疫學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法(2)(編輯修改稿)
2025-05-28 06:20 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 大小范圍： m 300 μ m 高等真核細(xì)胞 類(lèi)型 酵母 細(xì)胞類(lèi)型 細(xì)菌 多細(xì)胞的聚集體，如胰島等。 細(xì)胞核 非生命顆粒 染色體 其它細(xì)胞器以及乳化微球等。 細(xì)胞表型分析 胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測(cè) 細(xì)胞周期和 DNA倍體分析 細(xì)胞分選 ?主要用途 （ 1）多參數(shù)定量分析每一個(gè)細(xì)胞； （ 2）細(xì)胞分選； 高純度： 99%以上； 可分析小于 1/10000比例的稀有細(xì)胞群、 單細(xì)胞克隆等。 (3）高通量（分析分選）． 分析 150， 000個(gè) / 秒 分選 100， 000個(gè) /秒 ? 特點(diǎn) ? 基本結(jié)構(gòu) ?工作原理 二色鏡 1 2 3 帶通濾波片 光電倍增管 激光束 細(xì)胞 收集透鏡 前向散射光 側(cè)向散射光，熒光 a. 光信號(hào)收集分離，導(dǎo)向，各探測(cè)通道接收并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。 FSC SSC FL1 FL2 FL3 對(duì)數(shù) 線(xiàn)性 線(xiàn)性 線(xiàn)性 對(duì)數(shù) 脈沖處理，模數(shù)轉(zhuǎn)換 光信號(hào) 電信號(hào) 記錄數(shù)據(jù)，顯示結(jié)果 b. 數(shù)據(jù)處理 c. 細(xì)胞分選 488 nm laser + Charged Plates Single cells sorted into test tubes FALS Sensor Fluorescence detector 外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖 （紅細(xì)胞溶解后） 顆粒度 細(xì)胞大小 ?流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)分析 非熒光信號(hào) 直方圖分析 熒光信號(hào) 點(diǎn)狀圖分析 設(shè)門(mén)分析 可以通過(guò)設(shè)“ 門(mén) ” (Gate)，分析、分選感興趣的細(xì)胞。 ? 實(shí)驗(yàn)對(duì)照的設(shè)計(jì) 陰性對(duì)照：常用同型抗體對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照：?jiǎn)侮?yáng)性對(duì)照（多色分析時(shí)用于儀器校正） ? 抗體的選擇 首選直標(biāo)抗體 熒光分子 ? 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的處理 單細(xì)胞懸液的制備 抗體濃度 非特異結(jié)合的去除：洗滌和封閉 4. Western Blott 5. Hybridoma Technique amp。 Monoclonal Antibody Preparation Jerme， K246。hler and Milstein 1984 Nobel Prize B cell Myeloma Secrete Ab Clonal A clonal cell line secreting specific Ab ? B cell Myeloma Fusion B cell B cell+Bcell B cell+Myeloma Myeloma Myeloma+Myeloma alive B cell+Myeloma Myeloma Myeloma+Myeloma DNA A(氨基喋呤 ) HGPRT+， TK+ H, 次黃嘌呤 T, 胸腺嘧啶 HGPRT， TK Die HGPRT， TK H, 次黃嘌呤 T, 胸腺嘧啶 A clonal cell line secreting specific AbHy
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