免疫(歸納)(編輯修改稿)
2024-09-01 02:54 本頁面
【文章內容簡介】 體，通過熒光現象檢查抗原或抗體4. 雙標記法：兩種熒光素分別標記的兩種不同的特異性抗體，與同一標本反應，熒光顯微鏡觀察兩種顏色熒光。？有哪些方法類型?（1）原理。鑭系元素的激發(fā)光范圍較寬，發(fā)射范圍較窄，而且熒光壽命長。，Ag與Ab反應后，利用時間分辨熒光分析儀檢測標本中相應的Ag或Ab。（2）方法類型：固相抗體和Eu3+標記抗體與待檢抗原結合，形成固相抗體待檢抗原Eu3+標記抗體復合物，酸性增強液下，Eu3+解離，340nm激發(fā)光下發(fā)射613nm熒光。(FPIA)的原理一種均相競爭熒光免疫分析方法。待測的小分子抗原和熒光標記的小分子抗原（恒量）與相應抗體（恒量）競爭結合。，轉動速度快，偏振熒光弱 ，轉動速度慢，偏振熒光強 ，則AgFAb少，AgF多，偏振熒光弱？： 蛋白質、激素、藥物、腫瘤標記物、病原體抗原/抗體等：（小分子） 藥物、維生素、激素、常規(guī)生化項目等： 病毒抗體、細菌和毒素抗原、激素、腫瘤標志物等？（1）以酶標記物作為主要試劑，將抗原抗體反應的特異性和酶催化底物的高效性相結合的一種免疫檢測技術。（2）酶免疫技術的分類 EIH EIA?均相酶免疫測定?異相酶免疫測定， 固相酶免疫測定ELISA液相酶免疫測定分子量小，標記簡單，穩(wěn)定，廉價相應底物?鄰苯二胺OPD：產物黃色，不穩(wěn)定?四甲基聯苯胺TMB：產物藍色，加酸后變藍色；ELISA中應用最廣泛2. 堿性磷酸酶 AP分子量大，靈敏度高相應底物對硝基苯磷酸鹽PNP：產物黃色，較穩(wěn)定3. β半乳糖苷酶不易受內源性酶的干擾，常用于均相酶免疫測定。 相應底物4MUG，常用于化學發(fā)光測定？（1）均相酶免疫測定（檢測信號與待測抗原含量成反比）（2） 異相酶免疫測定1. 結合標記物的酶活性沒有發(fā)生變化2. 需要分離結合標記物和游離標記物3. 測定結合標記物的酶活性（檢測信號與待測抗原含量成正比）（ELISA）？（1）基本原理：，制備成酶標記抗體或抗原（酶聯）；，預先將其結合到固相載體表面（吸附）。（2）必要試劑：；；。？1. 雙抗體夾心法檢測大分子抗原：乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等2. 間接法常用于HCV抗體、HIV抗體和梅毒螺旋體抗體等測定3. 競爭法 用于抗原和半抗原的定量檢測，、激素等4. 捕獲法 用于測定血清中IgM類抗病原體抗體eg. 病原體急性感染診斷中的IgM型抗體 甲型肝炎HAVIgM抗體乙型肝炎病毒核心HBcIgM抗體（雙抗體夾心法）（抗原抗體復合物），與固相中抗原結合，形成包被抗體抗原酶標抗體（雙抗體夾心）5洗滌去除未結合物質6加入底物顯色，確定抗原的含量 14. 間接法1. 已知抗原包被固相載體2. 加入待測抗體（包被抗原待檢抗體復合物）3. 洗滌去除未結合物質4. 加入酶標二抗，與固相中待測抗體結合形成包被抗原待測抗體酶標二抗復合物5. 洗滌去除未結合物質6. 加入底物顯色，確定抗體的含量15.（電轉移）免疫印跡試驗（western blot）（電轉移到膜載體上）（ECL）（BAS）（1） 基本類型及原理1：以游離親和素為橋聯，分別連接生物素化大分子反應體系和標記生物素?BAB法：橋聯親和素生物素法?ABC法：親和素生物素化復合物法2：以標記親和素聯接生物素化大分子反應體系BA法：標記親和素生物素法1. 酶放大免疫測定技術EMIT?半抗原與酶結合成酶標半抗原，保留半抗原和酶的生物活性。?當酶標半抗原與抗體結合后，半抗原分子上的酶蛋白與抗體密切接觸，使酶的活性中心受到影響，酶的活性受到抑制。?測定時標本中的半抗原、酶標半抗原與抗體競爭性結合，標本中的半抗原含量越高，加底物后其OD值越高。2. 克隆酶供體免疫分析 CEDIA?標本中的抗原和ED標記的抗原與特異性抗體競爭結合在以硝酸纖維素膜為載體并包被了抗原或抗體的滲濾裝置中，依次滴加標本、免疫金及洗滌液后進行檢測，陽性反應在膜上呈現紅色斑點。將膠體金標記技術和蛋白質層析技術相結合的以硝酸纖維素膜為載體的快速的固相膜免疫分析技術。膠體金標記物與鎳網上待檢標本的相應蛋白質發(fā)生結合反應，從而對細胞膜上或細胞內的蛋白質進行定性與定位。（銀）光鏡染色技術先進行免疫膠體金染色，使膠體金顆粒沉積在組織細胞抗原所在位置上，然后進行銀顯色。：,并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物。：分類常用的酶發(fā)光底物酶促反應發(fā)光劑HRP魯米諾HPAAPAMPPD4MUP直接化學發(fā)光劑——吖啶酯電化學發(fā)光劑電子供體為：三丙胺（TPA）三聯毗啶釕用參與催化某一發(fā)光反應的酶來標記抗原或者抗體，在抗原抗體反應后，加入底物，通過酶催化底物發(fā)光反應。（熒光酶免疫測定技術，化學發(fā)光酶免疫測定技術）直接化學發(fā)光使用吖啶酯作為標記物，無需附加催化劑。AE氧化直接發(fā)光，三聯吡啶釕標記抗體(抗原)，以三丙胺(TPA)為電子供體，在電場中因電子轉移而發(fā)生特異性化學發(fā)光反應，類型B與F分離反應化學發(fā)光酶免疫分析1. 磁顆粒分離法2. 微粒子捕獲法3. 包被珠分離法魯米諾、H2O2和化學發(fā)光增強劑直接化學發(fā)光免疫分析磁顆粒分離技術加入H2O2和NaOH使成堿性環(huán)境，電磁場中洗滌電化學發(fā)光免疫分析磁顆粒分離法引人TPA緩沖液1. 酶免疫組化2. 非標記抗體酶免疫組化3. 親合組織化學技術4. 免疫電鏡技術熒光素直接標記在特異性抗體（Ab1)熒光素直接標記在特異性抗體（Ab2)第二抗體針對第一抗體種屬特異性的表 位（如羊抗鼠Ig或羊抗人Ig）（PAP）法（APAAP）法1. 親合素一生物素—過氧化物酶復合物技術(ABC)2. 葡萄球菌蛋白A技術3. 凝集素組織化學技術鐵蛋白標記
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