【文章內容簡介】 組織和器官中的分布，觀察其在體內的分布情況，特別注重其在淋巴結、脾臟等關鍵免疫器官中的分布。通過血液生化指標檢測對接受納米免疫治療動物的肝腎功能進行評估；銅鼓組織病理分析對接受納米免疫治療動物的各個重要臟器分別進行組織學檢查，評估其是否有明顯的形態(tài)學變化。8．納米材料的血液相容性研究 將高劑量和低劑量的磁納米顆粒和碳納米管通過尾靜脈注入小鼠循環(huán)系。分別在4個月和12個月時，觀察和測定受體鼠血液系統惡變相關的指標（如：白血病細胞鑒定和計數，小鼠生存期觀察，流式細胞儀檢測，組織病理學分析等）。四、年度計劃研究內容預期目標第一年1．構建針對多種白血病細胞模型的納米載體，優(yōu)化其基因遞送條件。構建Gpr家族成員和Bcl11a等白血病相關基因的表達載體；收集、制備并測試shRNA文庫；構建泛素連接酶E3的真核表達文庫。進行t(16。21)(p11。q22) / FUSERG白血病臨床入組病例篩選及臨床研究；開展易位斷裂點的精確定位和融合基因剪切型的定性及定量檢測和多種基因組學分析。檢測慢性粒細胞白血病干/祖細胞相對于正常細胞差異表達的候選基因。建立納米顆粒體外標記白血病細胞技術，觀察納米標記是否影響白血病的生物表型（如增殖，集落形成能力，凋亡，遷移和浸潤能力等）；探討以MRI為主的納米示蹤活體成像技術在動物體內示蹤白血病細胞的轉移浸潤的可行性。2．設計合成具有重要生物應用前景的納米貴金屬、磁性納米材料、核殼結構納米半導體材料（量子點）、樹枝狀大分子材料，采用表面分子設計和表面反應/組裝方法對納米材料進行功能化修飾；通過與特殊的血液惡性腫瘤標志物的偶聯，制備特異性的納米生物醫(yī)學探針，并研究其血液相容性、穩(wěn)定性及靶向性等生物效應。3．制備高性能磁性納米粒子，研究穩(wěn)定的控制制備工藝，建立納米氧化鐵國家標準樣品及MRI弛豫率標準定值方法。利用抗體差異篩選腫瘤靶分子技術篩選白血病、惡性淋巴瘤和骨髓瘤等血液惡性腫瘤的靶點和相應抗體，制備用于血液惡性腫瘤體內外檢測的磁性納米粒子診斷制劑和醫(yī)學影像納米探針，研究探針凍干粉制劑的制備工藝，研究其穩(wěn)定性、再分散性、生物相容性、MRI弛豫特性以及偶聯方法對抗體活性的影響。4．在動物整體和細胞水平上研究納米粒子表面的氨基化、羧基化、PEG化對對巨噬細胞的腫瘤細胞殺傷功能的調控規(guī)律；對血液中樹突細胞成熟和分化的調控作用。研究不同納米材料對T淋巴細胞及T淋巴細胞性白血病細胞K+通道、鈣信號系統通道的影響；在動物整體和細胞水平上研究納米材料對外周血淋巴細胞ROS產生的影響規(guī)律。1．建立高效基因納米載體，并確定轉染條件。構建成功各種表達載體、shRNA文庫和E3表達文庫。闡述伴t(16。21)(p11。q22)白血病的主要臨床和實驗室特征。確證慢性粒細胞白血病干/祖細胞相對于正常細胞差異表達的候選基因。建立中樞神經系統白血病小鼠模型，初步建立納米示蹤動態(tài)觀察白血病的髓外浸潤途徑及時間的方法。2．研制出幾類具有特異性生物識別和示蹤功能的光學、磁學及電化學生物納米探針；闡明納米探針結構與功能的關系。3．制備出納米氧化鐵標準樣品，找到血液惡性腫瘤的靶點和對應的抗體，制備磁性納米探針凍干粉制劑，建立檢測循環(huán)血管內皮細胞（CEC）和循環(huán)腫瘤細胞（CTC）的方法，構建用于血液惡性腫瘤體內外檢測的磁性納米粒子診斷制劑和醫(yī)學影像納米探針。4．建立比較完善的納米粒子的表面修飾技術平臺；初步闡明不同表面構成的納米材料對巨噬細胞腫瘤殺傷功能的作用規(guī)律；初步闡明不同納米材料對血液中樹突細胞成熟和分化的調控作用；初步揭示不同構成的納米材料對T淋巴細胞及T淋巴細胞性白血病細胞K+通道、鈣信號系統通道的影響；初步闡明不同構成的納米材料誘導ROS產生的規(guī)律。發(fā)表22篇左右SCI研究論文。第二年1．基于納米基因遞送系統，在小鼠模型上探討Gpr家族成員的功能；用ChIPonChip法研究Bcl11a基因的轉錄調節(jié)網絡中的下游調控基因。繼續(xù)開展伴t(16。21)(p11。q22)白血病的臨床研究；常見急性髓系白血病異常表達基因的定量檢測和基因組學分析；克隆FUSERG融合基因，構建載體。構建慢性粒細胞白血病相關基因的cDNA表達載體或shRNA載體。進行正常或白血病干/祖細胞的shRNA篩選實驗?；诩{米氧化鐵的血細胞E3基因遞送體系，開展對E3文庫的篩選。完善和優(yōu)化白血病細胞體內浸潤檢測的技術和方法，基于納米標記，研究白血病細胞對血腦屏障尤其是緊密連接蛋白等的破壞。2．將生物納米探針與血細胞共孵育，采用掃描探針顯微（SPM）、激光掃描熒光共聚焦顯微等方法，結合磁共振波譜及細胞生物學方法，研究所構建的納米探針對細胞膜作用、跨膜轉運機制和動力學，跟蹤并記錄生物納米探針所引起的血細胞的DNA損傷、線粒體膜電位變化、Caspase酶激活等生理變化，以獲取血細胞內多種反應的動態(tài)化學信息、電化學信息及反映整體的功能狀態(tài)。3．對所構建的磁性納米粒子診斷制劑和醫(yī)學影像納米探針檢測循環(huán)內皮細胞和循環(huán)腫瘤細胞的特異性、抗干擾性及穩(wěn)定性進行評價和優(yōu)化研究。采用膠體化學方法研制新型金屬納米粒子CT造影劑，以及構建含發(fā)光量子點的碘油納米乳造影劑，構建特異性納米探針，在進一步完善自主研制的MicroCT的基礎上，結合光學影像技術，開展細胞/多細胞成像的研究以及進行CT功能影像研究。設計和研究多模式、多靶點醫(yī)學影像納米探針，研制用于磁共振超聲聯合造影的磁性納米顆粒微氣泡，研制磁性－熒光雙模探針用于磁共振－光學聯合影像研究，以及后續(xù)多模式聯合成像及圖像融合分析技術的研究。建立惡性淋巴瘤、骨髓瘤等血液惡性腫瘤小鼠模型。4．在動物整體和細胞水平上研究納米材料對巨噬細胞不同亞型轉換的調控作用；繼續(xù)在在動物整體和細胞水平上深入研究納米粒子對樹突細胞的修飾和免疫功能的調控作用；在動物整體和細胞水平上初步研究納米材料對外周血淋巴細胞產生細胞因子風暴信號通路相關的炎性反應上游激活機制；初步開展納米材料對白血病細胞膽堿能信號系統的作用，及其表達和功能的改變在免疫細胞功能活動中的意義。1．初步鑒定Gpr家族在白血病中的功能；初步理解一部分Bcl11a基因的轉錄調節(jié)網絡中的下游調控基因。闡述伴t(16。21)(p11。q22)白血病的主要遺傳學特征，克隆FUSERG融合基因。成功構建慢性粒細胞白血病相關基因的cDNA表達載體或shRNA載體。獲得shRNA初步篩選結果。構建出納米Fe3O4E3 DNA 血細胞基因遞送體系并篩選出特異性的E3連接酶，初步完成其功能研究。成功建立體外血腦屏障模型，初步獲得某些基因或信號通路對白血病體內外浸潤，遷移，穿透等能力的影響的實驗數據和實驗依據。2．闡明幾類重要的生物納米探針對血液惡性腫瘤細胞的體外作用機制，示蹤并檢測生物納米探針所引起的血細胞的體外凋亡等。3．評價并優(yōu)化檢測循環(huán)內皮細胞和循環(huán)腫瘤細胞的方法。研制出MicroCT、用于磁共振超聲聯合造影的結合磁性納米顆粒的微氣泡，以及磁性－熒光雙模探針，建立多模式聯合成像及圖像融合分析技術。得到惡性淋巴瘤、骨髓瘤等血液惡性腫瘤小鼠模型，用于后續(xù)研究。4．進一步闡明納米粒子對巨噬細胞功能轉換的作用規(guī)律及與白血病治療之間關系；進一步闡明納米粒子對樹突細胞成熟與分化的作用規(guī)律；初步闡明納米材料對外周血淋巴細胞產生細胞因子風暴信號通路相關的炎性反應上游激活機制；初步闡明納米材料對白血病