液相色譜手性物質(zhì)分離工作總結(jié)(編輯修改稿)
2025-03-16 11:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 drogen bond 聚合物固定相的手性化合物拆分作用力 纖維素和直鏈淀粉的空間結(jié)構(gòu) Cellulose Amylose （rigid linear） （helical） O OOHOHHOnOOHOnOHOHOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO 柱 型 號 固定相，官能團 拆分化合物類型 Chiralpak OD Cellulose1 （ phenomenex） 纖維素三（ 3,5二甲苯基氨基甲酸酯） 含有 芳香基、酰胺基、羰基、硝基、氨基、磺酰基、氰基、羧基、羥基 等化合物的分離，及具有 不對稱點的位阻大的化合物 的分離 Chiralpak AS 淀粉三 [（ S） α甲基苯基氨基甲酸酯 ] Chiralcel AD 淀粉三（ 3,5二甲苯基氨基甲酸酯） Chiralcel OJ 纖維素三（ 4甲基苯基甲酸酯） Chiralpak IA 淀粉三（ 3,5二甲基苯基氨基甲酸酯） Chiralpak IC 纖維素三（ 3,5二氯苯基氨基甲酸酯） 市售常用的手性色譜柱： Daicel的“四大金剛”及新型的鍵合相系列， Phenomenex的 Cellulose1 三 .液相手性拆分方法流程 液相手性方法開發(fā)的基本配置： 液相部分：四元泵， DAD檢測器 手性色譜柱若干（ 150mm*， 5um） 柱選擇器（最好帶溫控） 流動相 :涂敷型： Hexane, Heptane, EtOH, IPA， ACN， MeOH（少量混合使用） 添加劑： TFA， MSA， ESA(離子對 ),DEA， MEA， (HAC， HCOOH,丁胺 ) 常備的配置的流動相（ 14種）： Hexane, Hexane(%TFA), Hexane(%DEA), Hexane(5%EtOH,%MSA), Hexane(5%EtOH,%MEA) EtOH, EtOH(%TFA), EtOH(%DEA) IPA, IPA(%TFA), IPA(%DEA), ACN， MEOH 流動相：鍵合型（ 8種） THF， MtBE， CHCl3， CH2Cl2 乙酸乙酯， 1,4二氧環(huán)乙烷，丙酮 , 甲苯（紫外吸收強） 方法步驟： ? 了解待分離化合物樣品結(jié)構(gòu)信息 ? 了解化合物反相色譜信息 ? 樣品前處理 ? 選擇合適的手性固定相（手性分析柱） ? 優(yōu)化流動相，柱溫 ? 了解待分離化合物樣品結(jié)構(gòu)信息： 手性方法建立的第一步為檢查待測物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，盡可能地獲取樣品的如下信息 —— 在不同溶劑中的 溶解性 。形成氫鍵、 π 鍵或者偶極相互作用的能力；是否有極性官能團（是否含 氨基 NH羧基 COOH或者既含酸性基團又有堿性基團）；手性中心附近 有無大的剛性取代基 ； 紫外光譜 可否檢測， 酸堿是否穩(wěn)定 等。諸如此類的樣品結(jié)構(gòu)信息對預(yù)判手性分離能力及手性固定相的選擇有較大的幫助作用。 ? 了解樣品反相色譜信息： 如果合成人員提供反相色譜信息，可以知道其 樣品的純度 。也可以根據(jù)流動相條件來確定手性分離中 烷烴與醇的比例， 甚至依此判定以及 是否需要添加酸堿添加劑 。 ? 樣品前處理： 1. 1~2mg EtOH， MeOH溶解。 2. 如難溶，且為鹽，加入酸堿添加劑助溶。酸堿總濃度不要大于 1%，且要有空白對照。 3. 也可以先以少量 DMSO， DMF， CHCl2溶解，然后再用流動相稀釋至不析出為止。 4. 如果樣品紫外吸收很弱，則需加大樣品濃度至 10mg/ml. 5. 無紫外吸收，換檢測器： ELSD或 MS，或者讓合成人員接生色基團。 6. 過濾進樣。 ? 選擇合適的手性柱： 從手性固定相對樣品的通用性，適應(yīng)范圍考慮。如果是制備服務(wù)，在選擇手性柱時還應(yīng)考慮柱容量（柱樣品荷載量）。 各商品化的手性柱使用順序大致為： IA（或 ADH） ,IC， ODH， ASH， OJH ? 流動相條件優(yōu)化 以無水乙醇 /正己烷為初始流動相，比例通過調(diào)整流動相中醇的含量或者改變醇的種類來增強對映體分離選擇性。如果酸堿樣品只有部分分離、沒有分離或者峰形差、不出峰，可在流動相中添加 有機酸、堿等改性劑來優(yōu)化分離。 涂敷型 中性： Hexane： EtOH=70： 30(V/V%)，流速： 酸性：含有 COOH，加入 TFA 堿性：含有 NH2， NH加入 DEA，如峰形沒有改善，可加 入叔丁胺或者 MEA 酸堿基團都有：加入 TFA，或者 T
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