【文章內(nèi)容簡介】 移到在37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱的燒杯中，或直接將精液袋放入37℃水浴鍋內(nèi)保溫，以免因溫度降低而影響精子活力。整個檢查活動要迅速、準(zhǔn)確，一般在5～10分鐘內(nèi)完成。１、精液量：后備公豬的射精量一般為150～200毫升，成年公豬的為200～300毫升，有的高達(dá)700～800毫升。精液量的多少因品種、品系、年齡、采精間隔、氣候和飼養(yǎng)管理水平等不同而不同。精液量的評定以電子天平(精確至12克，最大稱量35公斤)稱量，按每克1毫升計。原精請勿轉(zhuǎn)換盛放容器，否則將導(dǎo)致較多的精子死亡，因此，勿將精液倒入量筒內(nèi)評定其體積。２、顏色：正常精液的顏色為乳白色或灰白色，精子的密度愈大，顏色愈白；越小，則越淡。如果精液顏色有異常，則說明精液不純或公豬有生殖道病變，如呈綠色或黃綠色時則可能混有化膿性的物質(zhì)；呈淡紅色時則混有血液；呈淡黃色時則可能混有尿液等。凡發(fā)現(xiàn)顏色有異常的精液，均應(yīng)棄去不用，同時，對公豬進(jìn)行對癥處理、治療。３、氣味：正常的公豬精液含有公豬精液特有的微腥味。有特殊臭味的精液一般混有尿液或其它異物，一旦發(fā)現(xiàn)，不應(yīng)留用，并檢查采精時操作是否正確，找出問題的原因。４、酸堿度：可用pH試紙進(jìn)行測定。一般來說，精液的pH值偏低，則精子活力較好。生產(chǎn)上通常不能精液的pH值進(jìn)行檢查，因為精液的酸堿度不可能遠(yuǎn)離中性。精子密度：指每毫升精液中含有的精子數(shù)量，它是用來確定精液稀釋倍數(shù)的重要依據(jù)?！辽＞用芏鹊臋z查方法有以下幾種：Ａ、估測法：這種方法不用計數(shù)，用眼觀察顯微鏡下精子的分布，精子與精子之間的距離少于一個精子的長度為“密”；精子與精子之間的距離相當(dāng)于一個精子的長度為“中”；精子與精子之間的距離大于一個精子的長度為“稀”。這種方法簡單，但對于不同檢查人員而言，主觀性強(qiáng)，誤差較大，只能對公豬進(jìn)行粗略的評價，因此，這種評定的方法通常不被采用。Ｂ、精子密度儀法：現(xiàn)代化養(yǎng)豬企業(yè)多數(shù)采用這種方法，它極為方便，檢查所需時間短，重復(fù)性好，儀器使用壽命長。其基本原理是精子透光性差，精清透光性好。選定550nm一束光透過10倍稀釋的精液，光吸收度將于精子的密度呈正比的關(guān)系，根據(jù)所測數(shù)據(jù)，查對照表可得出精子的密度。該法測定密度的誤差約為10%，但這個是生產(chǎn)上可以接受的。當(dāng)然，如果精液有異物，該儀器也將它作為精子來計算，應(yīng)適當(dāng)考慮減少這方面的誤差?？傊?，該設(shè)備是目前豬人工授精中測定精子密度最適用的儀器(精子密度儀的操作指南見附錄)。Ｃ、紅細(xì)胞計數(shù)法：該法最準(zhǔn)確，速度慢，其具體步驟為：以微量取樣器取具有代表性的原精100微升，3%的KCl溶液900微升，混勻后，取少量放入計數(shù)板的槽中，在高倍鏡下計數(shù)5個中方格內(nèi)精子總數(shù)，將該數(shù)乘以50萬即得原精液的精子密度，該方法可用來校正精子密度(見圖26)。圖26 血細(xì)胞計數(shù)板示意圖７、精子活力精子活力又叫精子活率，是指直線前進(jìn)運(yùn)動的精子占總精子的百分率。精子活力的高低關(guān)系到配母豬受胎率和產(chǎn)仔數(shù)的高低，因此，每次采精后及使用精液前，都要進(jìn)行活力的檢查，以便確定精液能否使用及如何正確使用。在我國精子活力一般采用１０級制，即在顯微鏡下觀察一個視野內(nèi)的精子運(yùn)動，若全部直線運(yùn)動，；有９０％；有８０％的呈直線運(yùn)動，依次類推。，則應(yīng)棄去不用。評定精子活力應(yīng)注意：① 取樣要有代表性；② 觀察活率用的載玻片和蓋玻片應(yīng)事先放在３７℃恒溫板上預(yù)熱，由于溫度對精子影響較大，溫度越高精子運(yùn)動速度越快，溫度越低精子運(yùn)動速度越慢，因此觀察活率時一定要預(yù)熱載、蓋玻片，尤其是從17℃精液保存箱的精子，應(yīng)在恒溫板上預(yù)熱3060秒鐘后觀察；③ 觀察活率時，應(yīng)用蓋玻片。否則，一是易污染顯微鏡的鏡頭，使之發(fā)霉；二是評定不客觀，因為每取樣的量不同將影響活率的評定；④ 評定活率時，顯微鏡的放大倍數(shù)要求100倍或150倍，而不是400倍或600倍。因為如果放大過大，使視野中看到的精子數(shù)量少，評定不準(zhǔn)確。若有條件，可在顯微鏡上配置一套攝像顯示儀，將精子放大到電腦屏幕上進(jìn)行觀察。豬精子活力與受精能力關(guān)系見表24。８、 精子畸形率畸型精子指巨型精子、短小精子、斷尾、斷頭、頂體脫落、有原生質(zhì)、頭大的、雙頭的、雙尾、折尾等精子(見圖27)，一般不能直線運(yùn)動，雖受精能力較差，但不影響精子的密度。精子畸形率是指畸形精子占總精子百分率。若用普通顯微鏡觀察畸形率，則需染色；若用相差顯微鏡，則不需染色可直接觀察。公豬的畸形精子率一般不能超過２０％，否則應(yīng)棄去。采精公豬要求每2周檢查一次畸形率。圖27 畸形精子 畸形精子的檢查過程：① 取原精液少量，以3%氯化鈉溶液進(jìn)行10倍稀釋；② 以伊紅或姬姆莎為染液，對精子進(jìn)行染色；③ 400600倍顯微鏡下觀察精子形態(tài)，計算200個精子中畸形精子占的百分率(見圖28)。圖28 檢測精子畸形率的涂片方法９、 生產(chǎn)公豬(自然交配和采精)精液品質(zhì)檢查的基本原則 所有生產(chǎn)公豬每月必須普查精液品質(zhì)一次，夏季可適當(dāng)提高普查頻率。 精檢不合格的公豬絕對不可以使用。 所有的后備公豬必須在精液品質(zhì)檢查合格后方可投入使用。１０、 精液品質(zhì)不合格公豬的檢查和處理程序1 首次精檢不合格的公豬，7天后復(fù)檢。2 復(fù)檢不合格的公豬，10天后采精一次廢棄，再隔4天后采精檢查。3 仍不合格者，10天后再采精一次作廢，再隔 4 天后作第四次檢查 。4 經(jīng)過連續(xù)五周四次精檢，一直不合格的公豬建議作淘汰處理，若中途檢查合格，視精液品質(zhì)狀況酌情使用。表24 豬精子活力與受精率估測值之間的關(guān)系活力(%)*N**體外卵子穿透率(%)分娩率(%)產(chǎn)活仔數(shù)75736458543835./注：* 種類中具有連續(xù)前行活力精子的平均百分?jǐn)?shù)。** 每類中用于評定的精液數(shù)目。W,X,Y,Z 同一列上標(biāo)字母不同的平均數(shù)之間差異顯著(P)。第七節(jié) 精液稀釋液一、稀釋液成份精液保存除了需要適宜的溫度外，一份優(yōu)良的稀釋液必須具備提供精子最理想的生存環(huán)境，保護(hù)精子細(xì)胞膜的完整性，排除一切對精子不良影響的因子，提供精子可以吸收的營養(yǎng)物質(zhì)，在不影響精子生活力和受精力的前提下抑制精子代謝，使之處于可逆的休眠狀態(tài)。稀釋液的主要成份有：?糖類：葡萄糖、果糖等，提供能量；?弱酸鹽：檸檬酸鈉、碳酸氫鈉等，提供pH緩沖環(huán)境；?強(qiáng)酸鹽：氯化鉀等，提供滲透壓；?EDTA二鈉：螯合二價陽離子；?抗生素：青鏈霉素等；?水：雙蒸水，水質(zhì)對精子的影響很大，要求雙蒸水。二、稀釋液的種類稀釋劑可直接購買商品，也可自行配制?？筛鶕?jù)需要進(jìn)行選擇，不過，人工授精技術(shù)尚未熟練之前，最好購置成品稀釋粉，減少因此稀釋粉的配制帶來不應(yīng)有的問題。稀釋劑通常呈固體的粉狀，溶解后，液態(tài)時4℃保存不超過48小時?？股氐奶砑?，應(yīng)在稀釋精液時加入到稀釋液，太早易失去效果。稀釋劑分為短效、中效和長效等類型，短效稀釋劑一般要在３天內(nèi)使用，如BTS、Kiev (MERCK III)、修飾 Kiev；中效一般可保存46天，如VSP、Modena；長效一般可保存79天，如Androhep、Androhep Plus、XCELL、MRA、ACROMAX、修飾 Modena、VITAL等。無論何種稀釋粉配方稀釋的精液，應(yīng)盡快輸精，除非迫不得已。不同公豬的精液對稀釋液有一定選擇性，如果一頭公豬精液用某種稀釋液保存時，要考慮改變稀釋液配方。當(dāng)然某一固定的稀釋液配方應(yīng)滿足多數(shù)公豬精液的保存(見圖2210)三、稀釋液的配制購買的或自配的稀釋粉用雙蒸水進(jìn)行混合溶化，可用磁力攪拌器以促進(jìn)溶解。溶解完后，若有雜質(zhì)，用濾紙進(jìn)行過濾，因精子有向異性，若有異物則容易凝聚死亡。（）。稀釋液配好后及時貼上標(biāo)簽，標(biāo)明品名，配制時間和經(jīng)手人等。然后，在水浴鍋內(nèi)進(jìn)行預(yù)熱，以備使用，也可配制好后先貯存，但要在48小時內(nèi)使用完。稀釋粉要求提前1小時溶解，這樣才有穩(wěn)定的pH值，稀釋后對精子的影響較少。因為稀釋粉剛?cè)芙庥谒畷r，各離子之間相互作用，尚未達(dá)平衡的穩(wěn)定狀態(tài)，pH值變化較大(圖211)。AndrohepMondenaBTS圖29 幾種稀釋劑稀釋公豬A精液后其有效精子隨保存時間變化BTSMondena圖210 幾種稀釋劑稀釋公豬B精液后其有效精子隨保存時間變化Androhep圖211 兩種稀釋粉溶于水后pH值的變化曲線第八節(jié) 精液的稀釋一、 精液稀釋的目的豬的精液如果不經(jīng)過稀釋，在體外保存的時間最多也就半小時，活力很快下降，而且很快失去受精能力。這是因為精清是促進(jìn)精子運(yùn)動，縮短精子體外保存時間（見圖212）。精液的稀釋就是以稀釋液降低精子的密度，為精子提供營養(yǎng)、緩沖物質(zhì)，并維持適當(dāng)?shù)臐B透壓和pH值，以利于精子的保存。因此要求原精液應(yīng)盡快稀釋。圖212　原精有效精子百分率隨時間變化曲線精液稀釋的目的在于：1. 擴(kuò)大精液的容積：經(jīng)稀釋后一次采得的精液可供10－30頭母豬配種。2. 提供精子生存所需的營養(yǎng)物質(zhì)：精子一旦形成，只能消耗周圍介質(zhì)中的營養(yǎng)物質(zhì)來維持其活動。3. 使精子休眠，延長其存活時間和受精能力：弱酸性的環(huán)境能抑制其活動，弱堿性的環(huán)境則促進(jìn)精子的活動，所以稀釋液要求呈弱酸性以抑制其運(yùn)動，延長其壽命。4. 抑制精液中有害微生物的活動和繁殖，減少母豬因配種感染疾病的機(jī)會。在精液稀釋液中常用抗生素有：青霉素、鏈霉素、慶大霉素、氨芐青霉素等。5. 便于精子的保存和運(yùn)輸：稀釋后的精液二、 稀釋方法 加入稀釋量的確定⑴ 輸精劑量每頭份精液的量一般要求80100毫升，不能少于70毫升，否則，將影響母豬的分娩率和窩均產(chǎn)仔數(shù)(見表25)，尤其是外種豬。因此，通常建議輸精量為100毫升。⑵ 每頭份精液含總精子數(shù)每頭份精液含總精子數(shù)一般為2060億，不同國家、不同稀釋液配方，輸入的總精子數(shù)有一定區(qū)別(表26)。由于我國用新方法開展豬人工授精時間不長，一般建議每頭份精液含總精子數(shù)為40億。通過12年熟練過程，可將總精子數(shù)降至2530億。表25 輸精劑量和輸入的總精子數(shù)對母豬繁殖性能的影響觀察指標(biāo)ⅠⅡⅢⅣ輸精劑量(ml)5050100100輸入精子密度(億/ml)輸入活精子數(shù)(億)502525分娩率(%)75窩均總產(chǎn)仔數(shù)177。177。177。177。表26 世界各地每次輸入發(fā)情母豬的總精子和輸精量國家和地區(qū)稀釋液種類輸精量(ml)總精子數(shù)/份(億)巴西KIEV、BTS801002535加拿大BLI、BTS、Modena702530丹麥KIEV8520法國BTS10030荷蘭BTS801003040挪威BTS10020西班牙MRA1002360瑞典KIEV10030英國BTS、Reading、SCKZORPVA751030德國BTS、KIEV8010025美國KIEV、BTS、Modena3035芬蘭KIEV、MRA1002050臺灣PRITB803050⑶ 加入稀釋液量的確定A、 ；B、 用電子天平稱量原精液重量，如200克，相當(dāng)于200ml；C、 以精子密度儀評定精子密度，如3億/ml；D、 每頭份精液量為100ml；E、 每頭份含總精子數(shù)40億；F、 本次采精獲得總精子數(shù)為：200ml3億/ml＝600億；G、 本次采精可稀釋的頭份數(shù)為：600億/40