生物工程下游技術(shù)期末復(fù)習(xí)題(編輯修改稿)
2025-05-14 06:49 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 進(jìn)入復(fù)性溶液進(jìn)行復(fù)性。②金屬螯合色譜復(fù)性主要是針對(duì)Histine tag（組氨酸標(biāo)簽）的基因工程蛋白質(zhì)。將含有帶組氨酸標(biāo)簽蛋白質(zhì)的裂解液流過(guò)含有鎳的親和層析柱，組氨酸就可以與鎳螯合從而結(jié)合在柱子上，而裂解液中其他蛋白質(zhì)由于沒(méi)有組氨酸標(biāo)簽而直接流出柱子，從而達(dá)到分離目的。③親和色譜復(fù)性是利用抗原抗體相互作用、酶與底物相互作用或其他特異性相互作用幫助蛋白質(zhì)復(fù)性。④其它吸附色譜復(fù)性方法。離子交換色譜、疏水作用色譜等色譜技術(shù)，通過(guò)選擇合適的條件，溶解了的包含體可以通過(guò)各種作用達(dá)到復(fù)性。 微囊化動(dòng)物細(xì)胞及其應(yīng)用目前微囊化細(xì)胞可以在兩方面應(yīng)用，意識(shí)培養(yǎng)微囊化動(dòng)物細(xì)胞以生產(chǎn)一些藥物；二是作為藥物直接用于治療或作為篩選藥物之用。一、 生產(chǎn)藥物上的應(yīng)用 單克隆抗體的生產(chǎn)微囊化哺乳動(dòng)物的主要應(yīng)用是單克隆抗體的生產(chǎn)。微囊工藝已生產(chǎn)以克計(jì)的單克隆抗體。 高值生化藥物的生產(chǎn)一些生化藥物的生產(chǎn)，總生產(chǎn)率可達(dá)培養(yǎng)瓶生產(chǎn)的5被以上。而且，產(chǎn)物在電泳上顯示純度明顯高。 干擾素的生產(chǎn)通過(guò)對(duì)一些培養(yǎng)生產(chǎn)干擾素發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞在微囊中生長(zhǎng)比懸浮胖或單層培養(yǎng)更旺盛。二、 在治療及藥物篩選上的應(yīng)用 人工器官微囊化動(dòng)物細(xì)胞在排除免疫反應(yīng)上可能有普遍意義。人們已將某些器官的細(xì)胞微囊化并植入體內(nèi)以期待能代替這些器官的功能。 抗癌藥物的篩選微囊化的腫瘤細(xì)胞用于估價(jià)抗癌藥物對(duì)活體的作用。人的腫瘤細(xì)胞經(jīng)微囊化后注入小鼠腹腔中，服用受檢的抗癌藥，檢測(cè)微囊化的腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的反應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗癌藥能穿透微囊的膜作用于微囊中的腫瘤細(xì)胞，抑制和殺滅的水平與其他體外和體內(nèi)測(cè)定的藥效一致。同無(wú)機(jī)基質(zhì)的填料相比較，有機(jī)高分子類型填料的普遍特征同無(wú)機(jī)基質(zhì)的填料相比，有機(jī)高分子類型填料普遍具有如下特征：①它們的基質(zhì)微球可以廣泛選擇各種天然的多糖為原料來(lái)制備，也可以廣泛使用各種的單體和交聯(lián)劑來(lái)制備。這些高分子材料一般都容易進(jìn)行化學(xué)改性處理，所得到的填料普遍具有良好的色譜選擇性。②它們對(duì)于被分離樣品有較強(qiáng)的負(fù)載能力，有較高的色譜容量。這對(duì)于不哦他能夠規(guī)模的制備色譜來(lái)說(shuō)是尤為適宜的。③他們具有良好的耐酸、耐堿和耐溶劑處理的化學(xué)穩(wěn)定性，可以在廣泛的pH值范圍內(nèi)使用，并且有較長(zhǎng)的柱壽命和較好的再生能力。④它們不易產(chǎn)生不可逆的非特異性吸附作用，特別對(duì)于生物大分子的分離有較好的相容性，能有效地保持樣品的生物活性。諸多優(yōu)點(diǎn)，決定了有機(jī)高分子類型填料廣闊應(yīng)用發(fā)展前景，尤其是對(duì)于分離純化生化物質(zhì)所表現(xiàn)出的良好性能，已越來(lái)越受到研究者和應(yīng)用者的重視。當(dāng)然，需要指出的是，有機(jī)高分子類型填料的顆粒剛性還普遍不如無(wú)機(jī)基質(zhì)填料那樣好，孔結(jié)構(gòu)也往往比較復(fù)雜，在淋洗體系的變化過(guò)程中可能或多或少的會(huì)產(chǎn)生膨脹或收縮現(xiàn)象，所有這些影響色譜性能的因素，仍然有待于研究解決。常用的膜分離技術(shù)的分離原理以及常見(jiàn)的膜材料和種類。膜分離技術(shù)是用半透明作為選擇障礙層，允許某些組分透過(guò)而保留混合物中其他組分，從而達(dá)到分離目的的技術(shù)。常用的膜分離技術(shù)的分離原理主要有： 微濾利用篩分原理分離、既微濾。，. 超濾超濾的分離原理也可基本理解為篩分原理，但在有些情況下受到粒子荷電性及其與荷電膜相互作用的影響。它可分離分子量從3000到1000000 Da的可溶性大分子物質(zhì)。 反滲透在高于溶液滲透壓的壓力作用下，只有溶液中的水透過(guò)膜，而所有溶液中大分子、小分子有機(jī)物及無(wú)機(jī)鹽全被截留住。 電滲析它是通過(guò)在點(diǎn)位差下用荷電膜從水溶液中分離離子的過(guò)程。 滲透蒸發(fā)它的基本原理是利用膜與被分離有機(jī)溶液混合物中各組分的親和力不同而有選擇地優(yōu)先吸附溶液某一組分及各組分在膜中的擴(kuò)散速度不同來(lái)達(dá)到分離的目的。膜的分類上，分離膜按照膜的荷電性可分為中性膜，荷電膜兩種，荷電膜又分為荷正電膜與荷負(fù)電膜。按膜材料親疏水性可分為親水膜與疏水膜。膜材料上，目前國(guó)內(nèi)研究與生產(chǎn)設(shè)計(jì)的微濾和超濾膜材料有二乙酸纖維素、三乙酸纖維素、氰乙基纖維素。聚砜、磺化聚砜等。反滲透膜以芳香聚酰胺和聚呱嗪類復(fù)合膜為主，也有二乙酸纖維素、三乙酸纖維素等不對(duì)稱反滲透膜生產(chǎn)。電滲析用離子交換膜有異相膜和均相膜之分，材料有聚烯烴、聚偏氯乙烯等。滲透蒸發(fā)膜主要是親水性聚合物與硅橡膠類等。 HPLC柱對(duì)介質(zhì)的要求和羥基磷灰石填料的性能。HPLC柱對(duì)于介質(zhì)的要求和羥基磷灰石作為色譜填充介質(zhì)的性能主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面： 高機(jī)械強(qiáng)度 在HPLC柱中流動(dòng)相一般在高壓下通過(guò)柱，因而要求填充介質(zhì)具有高的機(jī)械強(qiáng)度?，F(xiàn)在使用的羥基磷灰石，尤其是球型顆?？梢栽?5MPa壓力下使用，通過(guò)強(qiáng)化方法制備的羥基磷灰石既所謂陶瓷羥基磷灰石可在幾十兆帕以上的壓力下使用。 粒子大小、形狀和孔隙填充介質(zhì)的粒子大小、形狀以及表面結(jié)構(gòu)與HPLC柱的理論塔板數(shù)直接相關(guān)，通常要求有高的理論塔板數(shù)。球型羥基磷灰石顆粒大小、性質(zhì)和孔隙可滿足HPLC柱的要求。 化學(xué)和熱穩(wěn)定性色譜過(guò)程是流動(dòng)相與固定相既填充介質(zhì)之間頻繁強(qiáng)烈接觸中完成的，因此要求填充介質(zhì)在流動(dòng)相中有很好的化學(xué)穩(wěn)定性。羥
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