β-地中海貧血基因檢測pcr-反向點雜交法(編輯修改稿)
2024-08-13 19:16 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 法一次只能檢測一種突變的模式，具有快速、簡便、高敏感度和特異性強的特點，尤其在基因突變檢測、基因分型、病原體的檢測等領(lǐng)域有其獨特的優(yōu)勢。 反向斑點雜交技術(shù) 反向斑點雜交采用生物素標(biāo)記的引物進行靶核酸的擴增，將擴增產(chǎn)物同固定在尼龍膜上的探針進行雜交，一次雜交反應(yīng)可以檢測多種靶序列。該方法具有快速、簡便，高靈敏度和特異性的特點，廣泛應(yīng)用于病原體檢測、基因突變檢測、基因分型以及遺傳多態(tài)性檢測等多個方面，具有潛在的臨床應(yīng)用價值。 反向斑點雜交技術(shù)原理 【 操作步驟 】 （已準(zhǔn)備好了） （采用試劑盒） ： 反應(yīng)液管（做好記號）5000rpm， 2秒 加入 2ul DNA溶液 總體積 25微升 反應(yīng)體系各組分的用量見理論課內(nèi)容 PCR擴增條件 50℃ ， 15min 95℃ ， 10min 94℃ ， 1min 55℃ ， 30sec 72℃ ， 30sec 72℃ ， 7min 35cycles 反應(yīng)條件按照試劑盒要求 影響 PCR的因素見理論課內(nèi)容 ： 15ml管 探針膜條（做好記號） A液 56ml DNA溶液（ PCR產(chǎn)物） 25ul 沸水浴 10min 42℃ 雜交 ： 50ml塑料管 B液 40ml 42 ℃ 預(yù)熱
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