第四章(質(zhì)粒載體)(編輯修改稿)
2025-09-11 20:32 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 (1)天然質(zhì)?？截悢?shù)的控制 ? (2)雜種質(zhì)?？截悢?shù)的控制 ? 4．質(zhì)粒復(fù)制控制的分子模型? (1)抑制蛋白質(zhì)稀釋模型 ? (2)自體阻遏蛋白質(zhì)模型質(zhì)粒 DNA的復(fù)制與拷貝數(shù)的控制 ? 1．質(zhì)粒 DNA復(fù)制的多樣性? (i) 對寄主酶的依賴性? (ii) DNA聚合酶的利用? (iii) 復(fù)制的方向性? (iv) 復(fù)制的終止? (v) 復(fù)制 型? 2． ColE1質(zhì)粒 DNA復(fù)制的啟動? 3．質(zhì) 粒 DNA拷貝數(shù)的控制? (1)天然質(zhì)?？截悢?shù)的控制? (2)雜種質(zhì)?？截悢?shù)的控制Co1El、 pSCl 01及其雜種質(zhì)粒 pSCl34的 DNA復(fù)制 4．質(zhì)粒復(fù)制控制的分子模型? (1)抑制蛋白質(zhì)稀釋模型? (2)自體阻遏蛋白質(zhì)模型質(zhì)粒 DNA復(fù)制控制的抑制蛋白質(zhì)稀釋模型質(zhì)粒 DNA復(fù)制控制的自體阻遏蛋白質(zhì)模型第三節(jié)質(zhì)粒載體的 構(gòu)建? 1．天然質(zhì)粒用作克隆載體的局限性 ? 2．質(zhì)粒載體必須具備的基本條件 ? 3．質(zhì)粒載體的選擇記號? 4．不同類型的質(zhì)粒載體? (1)高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體 ? (2)低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體 ? (3)失控的質(zhì)粒載體 ? (4)插入失活型的質(zhì)粒載體 ? (5)正選擇的質(zhì)粒載體 ? (6)表達(dá)型的質(zhì)粒載體1． 天然質(zhì)粒用作克隆載體的局限性? 天然質(zhì)粒有 Co1E RSF2124和PSCl01等。天然質(zhì)粒的局限性：如質(zhì)粒的分子量較大，拷貝數(shù)較低，只有一個抗菌素抗性基因，無法使用插入失活技術(shù)選擇重組體分子 等。 2．質(zhì)粒載體必須具備的基本條件? (i)具有復(fù)制起點(diǎn)? (ii)具有可 選擇的標(biāo)記? (iii)具有若干限制酶單一識別位點(diǎn)? (iv)具有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)? (v)作為表達(dá)載體還有啟動子 ， 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)移信號，終止子序列等片段。3．質(zhì)粒載體的選擇記號? 在基因克隆中采用的質(zhì)粒載體的選擇記號，有新陳代謝特性、對大腸桿菌素 E1 的免疫性，抗菌素抗性等。使用抗菌素抗性記號有四環(huán)素抗性、氨芐青霉素抗性、鏈霉素抗性，卡那霉素抗性等正選擇質(zhì)粒載體 PKN80的形體 圖4．不同類型的質(zhì)粒載體? (1)高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體? (2)低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體? (3)失控的質(zhì)粒載體? (4)插入失活型的質(zhì)粒載體? (5)正選擇的質(zhì)粒載體? (6)表達(dá)型的質(zhì)粒載體? 復(fù)制基因 (replicator)? 選擇性記號? 克隆位點(diǎn)? 基因克隆質(zhì)粒載體的三種組成二、構(gòu)建載體的一般程序? ? 純化 DNA片段? ? ? ? DNA序列分析 第四節(jié)重要的質(zhì)粒載體? 一 .大腸桿菌質(zhì)粒載體? 1． pSCl01質(zhì)粒載體 ? ? 2． Co1E1質(zhì)粒載體
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