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正文內(nèi)容

牛羊胚胎移植技術(shù)(編輯修改稿)

2025-07-04 03:04 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 SH25FSH 20+發(fā)情 .LH:110單位發(fā)情 晚18:0019:00FSH30FSH25FSH 20+發(fā)情 發(fā)情 138iu早6:007:00FSH28FSH23FSH 18+發(fā)情 .LH:100單位發(fā)情 晚18:0019:00FSH28FSH23FSH 18+發(fā)情 發(fā)情 120iu早6:007:00FSH28FSH23FSH 18+發(fā)情 .LH:100單位發(fā)情 晚18:0019:00FSH28FSH23FSH 18+發(fā)情 發(fā)情 注:括號中的數(shù)字為山羊FSH注射周期天數(shù)。 (二)山羊超數(shù)排卵方法羊的超排原理基本與牛相同,即在發(fā)情周期的功能性黃體期,或為控制發(fā)情而用孕激素處理結(jié)束前后,給予促卵泡素處理。綿羊的發(fā)情周期為16—17天,發(fā)情持續(xù)時間為24—36h,發(fā)情開始后24—30h開始排卵;山羊的發(fā)情周期為20—21天(也有短周期),發(fā)情持續(xù)時間為32—40 h,發(fā)情開始后30—36h開始排卵。所以,綿羊一般在情期的第11—13天、山羊在第9—17天進行超排處理。目前選用的超排方案大致可分為三類,而各類之間又可以相互結(jié)合以提高超排效果。山羊的超排效果高于綿羊。綿羊用PMSG處理平均排3—10枚卵,用FSH為8—15枚。山羊(主要是安哥拉山羊)用PMSG處理平均排10枚用以上,用FSH為15—18枚。1.孕激素+PMSG或FSH—P的超排方法孕激素的處理方法主要有陰道海綿栓法、皮下埋植法、注射和口服法。由于用孕酮處理需要的劑量大,不宜在生產(chǎn)中推廣,因此目前多用人工合成的孕激素類制劑,如Cronolone,MAP(甲孕酮)、FGA(氟孕酮)和18甲基炔諾酮等。這類制劑的生物學(xué)活性比孕酮高出10—20倍。孕酮每日肌注10—12mg,綿羊需12—14天,山羊需14—18天;用Cronolone3045mg、MAP60mg或FGA30—40mg制成的海綿栓,在綿羊陰道內(nèi)放置12—14天,山羊14—18天。在取出海綿栓前1—2天,一次肌注PMSGl000—2000IU(即20—45IU/kg體重),或者FSH—P總劑量1224mg(國產(chǎn)300IU),按1日2次遞減肌注或皮下注射34天,海綿栓撤出后12天開始發(fā)情。為縮短處理時間,孕激素可與PGF2a結(jié)合起來使用。2.PMSG或FSH十PGS的超排方法近十幾年來,由于PGF2a?;蚱漕愃莆锶缏惹傲邢┐糚GF2a等的應(yīng)用,可在發(fā)情的第6天至黃體退化前的任何一天作超排處理,但在情期前8天的功能性黃體需加大劑量。在明確供體綿羊發(fā)情周期的第10—12天、山羊第14—18天,使用PMSG一次肌注10O—2000IU;使用FSH(12—24)需在情期第1113天(綿羊)或13—16天(山羊)開始每日2次分3天遞減劑量注射。在促性腺激素開始處理后2天,綿羊一次肌注PGF2a8—15mg,山羊為410mg;氯前列烯醇分別為150—250ug和100—250ug。如不明確供體羊發(fā)情周期時,可采用PG的二次注射法,綿羊需間隔8—10天,山羊10—12天,促性腺激素在第二次注射前2天開始處理。3.單獨使用則PMSG或FSH的超排方法在供體綿羊發(fā)情周期的第11—13天,山羊為第16—17天一次肌注PMSG或遞減法注射FSH。但本法超排效果沒有以上兩類好。有些學(xué)者認為山羊?qū)MSG的反應(yīng)不同于牛和綿羊,在超排處理時需要補充注射促排激素如HCG、LH等,通常在發(fā)情后肌注HCGl00IU或注射150大白鼠單位(國產(chǎn))。(三)影響羊超排效果的因素每種家畜的個體對超排處理的反應(yīng)存在很大差異,往往造成在用相同處理方法時,結(jié)果差距很大,有的供體排卵很多,而有的供體無反應(yīng)。目前已知影響羊超排反應(yīng)的因素主要有以下幾種。1.促性腺激素除激素的種類、劑量、效價、投藥時間和次數(shù)外,制造的廠家、批號以及藥劑的保存方法和處理程序也都影響超排效果。據(jù)丁紅等報道,使用同一廠家生產(chǎn)的兩個批號的FSH處理綿羊,劑量和處理方法相同,排卵數(shù)分別為19.74177。9.18和15.57177。,177。177。 ,兩批號間無顯著差異;177。 177。 ,差異顯著。2.個體差異羊的品種、年齡和營養(yǎng)狀況等都會影響超排效果。一般繁殖力高的品種對促性腺激素的反應(yīng)比繁殖力低的品種好,成年羊比幼齡羊的反應(yīng)好,營養(yǎng)狀況好的比營養(yǎng)差的反應(yīng)好。山羊的超排效果優(yōu)于綿羊。Amstrong和Evans (1983)對安哥拉山羊、薩??搜?、美利奴羊及羅姆尼羊,用相似方法進行超排,結(jié)果發(fā)現(xiàn)綿羊的三個品種間有很大差異,177。,177。9枚,177。 ;年齡不足1歲的綿羊和山羊超排效果差,受精率低。丁紅等(1989)報道,7歲以上的綿羊超排效果趨于下降。3.季節(jié)Cherardi和Lindsay(1980)在澳大利亞將50只綿羊分5批用PMSG(400、800、1000IU)研究一年中的排卵效果,結(jié)果發(fā)現(xiàn)春季(3月)最低,秋季(9月)最高。據(jù)丁紅等對綿羊自然排卵情況的觀察,新疆山區(qū)牧場的細毛羊發(fā)情旺期在912月份,10月份最高,%,%。13月卵巢仍有活動,47月為乏情期。青年母羊的發(fā)情、排卵率低于成年母羊。4.供體本身的FSH水平家畜在自然情況下,發(fā)情前出現(xiàn)FSH和LH的分泌峰值,促使卵泡的生長形成卵泡腔,因為只有有腔卵泡才能接受外源促性腺激素的刺激而發(fā)生排卵。在自然情況下,約99%的有腔卵泡發(fā)生閉鎖退化,只有1%左右的卵泡在排卵時排出卵子。研究證明FSH在卵泡腔形成過程中起重要作用,它能刺激顆粒細胞的有絲分裂和卵泡液的形成,還可以通過增加LH感受器的數(shù)目而誘發(fā)顆粒細胞對LH的敏感性。母畜在排卵前的2030h出現(xiàn)第二次FSH高峰,其目的是啟動另一批卵泡形成卵泡腔,為下一個情期排卵作準備。排卵率高的羊此峰值明顯高于排卵率低的羊,而且分泌的FSH量與17天后卵巢上的有腔卵泡數(shù)量呈正比。為此,作者于1988年在供體母羊超排處理前情期的第二天,用小劑量252u的FSH肌注作預(yù)處理,,可用胚12枚,、差異顯著。第三節(jié) 發(fā)情鑒定與人工授精一、發(fā)情鑒定 供體牛發(fā)情鑒定 在第八次注射FSH—P之后,對超排供體牛,每隔6小時觀察一次發(fā)情情況,每次半小時以上。以母牛站立接受其它牛爬跨做為發(fā)情的標準。 供體羊發(fā)情鑒定 在第6次注射FSHP時即對超排供體羊觀察發(fā)情。觀察時間:早(6:007:00),晚(18:0019:00)。觀察方法:試情公羊扎好試情布,放入母羊群中試情,每3040只供體羊需1只試情公羊,以母羊站立接受試情公羊爬跨作為發(fā)情的標準。二、人工授精牛的人工授精 共配3次,每次2支細管,每個子宮角各一支,間隔為12個小時。若發(fā)情沒有結(jié)束,可再次配種。羊的人工授精 共配3次,,間隔為12個小時。若發(fā)情沒有結(jié)束,可再次配種。第六節(jié) 受體的同期發(fā)情胚胎移植的成功率在很大程度上取決于供體與受體的發(fā)情同期化。這是因為在發(fā)情周期內(nèi),母畜生殖道的生理特點變化很大,兩者差異大,移植后不利胚胎成活,甚至完全失敗。因此要嚴格控制,使其一致,最多前后差異不得超過l天。在使用新鮮胚胎的情況下,胚胎必須當天移植,同期化尤其重要。發(fā)情同期化有兩種含義:一是受體的發(fā)情同期化,即一個供體,在正常超排情況下可以收集到可用胚胎7個——8個,為其準備受體也需7個——8個,因此受體牛要同期化;二是供體和受體的發(fā)情同期化,也就是使同期化的一群受體牛和供體牛再同期化。一、牛同期化發(fā)情處理方法同期化處理之前對受體牛進行直腸觸摸,檢查卵巢是否處于活動狀態(tài)。處于活動狀態(tài)的牛方可進行同期化發(fā)情處理。(1)藥品:氯前列烯醇:/2ml/支。(2)劑量:——/——/次。(3)方法:二次注射法(肌注);第一次注射:在任意一天第二次注射:在第一次注射后11天,第二次注射后24—96小時觀察發(fā)情。受體牛發(fā)情之日計為O天,6—8天內(nèi)進行胚胎移植。二、羊的同期發(fā)情處理方法(1)藥品:ICI80996(氯前列烯醇):。(2)劑量:。(3)方法:二次注射法(肌注)第一次注射:在任意一天第二次注射:綿羊在第一次注射后7天,山羊在第一次注射后910天,第二次注射后2496小時觀察發(fā)情。受體羊發(fā)情之日計為0天,按胚齡要求進行移植。三、受體發(fā)情鑒定及注意事項同期發(fā)情的鑒定方法與自然發(fā)情基本一致,但由于同期發(fā)情是采用外用激素催情所致,部分受體只表現(xiàn)外部發(fā)情,生殖器官并未相應(yīng)變化。因此,除采用外部觀察、判斷外,還需要借助其它方式做進一步的鑒定。(1)受體牛的發(fā)情鑒定 應(yīng)對受體牛跟群觀察,(以小時為單位記錄)。并借助直腸檢查,根據(jù)卵巢的卵泡是否發(fā)育做進一步的判斷。(2)受體羊的發(fā)情鑒定方法與供體羊的方法相同。但必須準確記錄受體羊接受試情公羊爬跨的具體時間(以小時為單位進行記錄)。第五節(jié) 供受體的飼養(yǎng)管理一、牛的飼養(yǎng)管
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