沉淀分離法及應(yīng)用(2)(編輯修改稿)
2025-05-28 04:44 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 鹽析注意事項(xiàng)： 鹽析操作－－鹽析溶液 ? 硫酸銨是最常用的蛋白質(zhì)鹽析沉淀劑 ? 硫酸銨的溶解度在 0～ 30℃ 范圍內(nèi)變化很小 ? 20℃ 時(shí)的飽和濃度約為 （ 543g/dm3 ），飽和溶液密度為 。 ? 用 ，需加入 761g硫酸銨，飽和溶液體積為 。 淮南王 劉安 一人得道，雞犬升天 鹽析法 影響因素 A、 無機(jī)鹽種類 感膠離子序 (Hofmeister序列 ): In 1888， Hofmeister對(duì)一系列鹽沉淀蛋白質(zhì)的能力進(jìn)行了測(cè)定研究 。 陰離子排序?yàn)椋簷幟仕岣?3 酒石酸根 3 F IO3 H2PO4 SO4 CH3COO Cl ClO3 Br NO3 ClO4 I CNS。 對(duì)陽離子排序?yàn)椋? Th4+ Al3+ H+ Ba2+ Sr2+ Ca2+ Cs+ Rb+ NH4+ K+ Na+ Li+ 鹽析法 結(jié)論： a 不同種類的鹽主要影響 Ks； b 離子半徑小 ， 帶電多 ， 電荷密度高 ， 鹽析效果好 。 無機(jī)鹽的挑選原則： a 較高的鹽析效能； b 高溶解度 ， 能配置高離子強(qiáng)度的鹽溶液； c 溶解度受溫度的影響?。? d 鹽溶液的密度不高 ， 便于蛋白質(zhì)沉淀和離心分離； e 不易引起蛋白質(zhì)的變性； f 價(jià)格低廉； 最常用 (NH4)2SO4。 優(yōu)點(diǎn)：符合上述要求；缺點(diǎn)：水解后溶液 pH降低 ，在高 pH下產(chǎn)氨 ， 腐蝕性強(qiáng) ， 有異味 ， 有毒 ， 終產(chǎn)物必須除盡 。 次常用 Na2SO4。 缺點(diǎn)：在 400C以下溶解度較低 ， 主要用于熱穩(wěn)定蛋白 。 鹽析法 C、 溫度 T 主要考慮不能影響主要產(chǎn)物的活力 ,即在其穩(wěn)定的溫度下鹽析 ,可通過實(shí)驗(yàn)決定 ,一般來說 ,溫度越低 ,形成沉淀越不易 ,但也有相反的情況 .實(shí)際上 ,鹽析的溫度范圍較大 ,所有一般都在常溫下鹽析 . 等電點(diǎn)沉淀法 等電點(diǎn)沉淀法中的 pH值作用于β值而隱含在 Cohnx公式中 ，pI值通常在 pH4~6范圍內(nèi)變化 ， 一般用無機(jī)酸 （ 如鹽酸 、磷酸和硫酸 ） 作沉淀劑 。 在蛋白質(zhì)疏水性比較大和結(jié)合水比較小時(shí)這種類型的沉淀更有效 。 為了提高等電點(diǎn)法的沉淀能力 ， 常將其與鹽析法 、 有機(jī)溶劑法或其他沉淀法一起使用 。 最大缺點(diǎn)：無機(jī)酸會(huì)引起較大的蛋白質(zhì)不可逆變性的危險(xiǎn) 。 有機(jī)溶劑沉淀法 同鹽析一樣 ， 隨著沉淀劑 ——有機(jī)溶機(jī)濃度的上升 ， 蛋白質(zhì)溶解度也呈指數(shù)規(guī)律下降 。 式中 , So為當(dāng) （ K/e2） ? 0時(shí) S的外推值； e為水 有機(jī)溶劑混合物的介電常數(shù)；K為常數(shù) (水的介電常數(shù)的吸收系數(shù) )。 有機(jī)溶劑沉淀法 有機(jī)溶劑的種類： 丙酮 (首選 )、 乙醇 、 甲醇 和乙腈 ， 常用于低鹽濃度下沉淀 pro。 機(jī)理： A、 有機(jī)溶劑沉淀法的機(jī)理是加入溶劑后 ， 會(huì)使水溶液的介電常數(shù)降低 ， 而使 pro分子間的靜電引力 （ 庫侖力 ） 增大 ， 導(dǎo)致凝集和沉淀 。 B、 有機(jī)溶劑使 pro溶劑化 ， 使原來與 pro結(jié)合的水被溶劑所取代 ，從而降低了 pro溶解度 。 這種理論不能說明為什么乙醇比丙酮的親水性強(qiáng) ， 丙酮卻比乙醇沉淀
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