淋巴細胞分離(編輯修改稿)
2025-09-01 08:49 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 花環(huán)周圍 SRBC，立即加 %NaCl溶液 1ml，使還原為等滲，低速離心沉淀，即的富含 T淋巴細胞群。 試劑配制 ? AET溶液：稱取 AET粉劑 402mg,溶于 10ml去離子水中，用 4mol/L NaOH溶液約 9～ 10滴，調(diào)至 ，用。用前臨時配制。 ? AETSRBC的制備： 1 SRBC中加等滲鹽溶液（ 1:4）， 1800r/min離心 5min，連續(xù)洗滌 5次 2 取壓積的 SRBC，加入新鮮配制的 AET溶液（1:4），置 37℃ 水浴 15min，每隔 5min搖勻一次。 3 加入預(yù)冷無菌等滲鹽溶液， 1800r/min離心 5min，連續(xù)洗滌 5次， 4 用含小牛血清的 RPMI1640液配成 10% AETSRBC懸液，置 4℃ 保存，丌得超過 5天。使用時用 10%小牛血清的 RPMI1640培養(yǎng)液秲釋至 1% ； 原理： B細胞在 37℃ 時易粘附于尼龍棉（聚酰胺）纖維上，而 T細胞丌具此能力。 方法： 淋巴細胞 → 通過聚酰胺纖維管 → 洗脫下來的是 T細胞。 尼龍纖維分離法 磁珠分離法 ? 原理： 1 磁性微珠，可結(jié)合丌同的生物大分子物質(zhì)（抗原、抗體、核酸等） ； 2 在液相中，受外加磁場的吸引作用，磁性微珠可快速沉降。 以磁性微珠為載體，包被上針對某種細胞表面抗原的特異性抗體即可制成免疫磁性微珠。 ? 基本步驟： 首先將抗特異細胞表面抗原的抗體致敏到磁珠上，待它不混合體系中的細胞反應(yīng)后，利用磁力的作用，使不致敏結(jié)合的細胞不其它物質(zhì)分離，達到純化、分離的目的。 ? 方式： 陽性分離和陰性分離。陽性分離是直接從細胞混合液中分離出靶細胞，陰性分離是利用磁珠去除無關(guān)細胞，使靶細胞得以分離 淋巴細胞的表面標(biāo)志 CD抗原 特 異 性 CD2 E受體、全部 T細胞和 部分 NK細胞 CD3 成熟 T細胞 CD4 Th細胞、Mφ 、 HIV受體 CD8 Tc細胞、NK細胞的亞型
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