廣西地方標(biāo)準(zhǔn)常見淡水養(yǎng)殖魚類疾病診治技術(shù)規(guī)范第3部分：疾病防治用藥藥效檢驗(yàn)征求意見稿(編輯修改稿)
2024-09-20 11:27 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ℃保存?zhèn)溆??！?營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板用干粉培養(yǎng)基制備成普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，℃高壓滅菌20 min后，4℃保存?zhèn)溆谩? 百倍母液制備 試劑除菌 μm微孔濾膜過濾除菌，稀釋劑高壓滅菌除菌。 儲(chǔ)存液制備 藥物稱量 mg分析天平精確稱量含有效成分1 000 mg的藥物，置于1 L燒杯中。示例1： 某廠家生產(chǎn)的某品牌含量10%氟苯尼考，稱量時(shí)，準(zhǔn)確稱取10 g，置于1 L燒杯中?！?藥物預(yù)溶按稱量藥物重量的3倍加預(yù)溶劑到燒杯中，充分?jǐn)嚢枞芙??！?儲(chǔ)存液定容向加入容量瓶加入蒸餾水稀釋，最后定容1 000 mL，過濾冷藏可儲(chǔ)存7 d。 百倍母液稀釋另取一個(gè)500 mL燒杯，加入100 mL蒸餾水，用移液器精確吸出10 mL蒸餾水，再用移液器精確吸取定容儲(chǔ)存液10 mL加入燒杯充分混勻?！?MIC范圍篩選 梯度藥液配備參照GBT 。取10支試管，第1管加入10 mL普通肉湯培養(yǎng)基，第2～10管分別加入4 mL普通肉湯培養(yǎng)基。第1管吸出2 mL培養(yǎng)基，加入2 mL百倍母液混勻，吸出2 mL棄掉，吸4 mL加入第2管混勻，再吸4 mL加入第3管混勻，以此類推到第8管；第8管混勻后吸出4 mL棄掉，配置成20 μg/mL、10 μg/mL、5 μg/mL、 μg/mL、 μg/mL、 μg/mL、 μg/ μg/mL8個(gè)梯度藥液。第9管和第10管不加藥物，第9管作細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)照，第10管作無菌控制對(duì)照。注： 配置磺胺類藥物的梯度濃度時(shí)， mL培養(yǎng)基， mL儲(chǔ)存液混勻，吸出2 mL棄掉，吸4 mL加入第2管混勻，再吸4 mL加入第3管混勻，以此類推到第8管；第8管混勻后吸出4 mL棄掉，配置成512 μg/mL、256 μg/mL、128 μg/mL、64 μg/mL、32 μg/mL、16 μg/mL、8 μg/mL和4 μg/mL8個(gè)梯度藥液。 菌懸液制備取經(jīng)配套營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板新鮮培養(yǎng)的待檢菌株，%無菌生理鹽水洗到已滅菌的試管中，%108 CFU/mL。菌液濃度用麥?zhǔn)媳壬苄Ｕ?。?菌液接種菌液制備好后，應(yīng)在≤15 min加入第1～9管試管中，第10管不加。菌液接種后的最終濃度為5105 CFU/mL。菌液濃度用麥?zhǔn)媳壬苄Ｕ?。?孵育菌液接種后，于28℃生化培養(yǎng)箱孵育24 h?！?結(jié)果觀察取出試管觀察：試管中液體澄清為無菌生長(zhǎng)、半渾濁為少量菌生長(zhǎng)、渾濁為大量菌生長(zhǎng)，細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)照管渾濁、無菌控制對(duì)照管澄清。記錄試管中液體澄清的最小藥液濃度和半渾濁的藥液濃度?！?MIC測(cè)定根據(jù)最小藥液濃度和半渾濁的藥液濃度配置梯度藥液，讀取并記錄最小抑菌濃度（MIC）。 μg/mL~2 μg/mL范圍內(nèi)，試驗(yàn)有效?！?抑菌圈測(cè)定 菌板制備取上述菌懸液100 μL，注入營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，用三角
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1