式 —— 黏性末端和平末端。當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側將 DNA 的兩條鏈分別切開時 ,產(chǎn)生的是 黏性末端 ,而當限制酶在它識別序列的中心軸線處切開時 ,產(chǎn)生的則是平末端。 2. DNA連接酶 —— “分子縫合針” DNA連接酶 可把黏性末端 之間的縫隙“縫合 ”起來，即把梯子兩邊扶手的斷口連接起來，這樣一個重組的 DNA分子就形成了。 3 . 將切下來的 DN A 片段拼接成新的 DNA 分子要依靠哪種酶來連接 ? 連接后形成哪種化學鍵 ? 提示 : DN A 連接酶 ,它通過恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵而將雙鏈 DNA 片段 “ 縫合 ” 起來。 4 . 常用的 DN A 連接酶有哪兩類 ? 它們的來源和性質有什么差別 ? 提示 : DN A 連接酶有兩類 : E co li DN A 連接酶和 T4 D NA 連接酶。E co li DN A 連接酶是從大腸桿菌中分離得到的 ,只能連接黏性末端 ,而T4 DNA 連接酶是從 T4 噬菌體中分離出來的 ,既可連接黏性末端 ,又可連接平末端。 5 . DNA 連接酶與 DN A 聚合酶是一回事嗎 ? 為什么 ? 提示 :兩者不是一回事 ,它們的主要差別表現(xiàn)在 : ( 1 ) DNA 聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的 DNA 片段的 339。 末端的羥基上 ,形成磷酸二酯鍵 。而 DNA 連接酶是在兩個 D NA 片段之間形成磷酸二酯鍵 ,不是在單個核苷酸與 DNA 片段之間形成磷酸二酯鍵。 ( 2 ) DNA 聚合酶是以一條 DNA 鏈為模板 ,將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的 DNA 鏈 。而 DNA 連接酶是將 DNA 雙鏈片段上的缺口連接起來。因此 DNA 連接酶不需要模板。 ? 外源基因 (如抗蟲基因 )怎樣才能導入受體細胞 (如棉花細胞 )？ 導入過程需要運輸工具 —— 運載體 。 ? 運載體的作用有哪些？ 作用一 ：作為運載工具，將外源基因 (抗蟲基因 )轉移 到受體細胞 (棉花細胞 )中去。 作用二： 利用運載體在受體細胞 (棉花細胞 )內(nèi)， 對外源基因 (抗蟲基因 )進行 大量復制 。 作為運載體必須具備哪些條件？ 1）能夠在宿主細胞中 復制 并穩(wěn)定地 保存 。 2）載體 DNA必須有一個或多個 限制酶切點 ，以便目的基因插入
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