生物工程下游技術期末復習題(編輯修改稿)
2025-05-14 06:49 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 進入復性溶液進行復性。②金屬螯合色譜復性主要是針對Histine tag（組氨酸標簽）的基因工程蛋白質。將含有帶組氨酸標簽蛋白質的裂解液流過含有鎳的親和層析柱，組氨酸就可以與鎳螯合從而結合在柱子上，而裂解液中其他蛋白質由于沒有組氨酸標簽而直接流出柱子，從而達到分離目的。③親和色譜復性是利用抗原抗體相互作用、酶與底物相互作用或其他特異性相互作用幫助蛋白質復性。④其它吸附色譜復性方法。離子交換色譜、疏水作用色譜等色譜技術，通過選擇合適的條件，溶解了的包含體可以通過各種作用達到復性。 微囊化動物細胞及其應用目前微囊化細胞可以在兩方面應用，意識培養(yǎng)微囊化動物細胞以生產(chǎn)一些藥物；二是作為藥物直接用于治療或作為篩選藥物之用。一、 生產(chǎn)藥物上的應用 單克隆抗體的生產(chǎn)微囊化哺乳動物的主要應用是單克隆抗體的生產(chǎn)。微囊工藝已生產(chǎn)以克計的單克隆抗體。 高值生化藥物的生產(chǎn)一些生化藥物的生產(chǎn)，總生產(chǎn)率可達培養(yǎng)瓶生產(chǎn)的5被以上。而且，產(chǎn)物在電泳上顯示純度明顯高。 干擾素的生產(chǎn)通過對一些培養(yǎng)生產(chǎn)干擾素發(fā)現(xiàn)，細胞在微囊中生長比懸浮胖或單層培養(yǎng)更旺盛。二、 在治療及藥物篩選上的應用 人工器官微囊化動物細胞在排除免疫反應上可能有普遍意義。人們已將某些器官的細胞微囊化并植入體內(nèi)以期待能代替這些器官的功能。 抗癌藥物的篩選微囊化的腫瘤細胞用于估價抗癌藥物對活體的作用。人的腫瘤細胞經(jīng)微囊化后注入小鼠腹腔中，服用受檢的抗癌藥，檢測微囊化的腫瘤細胞對藥物的反應，結果發(fā)現(xiàn)抗癌藥能穿透微囊的膜作用于微囊中的腫瘤細胞，抑制和殺滅的水平與其他體外和體內(nèi)測定的藥效一致。同無機基質的填料相比較，有機高分子類型填料的普遍特征同無機基質的填料相比，有機高分子類型填料普遍具有如下特征：①它們的基質微球可以廣泛選擇各種天然的多糖為原料來制備，也可以廣泛使用各種的單體和交聯(lián)劑來制備。這些高分子材料一般都容易進行化學改性處理，所得到的填料普遍具有良好的色譜選擇性。②它們對于被分離樣品有較強的負載能力，有較高的色譜容量。這對于不哦他能夠規(guī)模的制備色譜來說是尤為適宜的。③他們具有良好的耐酸、耐堿和耐溶劑處理的化學穩(wěn)定性，可以在廣泛的pH值范圍內(nèi)使用，并且有較長的柱壽命和較好的再生能力。④它們不易產(chǎn)生不可逆的非特異性吸附作用，特別對于生物大分子的分離有較好的相容性，能有效地保持樣品的生物活性。諸多優(yōu)點，決定了有機高分子類型填料廣闊應用發(fā)展前景，尤其是對于分離純化生化物質所表現(xiàn)出的良好性能，已越來越受到研究者和應用者的重視。當然，需要指出的是，有機高分子類型填料的顆粒剛性還普遍不如無機基質填料那樣好，孔結構也往往比較復雜，在淋洗體系的變化過程中可能或多或少的會產(chǎn)生膨脹或收縮現(xiàn)象，所有這些影響色譜性能的因素，仍然有待于研究解決。常用的膜分離技術的分離原理以及常見的膜材料和種類。膜分離技術是用半透明作為選擇障礙層，允許某些組分透過而保留混合物中其他組分，從而達到分離目的的技術。常用的膜分離技術的分離原理主要有： 微濾利用篩分原理分離、既微濾。，. 超濾超濾的分離原理也可基本理解為篩分原理，但在有些情況下受到粒子荷電性及其與荷電膜相互作用的影響。它可分離分子量從3000到1000000 Da的可溶性大分子物質。 反滲透在高于溶液滲透壓的壓力作用下，只有溶液中的水透過膜，而所有溶液中大分子、小分子有機物及無機鹽全被截留住。 電滲析它是通過在點位差下用荷電膜從水溶液中分離離子的過程。 滲透蒸發(fā)它的基本原理是利用膜與被分離有機溶液混合物中各組分的親和力不同而有選擇地優(yōu)先吸附溶液某一組分及各組分在膜中的擴散速度不同來達到分離的目的。膜的分類上，分離膜按照膜的荷電性可分為中性膜，荷電膜兩種，荷電膜又分為荷正電膜與荷負電膜。按膜材料親疏水性可分為親水膜與疏水膜。膜材料上，目前國內(nèi)研究與生產(chǎn)設計的微濾和超濾膜材料有二乙酸纖維素、三乙酸纖維素、氰乙基纖維素。聚砜、磺化聚砜等。反滲透膜以芳香聚酰胺和聚呱嗪類復合膜為主，也有二乙酸纖維素、三乙酸纖維素等不對稱反滲透膜生產(chǎn)。電滲析用離子交換膜有異相膜和均相膜之分，材料有聚烯烴、聚偏氯乙烯等。滲透蒸發(fā)膜主要是親水性聚合物與硅橡膠類等。 HPLC柱對介質的要求和羥基磷灰石填料的性能。HPLC柱對于介質的要求和羥基磷灰石作為色譜填充介質的性能主要表現(xiàn)在以下幾個方面： 高機械強度 在HPLC柱中流動相一般在高壓下通過柱，因而要求填充介質具有高的機械強度?，F(xiàn)在使用的羥基磷灰石，尤其是球型顆?？梢栽?5MPa壓力下使用，通過強化方法制備的羥基磷灰石既所謂陶瓷羥基磷灰石可在幾十兆帕以上的壓力下使用。 粒子大小、形狀和孔隙填充介質的粒子大小、形狀以及表面結構與HPLC柱的理論塔板數(shù)直接相關，通常要求有高的理論塔板數(shù)。球型羥基磷灰石顆粒大小、性質和孔隙可滿足HPLC柱的要求。 化學和熱穩(wěn)定性色譜過程是流動相與固定相既填充介質之間頻繁強烈接觸中完成的，因此要求填充介質在流動相中有很好的化學穩(wěn)定性。羥
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