園林植物遺傳育種學(xué)第八章分子育種(編輯修改稿)
2025-01-23 11:50 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 Vir 區(qū) Con 區(qū) Ori 區(qū) Vir 區(qū) LB RB E Ti Plasmid TDNA區(qū) Ori 區(qū) Con 區(qū) Vir 區(qū)操縱子的基因結(jié)構(gòu)與功能 ? Vir區(qū)是一段長(zhǎng)度為 35KB操縱子 ? 包含六個(gè)基因： VirA、 VirB 、 VirC 、 VirD 、 VirE 、 VirG。 核心區(qū) 左邊界 右邊界 TDNA的結(jié)構(gòu)與功能 ∶ LB RB LB RB 植物遺傳轉(zhuǎn)化的載體系統(tǒng) 一元載體（順勢(shì)載體） 雙元載體（反式載體） 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的構(gòu)建 P G2 T NOS Ampr P G1 T 目的基因 報(bào)告基因，選擇標(biāo)記基因 Vir區(qū) LB RB 農(nóng)桿菌導(dǎo)入方法 ? 共培養(yǎng)法 ? 葉盤轉(zhuǎn)化法 ? 整株感染法 ? 原生質(zhì)體共培養(yǎng)法 基因槍介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因操作 ?基本原理 ?操作步驟 ?優(yōu)點(diǎn) ?影響轉(zhuǎn)化效率的因素 BioRad Biolistic DS1000/He and Hepta System BioRad Biolistic DS1000/He and Hepta System 操作步驟 1. 預(yù)培養(yǎng) 2. 轉(zhuǎn)基因操作 3. 轉(zhuǎn)基因植株篩選和培養(yǎng) 4. 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定 5. 田間釋放 影響轉(zhuǎn)化效率的因素 1. 金屬微粒 2. DNA沉淀輔助劑 3. DNA純度和濃度 4. 微彈速度 5. 植物材料 基因槍法的優(yōu)點(diǎn) 1. 無宿主限制； 2. 靶受體類型廣泛； 3. 可控度高； 4. 操作簡(jiǎn)便。 問題： 1. 轉(zhuǎn)化效率低； 2. 嵌合體多； 3. 穩(wěn)定性差，瞬時(shí)表達(dá)； 4. 外源基因沉默； 5. 整合機(jī)理不詳。 PEG誘導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)化 聚乙二醇（ PEG）、多聚鳥苷酸、磷酸鈣在高 PH值條件下誘導(dǎo)原生質(zhì)體撲獲DNA分子。 步驟： 1. 共保溫； 2. 稀釋 PEG； 3. 非選擇培養(yǎng)； 4. 選擇培養(yǎng)。 優(yōu)點(diǎn)： 1. 轉(zhuǎn)
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