【文章內(nèi)容簡介】 文獻(xiàn)：李景喜等參考文獻(xiàn)：李景喜等 . 非放射性碘標(biāo)記一電感耦合等非放射性碘標(biāo)記一電感耦合等離子體質(zhì)譜用于免疫分析研究離子體質(zhì)譜用于免疫分析研究 . 植物生態(tài)學(xué)報(bào)植物生態(tài)學(xué)報(bào) ,2022, 34 (2): 170–178 1)酶聯(lián)免疫分析（酶聯(lián)免疫分析（ enzyme immunoassay,EIA) 用酶作為標(biāo)記物標(biāo)記抗原（抗體），以酶促底物反應(yīng)產(chǎn)物用酶作為標(biāo)記物標(biāo)記抗原（抗體），以酶促底物反應(yīng)產(chǎn)物 的顏色作為檢測信號的免疫分析方法。的顏色作為檢測信號的免疫分析方法。 酶及底物：酶及底物： 辣根過氧化酶辣根過氧化酶 —— 鄰苯二胺鄰苯二胺 堿性磷酸酶堿性磷酸酶 —P 硝基酚磷酸鹽硝基酚磷酸鹽 測定模式測定模式 : 競爭性競爭性 非競爭性非競爭性 免疫分析類型（用途，分離及分析技術(shù)）免疫分析類型（用途，分離及分析技術(shù)） 免疫測定免疫測定 均相均相 （（ AbAgE酶活性改變，與酶活性改變，與 AgE相區(qū)分）相區(qū)分） (不分離不分離 F與與 B) 液相（液相（ EIA) 非均相非均相 標(biāo)記抗原標(biāo)記抗原類型類型 （（ 分離分離 F與與 B) 固相（固相（ ELISA) 標(biāo)記抗體標(biāo)記抗體 光鏡水平光鏡水平 免疫組化免疫組化 電鏡水平電鏡水平 酶標(biāo)測定簡便，使用范圍較廣，但因酶反應(yīng)對環(huán)境條件敏感，酶標(biāo)測定簡便，使用范圍較廣，但因酶反應(yīng)對環(huán)境條件敏感， 定量性較差。定量性較差。 非均相液相法非均相液相法非均相固相法（固定抗原）非均相固相法（固定抗原） 均相酶標(biāo)抗原均相酶標(biāo)抗原 2)化學(xué)發(fā)光免疫分析（化學(xué)發(fā)光免疫分析（ chemical luminescent immunoassay,CLIA）） 用某些發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原（抗體），當(dāng)其被氧用某些發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原（抗體），當(dāng)其被氧化時，可被化學(xué)反應(yīng)激發(fā)而發(fā)光，以其發(fā)光作為檢化時，可被化學(xué)反應(yīng)激發(fā)而發(fā)光，以其發(fā)光作為檢測信號的免疫測定法。測信號的免疫測定法。o 直接化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記法直接化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記法 標(biāo)記物為吖啶脂，該類化合物結(jié)構(gòu)上都有吖啶標(biāo)記物為吖啶脂，該類化合物結(jié)構(gòu)上都有吖啶環(huán)，在過氧化氫陰離子（環(huán)，在過氧化氫陰離子（ HO2)作用下，形成電子激作用下，形成電子激發(fā)態(tài)中間體發(fā)態(tài)中間體 N甲基吖啶酮，其退激是放出甲基吖啶酮，其退激是放出?=395nm,430nm的光子。的光子。o 酶標(biāo)化學(xué)發(fā)光分析酶標(biāo)化學(xué)發(fā)光分析 以過氧化酶作為標(biāo)記，發(fā)光物質(zhì)作為酶的底以過氧化酶作為標(biāo)記，發(fā)光物質(zhì)作為酶的底物的免疫分析。物的免疫分析。 如魯米諾，異魯米如魯米諾，異魯米諾，在酶和啟動發(fā)光劑（諾，在酶和啟動發(fā)光劑（ NaOH+H2O2)作用下發(fā)光作用下發(fā)光。 1， 2二氧乙烷衍生物二氧乙烷衍生物 為磷酸脂酶設(shè)為磷酸脂酶設(shè)計(jì)的底物，含金剛烷基，在堿性磷酸酶作用下計(jì)的底物，含金剛烷基，在堿性磷酸酶作用下脫去磷酸根形成中間體，中間體自發(fā)性斷裂的脫去磷酸根形成中間體，中間體自發(fā)性斷裂的同時發(fā)出光子。同時發(fā)出光子。o電化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析 標(biāo)記物為三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記物為三聯(lián)吡啶釕 ([Ru(bpy)3]2+),當(dāng)用磁性微珠鏈接并吸附到電極表面誘使當(dāng)用磁性微珠鏈接并吸附到電極表面誘使電化學(xué)發(fā)光而作為檢測信號的免疫分析法電化學(xué)發(fā)光而作為檢測信號的免疫分析法。主要特點(diǎn)，在氧化劑。主要特點(diǎn)，在氧化劑 TPA不斷的到補(bǔ)充時不斷的到補(bǔ)充時，發(fā)光可周而復(fù)始進(jìn)行。，發(fā)光可周而復(fù)始進(jìn)行。ECLIA體系結(jié)構(gòu)圖 3)時間分辨熒光免疫分析（時間分辨熒光免疫分析（ time resolved fluorescence,TRF) 以鱉合三價鑭系元素銪（以鱉合三價鑭系元素銪（ Eu)、鋱（、鋱（ Tb)、鏑（鏑（ Dy)、釤（、釤（ Sm)為標(biāo)記物標(biāo)記抗原（抗體）為標(biāo)記物標(biāo)記抗原（抗體），利用其熒光延遲發(fā)射的特性，以與短壽命背，利用其熒光延遲發(fā)射的特性，以與短壽命背景熒光時間相區(qū)分的性質(zhì)進(jìn)行檢測的免疫分析景熒光時間相區(qū)分的性質(zhì)進(jìn)行檢測的免疫分析方法。方法。 分析光譜學(xué)性質(zhì)分析光譜學(xué)性質(zhì) 1) 激發(fā)光譜帶較寬（激發(fā)光譜帶較寬（ 300500nm),有利于增有利于增強(qiáng)激發(fā)，提高信號強(qiáng)度；強(qiáng)激發(fā)，提高信號強(qiáng)度； 2）發(fā)射譜帶較窄）發(fā)射譜帶較窄 (?10nm),有利于排除干擾；有利于排除干擾； 3)Stoke位移較大（位移較大（ 250300nm),有利有利于與激發(fā)光相區(qū)分；于與激發(fā)光相區(qū)分； 4）熒光壽命較長（）熒光壽命較長（ 60900?S),Eu3+為為714 ?S,而一般生色團(tuán)而一般生色團(tuán) 1100 ?S，蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì) 110 ?S，所以延遲測量可消除背靜干擾；，所以延遲測量可消除背靜干擾； 5）標(biāo)記穩(wěn)定，可保存）標(biāo)記穩(wěn)定，可保存 12年。年。波長 300 400 500 600 700Stakes吸光度Stakes位移示意圖激發(fā)光熒光光強(qiáng)度激發(fā)短壽命熒光長壽命熒光延遲時間 測量時間銪螯合物的激發(fā)、發(fā)射光譜LUMINO準(zhǔn)自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀器準(zhǔn)自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀器中國與國際免疫診斷現(xiàn)狀 中國 國際（歐美為主）放射免疫法（ＲＩＡ）． 興起于 20世紀(jì) 70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院；．產(chǎn)品處于衰退期；．廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。． 興起于 20世紀(jì) 60年代，現(xiàn)已基本退出臨床應(yīng)用；．產(chǎn)品生命周期已終結(jié)；．廠商試劑和儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。酶聯(lián)免疫法?。ǎ牛蹋桑樱粒?興起于 20世紀(jì) 80年代，現(xiàn)普遍使用于各級臨床機(jī)構(gòu)，為我國臨床免疫診斷的基本方法；．產(chǎn)品處于成熟期；．廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑尚未系列化。．興起于 20世紀(jì) 70年代，現(xiàn)仍在臨床應(yīng)用；．產(chǎn)品處于衰退期；．廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。化學(xué)發(fā)光免疫法（ＣＬＩＡ）． 引入于 20世紀(jì) 90年代，現(xiàn)個別較大醫(yī)院開展個別項(xiàng)目；．產(chǎn)品處于導(dǎo)入期或成長期；．無廠商開發(fā)生產(chǎn)，完全依賴進(jìn)口． 興起于 20世紀(jì) 80年代，現(xiàn)已被臨床普遍使用，成為臨床免疫診斷的支柱方法；．產(chǎn)品處于成熟期；．廠商試劑與儀器共同開發(fā)，儀器自動化程度高，試劑系列化狀態(tài) .4）各種體外分析法的比較化學(xué)發(fā)光與酶免的對比表化學(xué)發(fā)光與酶免的對比表酶酶 標(biāo)標(biāo) 化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光測量精度測量精度 定性定性 /半定量測量半定量測量 定量測量定量測量人體傷害人體傷害 底物有致癌性底物有致癌性 無無有效期有效期 較長較長 長長干擾因素干擾因素 較多較多 極少極少測試項(xiàng)目測試項(xiàng)目 少少 多多化學(xué)發(fā)光與放免的對比表化學(xué)發(fā)光與放免的對比表放放 免免 化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光測量精度測量精度 較高較高 高高人體傷害人體傷害 放射性放射性 無無有效期有效期 較長較長 長長干擾因素干擾因素 較多較多 極少極少測試項(xiàng)目測試項(xiàng)目 較多較多 多多化學(xué)發(fā)光與時間分化學(xué)發(fā)光與時間分 辨辨 熒光的對比：熒光的對比：化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光 時時 間間 分分 辨辨 熒熒 光光試劑試劑 基本情況基本情況 國內(nèi)已有很多廠家生國內(nèi)已有很多廠家生 產(chǎn)產(chǎn) 化學(xué)化學(xué) 發(fā)發(fā) 光光 試劑試劑 ，種，種類齊類齊 全，并大多數(shù)全，并大多數(shù) 項(xiàng)項(xiàng) 目都取得了國家目都取得了國家 藥監(jiān)藥監(jiān) 局局批準(zhǔn)，批準(zhǔn)， 試劑試劑 價格隨著化學(xué)價格隨著化學(xué) 發(fā)發(fā) 光系光系 統(tǒng)統(tǒng) 在國內(nèi)不在國內(nèi)不斷普及，兩三年內(nèi)斷普及，兩三年內(nèi) 試劑試劑 的價格的價格 還還 會下浮會下浮 30％％~50%。 只是由只是由 儀儀 器生器生 產(chǎn)產(chǎn) 廠家直接生廠家直接生 產(chǎn)產(chǎn) 供供 應(yīng)應(yīng) ，系列，系列 試劑試劑國家國家 藥監(jiān)藥監(jiān) 局批準(zhǔn)與否不局批準(zhǔn)與否不 詳詳 ， 試劑試劑 價格價格 較較 化學(xué)化學(xué) 發(fā)發(fā)光高，國內(nèi)外光高，國內(nèi)外 試劑試劑 生生 產(chǎn)產(chǎn) 廠家沒有此種廠家沒有此種 試劑試劑 和生和生產(chǎn)計(jì)產(chǎn)計(jì) 劃。劃。標(biāo)記標(biāo)記 物物 酶酶 發(fā)發(fā) 光底物兩光底物兩 級級 放大放大 稀土離子，如稀土離子，如 銪銪儀儀 器和器和 檢測檢測 技技 術(shù)術(shù)在歐美國家在歐美國家的使用的使用 在歐美在歐美 發(fā)發(fā) 達(dá)國家化學(xué)達(dá)國家化學(xué) 發(fā)發(fā) 光免疫光免疫 檢測檢測 超超 過過 整整個免疫個免疫 檢測檢測 市市 場場 的的 70％，替代了放免或％，替代了放免或 酶酶免。免。幾乎沒有使用幾乎沒有使用發(fā)發(fā) 展展 趨勢趨勢 是目前是目前 臨臨 床上國床上國 際際 通用最先通用最先 進(jìn)進(jìn) 的免疫分析的免疫分析技技 術(shù)術(shù) 替代放免淘汰替代放免淘汰 酶酶 免免 從國外來看不會成從國外來看不會成 為為 下一個免疫分析方法下一個免疫分析方法國內(nèi)外生國內(nèi)外生 產(chǎn)產(chǎn) 廠家廠家 瑞士瑞士 羅羅 氏、美國德普、美國氏、美國德普、美國 強(qiáng)強(qiáng) 生、德國生、德國 貝貝克曼、英國克曼、英國 邁邁 力德、美國雅培、德國索林等力德、美國雅培、德國索林等跨國公司均生跨國公司均生 產(chǎn)產(chǎn) 化學(xué)化學(xué) 發(fā)發(fā) 光免疫分析光免疫分析 儀儀 左左 邊邊 所述公司沒有生所述公司沒有生 產(chǎn)產(chǎn) ，國外公司未，國外公司未 見見 生生 產(chǎn)產(chǎn) ，目前國內(nèi)兩家公司生目前國內(nèi)兩家公司生 產(chǎn)產(chǎn)穩(wěn)穩(wěn) 定性定性 穩(wěn)穩(wěn) 定性好定性好 影響被影響被 標(biāo)記標(biāo)記 物生物活性與免疫活性物生物活性與免疫活性靈敏度靈敏度 靈敏度高靈敏度高 靈敏度高靈敏度高反反 應(yīng)應(yīng) 體系體系 接近中性接近中性 酸性，易引起蛋白酸性，易引起蛋白 質(zhì)變質(zhì)變 性性包被技包被技 術(shù)術(shù) 不透明微量孔壁吸附不透明微量孔壁吸附 ,提高分析靈敏度提高分析靈敏度 ,降低降低本底本底 采用透明微量孔壁吸附，孔壁的透明度會引起本采用透明微量孔壁吸附，孔壁的透明度會引起本底干底干 擾擾技技 術(shù)術(shù) 性性 新技新技 術(shù)術(shù) ，很成熟，很成熟 新技新技 術(shù)術(shù) ，不成熟，不成熟干干 擾擾 因素因素 干干 擾擾 極小極小 容易受內(nèi)外源稀土離子的干容易受內(nèi)外源稀土離子的干 擾擾試劑試劑 種種 類類 項(xiàng)項(xiàng) 目目 齊齊 全全 (見試劑報(bào)見試劑報(bào) 價價 單單 ) 缺少部分缺少部分 項(xiàng)項(xiàng) 目。目。 167。 中子活化分析中子活化分析 (neutron activation analysis ,NAA) 原理原理 利用中子核反應(yīng)將待測核素轉(zhuǎn)變成放射利用中子核反應(yīng)將待測核素轉(zhuǎn)變成放射性核素，而進(jìn)行放射性分析的一種核素分析方性核素，而進(jìn)行放射性分析的一種核素分析方法。按中子能量不同，可分為熱中子或快中子法。按中子能量不同，可分為熱中子或快中子活化兩類。熱中子一般利用（活化兩類。熱中子一般利用（ n,r）反應(yīng)激活樣）反應(yīng)激活樣品，其熱中子俘獲截面大品，其熱中子俘獲截面大 .快中子利用（快中子利用（ n,p））,(n,?)反應(yīng)激活樣品。反應(yīng)激活樣品。 穩(wěn)定核素穩(wěn)定核素 放射性核素放射性核素 穩(wěn)定核素穩(wěn)定核素 即穩(wěn)定核素經(jīng)中子俘獲核反應(yīng)，被活化即穩(wěn)定核素經(jīng)中子俘獲核反應(yīng)，被活化轉(zhuǎn)變成放射性核素。轉(zhuǎn)變成放射性核素。 如如 ,基于中子活化技術(shù)的煤炭全元素在線分析系基于中子活化技術(shù)的煤炭全元素在線分析系統(tǒng)的研究統(tǒng)的研究基于中子活化技術(shù)的煤炭全元素在線分析系基于中子活化技術(shù)的煤炭全元素在線分析系統(tǒng)統(tǒng)步驟步驟 活化分四個步驟，除樣品制備外，其余分三個為活化分四個步驟，除樣品制備外，其余分三個為：：o 輻照輻照 選擇對待測反應(yīng)截面大，且干擾反應(yīng)小的選擇對待測反應(yīng)截面大，且干擾反應(yīng)小的一定能量和通量的中子照射樣品，使待測核素一定能量和通量的中子照射樣品，使待測核素部分轉(zhuǎn)變成為放射核素。部分轉(zhuǎn)變成為放射核素。o 冷卻冷卻 在停止照射到測量過程，讓樣品等待的在停止照射到測量過程，讓樣品等待的一段時間一段時間 t2,目的是讓一些短壽命干擾核素衰變目的是讓一些短壽命干擾核素衰變掉，或?qū)Ρ徽丈錁悠纷霰匾姆呕蛛x。掉，或?qū)Ρ徽丈錁悠纷霰匾姆呕蛛x。 o 測量和數(shù)據(jù)分析測量和數(shù)據(jù)分析 通過對活化核素放出射線能通過對活化核素放出射線能量和強(qiáng)度的測量，對待測樣品進(jìn)行定性和定量量和強(qiáng)度的測量，對待測樣品進(jìn)行定性和定量分析。分析。 待測核素活化后的射線強(qiáng)度在簡單情況下待測核素活化后的射線強(qiáng)度在簡單情況下為為 其中，其中， W待測核素的重量；待測核素的重量； Na阿伏加德勒常阿伏加