病毒感染細胞實驗整體流程和原理doc(編輯修改稿)
2025-08-14 12:31 本頁面
【文章內容簡介】 30min6）倒置平皿37℃，12~16h，出現菌落1）取1~4ml在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜的菌液，12000轉離心1min，棄上清2）加250ul溶液Ⅰ/RNaseA（溶液Ⅰ為細胞懸浮液）混合液，漩渦劇烈振蕩直至菌體完全重新懸浮，室溫靜置12min。3）加入250ul溶液Ⅱ（細胞裂解液），輕柔的反復顛倒混勻56次。室溫放置12min，使菌體充分裂解，直至形成澄清的裂解溶液。4）加入350ul溶液Ⅲ（中和液），立刻輕柔地反復顛倒混勻56次，此時會出現白色絮狀沉淀。5）12000室溫離心10min，收集上清。6）將上清置于DNA純化柱中，靜置12min。7）12000轉離心1min，棄濾液。8）加入500ul溶液PB（洗滌液）12000轉離心1min，棄濾液，目的是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫，以獲得高質量質粒DNA。9）加入500ul溶液W（去鹽液），12000轉離心1min，棄濾液，重復一次。10）12000轉離心3min，以徹底去除純化柱中殘留的液體。11）將DNA純化柱置于新的離心管中，懸浮滴加50100ul溶液Eluent（為無菌的雙蒸水，），室溫放置2min。12）12000轉離心1min，此時管底即為高純度的質粒DNA，質粒于20℃保存。質粒提取步驟：，棄上清，吸取培養(yǎng)基重復離心棄上清離心，留取少量菌液作為菌種保存，可直接置于20℃——加250ulBufferS1懸浮細菌，懸浮均勻——加250ulBufferS2溫和充分的上下翻轉46次混合均勻，使菌體裂解——加350ulBufferS3溫和上下翻轉12000離心10min——取上清液轉移到專用的制備管（2ml）12000轉離心1min，棄濾液——加500ulBufferW112000轉離心1min，棄濾液——加500ulBufferW212000轉離心1min，棄濾液，重復一遍——將制備管置回2ml離心管12000轉離心1min——，加60~80ulEluent或離子水，室溫1min12000轉離心1min——移去制備管，將有質粒的離心管于4℃或是20℃保存質粒DNA和其他包裝質粒共轉染293T細胞產生病毒（即病毒包裝）, 表達SV40大T抗原的人腎上皮細胞系, 被廣泛應用于瞬時轉染以過表達各種目標蛋白, 或是用以包裝病毒。：某些細胞質中的天然脂質小體，可作為生物膜，用于捕獲外源性物質后更有效地運送
黨政相關相關推薦
鄂ICP備17016276號-1