電離輻射的生物效應2(編輯修改稿)
2025-01-16 04:45 本頁面
【文章內容簡介】 防非核酸類成分干擾 提取 DNA過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤干等辦法進行無核酸酶化處理。 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。 試劑和主要儀器 一、試劑： 細胞裂解液 1 10mmol／ L Tris， pH lmmol／ L EDTA， ％ TritonX100 細胞裂解液 II(用時新鮮配制 ) 細胞裂解液中加入蛋白酶 K ／ml(終濃度 ) 熒光緩沖液 10mmol／ L Tris， 10mmol／ L EDTA， 100mmol／ L NaCl DAPI貯存液 1mg/L DAPI ? 注 *： DAPI可能是致癌劑。吸入、吞食或經(jīng)皮膚吸收均有害。配制試劑時應戴手套，勿吸入粉塵。 白細胞稀釋液 ： 2%冰醋酸 二、主要儀器 熒光分光光度儀 實驗步驟 動物分組與照射 ： 雄性健康昆明小鼠 20只，體重 20g左右。隨機分為假照射對照組， ， 射線全身照射組。 制備胸腺細胞單細胞懸液 照射后 12h，采用頸椎脫臼法處死小鼠，取仰臥位，剪開胸前皮膚和肌肉，用鑷子分離并迅速取出胸腺，剔除周圍結締組織（注意觀察比較照射組小鼠與假照組小鼠胸腺的差別），放入平皿中，用小試管或毛玻片輕輕研磨。制備單細胞懸液，調節(jié)細胞濃度為 1 107細胞 /ml。 DNA的提取與分離 5106個細胞 、 5min 加細胞裂解液 I 100ul 4186。C， 30min（冰箱） 1600rpm離心， 20min 個細胞洗二次 、加細胞裂解液， （冰箱）離心， 上清 （片段化 DNA） 沉淀 加細胞裂解 I 100ul 1600rpm離心， 20min 混合 200ul 上清（片段化 DNA）完整 DNA 上清上
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