傳染病實(shí)習(xí)報(bào)告doc(編輯修改稿)
2024-08-13 16:53 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 棄上清，%乙醇，振搖，4℃12000rpm離心5min；5. 棄上清，干燥沉淀物（室溫約5min）；加入20ulDEPC水溶解沉淀。（四）RTPCR（鑒別高致病性和非高致病性毒株）上游引物：539。CAAAGAYCAGATGGAGGAG339。下游引物：539。ATRATGGCTTGAGCTGAG339。PCR反應(yīng)體系（總體系為25ul)模板 4ul（上述RNA提取備用液）10*Mg2+free butter ?L1Mg2+ 25mmol?L1Mg2+ 20pmol?L1Dnsp1161 20pmol?L1Dnsp1928 Taq DNA聚合物 滅菌雙蒸水 反應(yīng)循環(huán)參數(shù)為：94℃3min，48℃45s，72℃75s，進(jìn)行5個(gè)循環(huán)；然后94℃1min，54℃45s，72℃75s，進(jìn)行34個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。%的瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀(guān)察。 日期： 星期：星期四 晚上6:00——9:30（一）細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)1. 實(shí)驗(yàn)材料：?生化反應(yīng)管：商品化的葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、D核糖、麥芽糖、尿素、乙酰胺、硫化氫、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶生化反應(yīng)管。?商品化試劑：藥敏試紙、PCR試劑、引物、瓊脂糖?細(xì)菌：商品化金黃色葡萄球菌 用接種針（無(wú)菌）取分離的細(xì)菌24h純培養(yǎng)物分別接種到含葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、D核糖、麥芽糖、尿素、乙酰胺、硫化氫、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶的生化反應(yīng)管中，開(kāi)口向下，放到滅菌培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h，觀(guān)察結(jié)果并記錄。 同時(shí)進(jìn)行脲酶試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)和接觸酶試驗(yàn)。（1）糖類(lèi)分解試驗(yàn)原理：接種細(xì)菌若發(fā)酵某種糖或醇，可產(chǎn)酸，使培養(yǎng)液顏色由紫色 變?yōu)辄S色；如發(fā)酵的同時(shí)又產(chǎn)生氣體，培養(yǎng)液顏色由紫色變?yōu)辄S色的同時(shí)，在微量發(fā)酵管頂部積有氣泡。 結(jié)果判定：接種后24h觀(guān)察結(jié)果。產(chǎn)酸，培養(yǎng)液顏色由紫色變?yōu)辄S色；產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培養(yǎng)液顏色由紫色變?yōu)辄S色，并在微量發(fā)酵管頂部積有氣泡。（2）脲酶試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解尿素產(chǎn)生兩分子氨，培養(yǎng)基pH升高，指示劑酚紅顯示出紅色，即證明細(xì)菌有脲酶。 接種方法及結(jié)果判定：用接種環(huán)將細(xì)菌培養(yǎng)物接種與尿素瓊脂斜面，不要穿刺到底，下部留作對(duì)照。1～6h觀(guān)察，有時(shí)需要24h到6d。陽(yáng)性反應(yīng)，則瓊脂斜面有粉紅到紫紅色。陰性反應(yīng)，不變色。（3） 氧化酶試驗(yàn)原理：氧化酶或稱(chēng)細(xì)胞色素氧化酶，是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。作氧化酶試驗(yàn)時(shí)，此酶首先使細(xì)胞色素C氧化，然后氧化型細(xì)胞色素C再使對(duì)苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。接種方法及結(jié)果判定：取白色潔凈濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液一滴，陽(yáng)性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深，再加α萘酚溶液一滴，陽(yáng)性者于半分鐘內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色。陰性于兩分鐘內(nèi)不變色。（4）接觸酶試驗(yàn)（也叫做觸媒實(shí)驗(yàn)或者過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)） 原理：具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過(guò)氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。接種方法及結(jié)果判定：取槽置于潔凈的試管內(nèi)或玻片上，然后加3％過(guò)氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3％過(guò)氧化氫于不含血液的細(xì)菌培養(yǎng)物中，立即觀(guān)察結(jié)果。有大量氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng)性。不產(chǎn)生氣泡者為陰性。（5）硫化氫試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解含硫氨基酸，產(chǎn)生硫化氫，與培養(yǎng)基中的醋酸鉛或硫酸亞鐵發(fā)生反應(yīng)，形成黑色的硫化氫或硫化亞鐵。結(jié)果判定：接種后24h觀(guān)察結(jié)果，培養(yǎng)液變黑為陽(yáng)性，不變色為陰性藥敏試紙種類(lèi)：頭孢喹肟、頭孢曲松、阿米卡星、青霉素G、氨芐西林、頭孢唑林、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、阿莫西林、阿奇霉素、慶大霉素、新霉素、氯霉素、紅霉素、林可霉素、復(fù)方新諾明。用涂布棒將分離細(xì)菌涂布與TSA或鮮血平板上，將各種抗菌藥物圓紙片（任選7種）分別貼于培養(yǎng)基表面，各片距離要相等，37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)24h檢查。結(jié)果判定：根據(jù)藥物紙片周?chē)袩o(wú)抑菌圈及其直徑大小，來(lái)判斷對(duì)藥物的敏感程度。無(wú)抑菌圈，細(xì)菌對(duì)該抗生素不敏感；抑菌圈小于10mm，對(duì)該抗生素低度敏感。4. 細(xì)菌在血平板上的初步鑒定將副豬嗜血桿菌水平劃線(xiàn)接種鮮血瓊脂平板上，再挑取金黃色葡萄球菌垂直于
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