免疫原和抗血清的制備多媒體(編輯修改稿)
2025-02-06 21:57 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 生示意圖 多克隆抗體 (polyclonal antibody,pcAb)： 天然抗原刺激多種 B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的多種抗體的混合物 ? 抗原來源與動(dòng)物種屬的關(guān)系 種屬差異越遠(yuǎn)，免疫原性越強(qiáng) 動(dòng)物個(gè)體的選擇 適齡、健康、體重符合要求 抗原的性質(zhì) 一、免疫動(dòng)物的選擇 ? 免疫原的劑量 中間劑量范圍內(nèi)，免疫原劑量增加可獲得高效價(jià)抗體 免疫間隔時(shí)間 第一次和第二次間隔 10～ 20天，三次及以后間隔 7～ 10天 免疫途徑 皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、淋巴結(jié) 二、免疫程序 ? 頸動(dòng)脈采血法： 家兔、綿羊、山羊 心臟采血法： 家兔、豚鼠、大鼠、雞 靜脈采血法： 家兔、山羊、綿羊 三、動(dòng)物采血法 ? 第四節(jié) 抗血清的鑒定和保存 ? 抗體特異性的鑒定： 雙向免疫擴(kuò)散法 抗體效價(jià)的鑒定： 凝集試驗(yàn) 、雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、 ELISA 抗體純度的鑒定： SDSPAGE 、雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫電泳 抗體親合力的鑒定： 平衡透析法、 ELISA、 RIA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn) 一、抗血清的鑒定 ? 2℃ ～ 8℃ 保存：短期保存 冰凍保存：保存 5年 真空干燥保存：保存 5～ 10年 二、抗血清的保存 ? 第五節(jié) 抗血清的純化 抗原免疫動(dòng)物制備的抗血清是成分復(fù)雜的混合物，除含有特異性抗體外，還存在與目的抗體不相關(guān)的成分。純化目的是除去這些不相關(guān)成分，防止抗血清中其他雜抗體干擾試驗(yàn)結(jié)果。 ? 鹽析法： 硫酸銨鹽析法、硫酸鈉鹽析法 凝膠過濾法： 常結(jié)合鹽析法 離子交換層析法： DEAE纖維素、 QAEsephadex、 QAE纖維素 親和層析法： 純化抗原或 SPA交聯(lián) Sepharose 4B制成親和層析柱 一、特異性 IgG抗體 ? 親和層析法： 雜抗原交聯(lián) Sepharose 4B柱 吸附劑方法： 借助雙功能試劑用不含特異抗原的抗 原混合液制成固相吸附劑 二、單價(jià)特異性抗血清 ? 1．什么是免疫原？ 2．如何制備可溶性抗原？ 3．常用的細(xì)胞破碎方法有哪些？ 4．連接半抗原的載體有哪些？制備半抗原性免疫原的方法有哪些？ 5．純化抗原的鑒定包括有哪些內(nèi)容？ 6．什么是免疫佐劑？免疫佐劑有哪些種類？免疫佐劑的作用機(jī)制有哪些？ 7
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