廣西地方標準牛支原體的檢測多重聚合酶鏈反應(yīng)法征求意見稿編制說明(編輯修改稿)
2025-09-16 18:51 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 一）在檢測方法研制方面的工作情況廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所自2008年開展國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）專項“邊境地區(qū)動物疫病預(yù)防控制技術(shù)體系研究”項目研究以及廣西基本業(yè)務(wù)費“牛呼吸道疾病綜合征病原學(xué)調(diào)查及快速檢測方法的建立”等項目以來，在牛支原體相關(guān)研究上取得了以下研究成果：① 進行牛支原體流行病學(xué)調(diào)查，掌握了廣西地區(qū)牛感染支原體的種類、感染率、宿主易感年齡、感染季節(jié)等流行病學(xué)資料。② 優(yōu)化支原體培養(yǎng)基配方，縮短了支原體的分離培養(yǎng)時間。③ 牛支原體的快速檢測：基于opp D/F基因建立的牛支原體快速PCR檢測方法，敏感性高，特異性好，只需一次擴增即可獲得檢測結(jié)果，能很好地與曾同牛支原體歸為一個種, 也能感染牛群, 二者16S RNA 基因同源性很高的無乳支原體進行區(qū)分，在臨床檢測牛支原體上具有更好的應(yīng)用性。④ 無乳支原體的快速檢測：基于P 80/F建立的無乳支原體快速PCR檢測方法，敏感性高，特異性好，只需一次擴增即可獲得檢測結(jié)果，能很好地區(qū)分牛支原體，在臨床上應(yīng)用取得了良好的效果。⑤ 牛支原體多重PCR方法的建立：根據(jù)牛支原體opp D/F基因和無乳支原體P 80/F基因，設(shè)計合成兩對特異性引物，進行牛支原體和無乳支原體的臨床檢測。PCR擴增長度分別為448 bp和375 bp，通過反應(yīng)條件的優(yōu)化以及特異性試驗、敏感性試驗、重復(fù)性試驗及擴增片段序列測定的驗證，證實該方法可以快速便捷檢測牛支原體及無乳支原體，并進行有效區(qū)
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