【文章內容簡介】 rnal of chromatography A, 985(2003):503512十一、主要研究內容（不少于800字）本課題旨在分析試驗卷煙主、側流煙氣中中草藥化學成分群和苯并[a]芘及煙草特有N亞硝胺的動態(tài)作用；選擇合適的可量化指標，對該動態(tài)作用進行表征；初步闡明中草藥降低卷煙危害的機理，主要研究內容如下： 中草藥化學成分群的分類及供試樣的提取制備； 中草藥化學成分群代表單體阻斷兩類有害成分生成簡單模型建立（見模型A、B）； 中草藥化學成分群阻斷兩類有害成分生成模型建立； 在3完成的基礎上進行有效降害中草藥化學成分群的篩選； 有效降害中草藥化學成分群色譜質量控制譜圖的建立； 添加了有效降害中草藥化學成分群的試樣煙的制備； 對照卷煙與試驗卷煙單口主、側流煙氣中有中草藥化學成分群的檢測； 對照卷煙與試驗卷煙單口主、側流煙氣中苯并[a]芘的檢測；對照卷煙與試驗卷煙單口主、側流煙氣中煙草特有N亞硝胺的檢測；對照卷煙與試驗卷單口主、側流煙氣中兩類有害成分同時分析方法的建立；中草藥化學成分群與試驗卷煙中有害物質的相關性研究；1中草藥化學成分群降低卷煙危害作用的機理闡述。主要的技術路線： 有效降害中草藥成分群篩選線路圖（圖1）； 兩類有害物質分析方法線路圖（圖圖3）。圖1 有效降害中草藥成分群篩選線路圖藥 材苷 類酚 類萜 類酚酸類生物堿類色譜分析色譜分析色譜分析篩選模型色 譜 分 析色譜分析色譜分析有效降害成分群 圖1 有效降害中草藥成分群篩選線路圖1圖2 兩類有害成分分析方法線路圖圖3 兩類有害成分分析方法線路圖2十二、技術關鍵卷煙單口主、側流煙氣中兩類有害物質含量的同時測定技術，供試卷煙的制備，兩類有害成分生成模型及中草藥化學成分群阻斷其生成模型的建立,中草藥化學成分群降低危害過程的檢測，中草藥化學成分群降低卷煙危害過程的模擬為本課題擬解決的關鍵問題。十三、項目實施方案本課題涉及內容多，工作量重，項目的完成依賴于多家單位的良好協(xié)作，具體安排如下：管理方案：課題組管理實行責任制，總項目分為子項目，設有專人負責，子項目負責人受總項目負責人管理。每兩星期召開項目討論會一次，總結已完成的工作，論證進一步的試驗方案。試驗方案：（1）中草藥化學成分群的分類制備：精選有代表性的優(yōu)質藥材，選擇不同極性的溶劑，進行正交設計和均勻設計，制備生物堿、萜類、苷類、酚類、酚酸類等類的中草藥化學成分群。（2）有效降低卷煙危害的中草藥化學成分群的篩選：采用下述模型進行該項工作：A. 不同大類中草藥化學成分群在試管內阻斷苯并[a]芘等稠環(huán)芳烴生成模型①試管內苯并[a]芘等稠環(huán)芳烴的生成：取4支玻璃管，標號為4，玻璃管中置有一定量的硫，把分析純的β胡蘿卜素、正十八醇、聯(lián)苯和正二十二烷依次分別裝入四個玻璃管中，用氦氣沖洗幾次以除去空氣，抽真空后焊封制成安瓿瓶，置于馬福爐中在350℃溫度條件下恒溫72 h，取出待冷卻后擊碎安瓿瓶，用氯仿抽提24h，抽出物先用石油醚沉淀出瀝青質，之后在硅膠－氧化鋁 (4∶1 )填充色譜柱上進一步分離，用石油醚沖洗出烷烴，用二氯甲烷沖洗出芳烴，用乙醇沖洗出非烴。試驗產物中芳烴餾份進行色譜和色譜－質譜分析。②試管內不同大類中草藥化學成分群代表單體阻斷揮發(fā)性苯并[a]芘等稠環(huán)芳烴生成：設①項下編號X玻璃管中生成苯并[a]芘。取24支玻璃管，平均分為4組編號為4，分別加入一定量的硫。1號管中加入適量X所對應的代表物；4號管除加入適量X對應代表物之外，、 中草藥化學成分群代表單體供試樣，氮氣保護吹干后，用氦氣沖洗幾次以除去空氣，抽真空后焊封制成安瓿瓶，置于馬福爐中在350℃溫度條件下恒溫72 h，取出待冷卻后擊碎安瓿瓶，用氯仿抽提24h，抽出物先用石油醚沉淀出瀝青質，之后在硅膠－氧化鋁 (4∶1 )填充色譜柱上進一步分離，用石油醚沖洗出烷烴，用二氯甲烷沖洗出芳烴，用乙醇沖洗出非烴。試驗產物中芳烴餾份進行色譜和色譜－質譜分析。③試管內不同大類中草藥化學成分群阻斷揮發(fā)性苯并[a]芘等稠環(huán)芳烴生成：設①項下編號X玻璃管中生成苯并[a]芘。取24支玻璃管，平均分為4組編號為4，分別加入一定量的硫。1號管中加入適量X所對應的代表物；4號管除加入適量X對應代表物之外，、 中草藥化學成分群供試樣，后續(xù)操作同②項下所示步驟。B、試管內不同大類中草藥化學成分群阻斷亞硝胺生成模型①試管內N亞硝胺的生成：取4支100mL雞心瓶，編號為4，分別加入10mL蒸餾水，10%，調pH4~5， ， ， ， 。最后，分別加入內標500ng，室溫，過夜，置于4支100mL分液漏斗，分別用乙酸乙脂提取3次，每次20mL，合并提取液，用無水硫酸鈉脫水，過濾，置旋轉蒸發(fā)器上濃縮至干， 乙酸乙脂，輕搖使?jié)饪s物再溶解后，進行色譜分析。②試管內不同大類中草藥化學成分群代表單體阻斷煙草中揮發(fā)性亞硝胺的生成：取4支100mL雞心瓶，編號為4，分別加入10mL蒸餾水，5%，調pH2~3，。最后，分別加入二丁基亞硝胺500ng作為內標，37℃水浴，保溫4h，置于4支100mL分液漏斗，分別用乙酸乙脂提取3次，每次20mL，合并提取液，用無水硫酸鈉脫水，過濾，置于旋轉蒸發(fā)器上濃縮至干，輕搖使?jié)饪s物再溶解，進行色譜分析。③試管內不同大類中草藥化學成分群阻斷煙草中揮發(fā)性亞硝胺的生成：取4支100mL雞心瓶，編號為4，分別加入10mL蒸餾水，5%，調pH2~3，，，后續(xù)操作如②項下所示。（3）試樣煙的制備：根據試驗需要，嚴格按照試樣卷煙的質量要求和工藝標準制備卷煙，按照不同季節(jié)儲存一定時間以后，送至實驗室以供篩選使用。（4）試驗卷煙單口主、側流煙氣的捕集：取挑選后的試樣煙80支，在KC－5孔道吸煙機上進行燃吸、并按國際標準ISO:3308收集煙氣總粒相物（TPM）及側流煙氣于劍橋濾片上，將濾片取下，用脫脂棉擦洗捕集器內壁，濾片與脫脂棉一并放入具塞三角瓶中，加入甲醇，超聲提取，收集提取液，抽濾，合并抽濾液，減壓蒸干，殘渣用蒸餾水轉溶于500mL分液漏斗中，水飽和的正丁醇萃取，合并萃取液，減壓蒸干，用甲醇溶解至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度。（5）試驗卷煙單口主、側流煙氣中中草藥化學成分群的檢測，此項工作所涉及的檢測方法在課題組已經建立，主要采用薄層色譜配合高效液相色譜外標法定量檢測。（6）試驗卷煙單口主、側流煙氣苯并[a]芘和煙草特有N亞硝胺含量測定：此項工作主要采用氣相色譜－質譜法及熱能