傳染病實習(xí)報告doc(編輯修改稿)
2024-08-13 16:53 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 棄上清，%乙醇，振搖，4℃12000rpm離心5min；5. 棄上清，干燥沉淀物（室溫約5min）；加入20ulDEPC水溶解沉淀。（四）RTPCR（鑒別高致病性和非高致病性毒株）上游引物：539。CAAAGAYCAGATGGAGGAG339。下游引物：539。ATRATGGCTTGAGCTGAG339。PCR反應(yīng)體系（總體系為25ul)模板 4ul（上述RNA提取備用液）10*Mg2+free butter ?L1Mg2+ 25mmol?L1Mg2+ 20pmol?L1Dnsp1161 20pmol?L1Dnsp1928 Taq DNA聚合物 滅菌雙蒸水 反應(yīng)循環(huán)參數(shù)為：94℃3min，48℃45s，72℃75s，進行5個循環(huán)；然后94℃1min，54℃45s，72℃75s，進行34個循環(huán)；72℃延伸10min。%的瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察。 日期： 星期：星期四 晚上6:00——9:30（一）細菌學(xué)實驗1. 實驗材料：?生化反應(yīng)管：商品化的葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、D核糖、麥芽糖、尿素、乙酰胺、硫化氫、鳥氨酸脫羧酶生化反應(yīng)管。?商品化試劑：藥敏試紙、PCR試劑、引物、瓊脂糖?細菌：商品化金黃色葡萄球菌 用接種針（無菌）取分離的細菌24h純培養(yǎng)物分別接種到含葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、D核糖、麥芽糖、尿素、乙酰胺、硫化氫、鳥氨酸脫羧酶的生化反應(yīng)管中，開口向下，放到滅菌培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果并記錄。 同時進行脲酶試驗、氧化酶試驗和接觸酶試驗。（1）糖類分解試驗原理：接種細菌若發(fā)酵某種糖或醇，可產(chǎn)酸，使培養(yǎng)液顏色由紫色 變?yōu)辄S色；如發(fā)酵的同時又產(chǎn)生氣體，培養(yǎng)液顏色由紫色變?yōu)辄S色的同時，在微量發(fā)酵管頂部積有氣泡。 結(jié)果判定：接種后24h觀察結(jié)果。產(chǎn)酸，培養(yǎng)液顏色由紫色變?yōu)辄S色；產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培養(yǎng)液顏色由紫色變?yōu)辄S色，并在微量發(fā)酵管頂部積有氣泡。（2）脲酶試驗原理：細菌分解尿素產(chǎn)生兩分子氨，培養(yǎng)基pH升高，指示劑酚紅顯示出紅色，即證明細菌有脲酶。 接種方法及結(jié)果判定：用接種環(huán)將細菌培養(yǎng)物接種與尿素瓊脂斜面，不要穿刺到底，下部留作對照。1～6h觀察，有時需要24h到6d。陽性反應(yīng)，則瓊脂斜面有粉紅到紫紅色。陰性反應(yīng)，不變色。（3） 氧化酶試驗原理：氧化酶或稱細胞色素氧化酶，是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。作氧化酶試驗時，此酶首先使細胞色素C氧化，然后氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。接種方法及結(jié)果判定：取白色潔凈濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴，陽性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深，再加α萘酚溶液一滴，陽性者于半分鐘內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍色。陰性于兩分鐘內(nèi)不變色。（4）接觸酶試驗（也叫做觸媒實驗或者過氧化氫酶實驗） 原理：具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。接種方法及結(jié)果判定：取槽置于潔凈的試管內(nèi)或玻片上，然后加3％過氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3％過氧化氫于不含血液的細菌培養(yǎng)物中，立即觀察結(jié)果。有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。（5）硫化氫試驗原理：細菌分解含硫氨基酸，產(chǎn)生硫化氫，與培養(yǎng)基中的醋酸鉛或硫酸亞鐵發(fā)生反應(yīng)，形成黑色的硫化氫或硫化亞鐵。結(jié)果判定：接種后24h觀察結(jié)果，培養(yǎng)液變黑為陽性，不變色為陰性藥敏試紙種類：頭孢喹肟、頭孢曲松、阿米卡星、青霉素G、氨芐西林、頭孢唑林、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、阿莫西林、阿奇霉素、慶大霉素、新霉素、氯霉素、紅霉素、林可霉素、復(fù)方新諾明。用涂布棒將分離細菌涂布與TSA或鮮血平板上，將各種抗菌藥物圓紙片（任選7種）分別貼于培養(yǎng)基表面，各片距離要相等，37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)24h檢查。結(jié)果判定：根據(jù)藥物紙片周圍有無抑菌圈及其直徑大小，來判斷對藥物的敏感程度。無抑菌圈，細菌對該抗生素不敏感；抑菌圈小于10mm，對該抗生素低度敏感。4. 細菌在血平板上的初步鑒定將副豬嗜血桿菌水平劃線接種鮮血瓊脂平板上，再挑取金黃色葡萄球菌垂直于
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