高中生物動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體教案2新人教版選修(編輯修改稿)
2025-07-04 23:24 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 要得到能產(chǎn)生所需抗體的B淋巴細(xì)胞，必須對(duì)小鼠進(jìn)行免疫處理，即給小鼠皮下或脾內(nèi)注射特定的抗原，為保證B淋巴細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量，往往需要進(jìn)行初次免疫、二次免疫和加強(qiáng)免疫，然后取免疫小鼠的脾獲得B淋巴細(xì)胞。骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)與免疫小鼠屬于同一品系，這樣雜交融合率高，并且應(yīng)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、活性強(qiáng)的細(xì)胞。[問題] 選擇雜交瘤細(xì)胞的兩步篩選的目的各是什么？第一步篩選的目的是獲得雜交瘤細(xì)胞。原因是B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合后用聚乙二醇處理誘導(dǎo)融合，這樣處理后的細(xì)胞中有以下五種：未融合的B淋巴細(xì)胞、未融合的骨髓瘤細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞的融合細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的細(xì)胞，其中只有B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞才是我們需要的雜種細(xì)胞。篩選的方法是在特定的選擇性培養(yǎng)基（HAT選擇培養(yǎng)基）中培養(yǎng)，由于骨髓瘤細(xì)胞缺乏胸苷激酶或次黃嘌呤核糖轉(zhuǎn)移酶，故不能生長(zhǎng)繁殖，而融合的雜種細(xì)胞具有上述兩種酶故可以生長(zhǎng)，由此可篩選出雜交瘤細(xì)胞。第二步篩選的目的是獲得能產(chǎn)生所需單一抗體的雜交瘤細(xì)胞。因?yàn)樾∈篌w內(nèi)的B淋巴細(xì)胞有很多種，因此獲得的雜交瘤細(xì)胞可能產(chǎn)生不同的抗體，需要從中篩選出能產(chǎn)生我們所需的單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，篩選的方法是專一抗體檢驗(yàn)。[問題]如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測(cè)及克隆化培養(yǎng)？融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞，但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀
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