【文章內(nèi)容簡介】 人有關(guān)腫瘤方面的健康體檢、普查，特別是對中老年人定期健康體檢，通過腫瘤蛋白蕊片、基因檢測等手段為腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、 早期診斷、早期治療提供幫助，同時提供有關(guān)腫瘤最新的科學預防、治療知識：腫瘤醫(yī)院在重視醫(yī)療質(zhì)量的同時，特別重視人才培養(yǎng)和科研工作，每年都有計劃地把年輕業(yè)務骨干送到國內(nèi)外知名醫(yī)院進修學習。在省內(nèi)率先開展同種異體骨移植及異體半關(guān)節(jié)移植手術(shù)、乳腺癌改良根治同期腹直肌肌皮瓣乳房重建、開展冷循環(huán)超能射頻治療腫瘤、腹腔鏡下直腸癌根治術(shù)、立體定向適形放射治療獲得成功，并建立了云南省第一個大型超低溫冷凍骨庫；開展自體外周血造血干細胞移植支持大劑量化療。承擔著昆明醫(yī)學院研究生、本科生、大專生的教學任務。2006年開展了局部晚期肺癌擴大手術(shù)、肺癌侵犯上腔靜脈，左心房行上腔靜脈置換、左心房部分切除、肺葉切除手術(shù)等多項新技術(shù)研究；同時承擔了昆明醫(yī)學院創(chuàng)新群體基金等基金項目；編寫腫瘤學系列教材5部，其中《臨床腫瘤外科學》、《臨床腫瘤內(nèi)科學》已于2006年11月由云南省科技出版社正式出版。2006年繼續(xù)承擔昆明醫(yī)學院腫瘤學專業(yè)本科生、夜大生、高職生的教學任務和護理專業(yè)部份學生的臨床實習工作。藥學專業(yè)臨床課程的本科教學和成教學院的授課任務，醫(yī)學影像、檢驗、麻醉、護理專業(yè)的部分課程。目前，云南省腫瘤醫(yī)院有學科帶頭人3人，有105人具有高級職稱；有博士2人，碩士29人（還有在讀博士生4人，在讀碩士78人）。已招收研究生40名。 2005年計劃招收研究生 23名。2006年還成功舉辦了云南省第二屆腫瘤規(guī)范化診治培訓班。經(jīng)過十二年的建設發(fā)展，醫(yī)院現(xiàn)已建設成為集醫(yī)療、教學、科研為一體的初具規(guī)模在省內(nèi)有一定知名度的省級腫瘤?？漆t(yī)院。二、 所需技術(shù)的主要內(nèi)容（一）背景原發(fā)性腦腫瘤的年發(fā)病率為219/10萬人，約60％為膠質(zhì)細胞瘤，其中大多數(shù)為高度惡性的星形細胞瘤。目前，惡性腦腫瘤是導致死亡的主要癌癥之一。%，腦腫瘤在因癌癥死亡的15歲以下兒童及 1534歲的人群中是第二位最常見原因，在腫瘤死亡的3554歲的女性人中是第四位最常見原因。膠質(zhì)瘤特別是膠母細胞瘤，發(fā)病年齡多在壯年，對社會、家庭都是很大的打擊。因此，如何提高對惡性腦腫瘤特別是膠質(zhì)瘤的治療效果，具有重大臨床和社會意義。由于膠質(zhì)瘤的侵襲性生長特性，加上解剖位置的特殊性，盡管手術(shù)和放療仍難免復發(fā)。化療對消滅手術(shù)后殘留腫瘤細胞，防止腫瘤復發(fā)起十分重要的作用。然而，目前化療的臨床有效率低，除血腦屏障限制藥物進入神經(jīng)系統(tǒng)外，腫瘤細胞本身對抗癌藥物耐藥及個體化治療的缺乏是影響化療效果的重要原因。本項目，通過對核甘酸切除修復（NER）系統(tǒng)從酶活性到遺傳學的深入研究，探討膠質(zhì)瘤新的耐藥分子機制，將為克服耐藥提供新的靶點，具有重大理論意義和實際應用價值。本項目的臨床研究：檢測耐藥相關(guān)蛋白的表達（MGMT、Pgp、MRP、LRP、TOPOⅡ等）以及體外藥敏試驗結(jié)果指導膠質(zhì)瘤個體化化療，不僅可以提高膠質(zhì)瘤臨床治療效果，而且還將為膠質(zhì)瘤臨床規(guī)范化的化療提供具體方案。具有推廣應用價值。本研究對深入揭示膠質(zhì)瘤耐藥分子機制，從而克服耐藥，提高膠質(zhì)瘤的治療效果，具有重大意義和實用價值。（二）主要技術(shù)難題 NER是一個十分復雜的DNA修復系統(tǒng)，至少有20個基因的產(chǎn)物參與其全過程。NER功能異常易導致細胞癌變，但若腫瘤細胞具有完善的NER系統(tǒng)，就可能會通過對化療所至的DNA損傷修復而導致耐藥。己有研究發(fā)現(xiàn)一些參與NER的基因（ERCC1－6）表達與腫瘤耐藥相關(guān)。在針對NER系統(tǒng)中的重要因子ERCCERCCERCC3和XPA在14株人腫瘤細胞的表達和BCNU耐藥性研究方面，我們發(fā)現(xiàn)ERCC2的表達與腫瘤對BCNU耐藥呈顯著相關(guān)（15）。在檢測了美國NCI用于抗癌藥篩選的60株人腫瘤細胞的NER基因表達并與170種抗癌藥敏感性比較后發(fā)現(xiàn)，ERCC2蛋白水平與甲基化類抗癌藥耐藥性正相關(guān)（16）。將ERCC2基因轉(zhuǎn)入人腦膠質(zhì)瘤SKMG4轉(zhuǎn)基因?qū)嶒炓沧C明了這一結(jié)果（17），其對甲基化類抗癌藥的耐受性明顯增加。問題是：NER系統(tǒng)中的一些因子與耐藥相關(guān)，是否說明NER參與了耐藥過程？也就是NER功能與那些因子（具體的EBCC1－6）表達是否一致？Vogel等最近的研究提示，ERCC2在NER系統(tǒng)中并不是限速酶，而ERCC1蛋白水平則與NER活性直接相關(guān)。此外，參與NER過程的那些因子是否可能通過NER以外的途徑導致耐藥？ERCC基因為中國倉鼠卵巢細胞（CHO）NER缺陷的基因，其中ERCC2和ERCC3是解螺旋酶，對損傷段DNA解螺旋。ERCC2還是轉(zhuǎn)錄因子ⅡH（transcription factor IIH，TFllH）中的主要成分之一。Sitaram等最近發(fā)現(xiàn)在修復由亞硝脲所至的DNA損傷過程中（從轉(zhuǎn)錄股DNA上清除乙酸嘌呤），需要有ERCC2的參與。晚近的研究提示，NER過程中需要p53參與，而p53介導的細胞凋亡也需要NER中的成分，如ERCC2和ERCC3的參與。因此， NER和細胞凋亡之間有著密切的聯(lián)系。我們對CENU耐藥性與p53表達進行了比較，發(fā)現(xiàn)與ERCC2一樣，p53的表達與人腦腫瘤細胞對CENU耐藥相關(guān)。更有意思的是，當將 ERCC2和p53二個因素綜合考慮時，他們與CENU耐藥性間的相關(guān)性更加顯著。提示，ERCC2和p53在腫瘤細胞對CENU耐藥中可能有協(xié)調(diào)作用?，F(xiàn)在己知，p53的活化是 DNA依賴性蛋白磷酸激酶（DNA－PK）催化的磷酸化。所以，DNA－PK通過對 p53的調(diào)節(jié)，很可能會進而影響腫瘤細胞對化療藥物的敏感性?，F(xiàn)有的知識提示，DNAPK，p53和NER三者間存在密切的功能聯(lián)系，然而它們是如何相互影響，以及在腫瘤耐藥過程中的確切機制還遠不清楚。在研究NER表達情況時，我們沒有針對影響NER表達的基因組調(diào)控區(qū)進行研究，也沒有對基因組本身的遺傳學改變?nèi)缍鄳B(tài)性等進行研究，由于目前已知DNA修復基因MGMT甲基化在腦膠質(zhì)瘤化療中的起著重要作用，但腦腫瘤中NER相關(guān)基因調(diào)控區(qū)的情況未見詳細明確報道，對于NER相關(guān)基因調(diào)控區(qū)和基因組遺傳學改變對下游基因表達的影響及由此導致的化療耐受的影響也不清楚。 所以，我們擬檢測人腦膠質(zhì)瘤細胞與臨床標本中NER活性, 研究NER相關(guān)基因的遺傳學和表觀遺傳學改變及下游mRNA和蛋白的表達情況，探討NER活性與mRNA和蛋白的改變是否同遺傳學和（或）表觀遺傳學改變直接相關(guān)，并分析NER活性與膠質(zhì)瘤體藥敏試驗結(jié)果以及臨床化療效果間的關(guān)系。探討膠質(zhì)瘤耐藥的分子機制，有望從NER系統(tǒng)找出一個或幾個關(guān)鍵性因子，作為有效的靶點，進行化療增敏。（三）主要的技術(shù)經(jīng)濟指標本項目的特色與創(chuàng)新之處在于揭示膠質(zhì)瘤耐藥分子機制；從分子水平對個體化化療進行研究，對耐藥相關(guān)基因表達與體外藥敏試驗結(jié)果和臨床化療效果進行相關(guān)性分析，并與歷史的膠質(zhì)瘤臨床化療效果比較，歸納總結(jié)、制定膠質(zhì)瘤個體化化療規(guī)范。制定膠質(zhì)瘤個體化化療規(guī)范，指導膠質(zhì)瘤的化療，提高對膠質(zhì)瘤的治療效果，延長患者生存期。發(fā)表學術(shù)論文至少8篇，在國內(nèi)核心雜志上發(fā)表3篇。培養(yǎng)研究生12名。（四）能提供的基礎條件在技術(shù)方面，課題組主要成員已建立和（或）掌握相關(guān)實驗方法和技術(shù)并在相關(guān)領域工作多年，理論知識豐富，操作熟練。已經(jīng)建立了成熟的原代膠質(zhì)瘤藥敏試驗，免疫組化測定耐藥相關(guān)基因Pgp、MRP、LRP、MGMT的表達。熒光定量RTPCR技術(shù)、Western blot, DNAPK 活性測定等分子生物學技術(shù)。在人員方面，本課題由臨床和實驗室二方面人員。在實驗條件方面，云南省腫瘤醫(yī)院昆明醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院是云南最大的，最權(quán)威的腫瘤?？漆t(yī)院，能保證本課題所需的病例來源。云南省腫瘤醫(yī)院的腫瘤研究所，已具備完成本研究計劃的基本設備。耐藥的淋巴瘤細胞株的構(gòu)建一、云南省腫瘤醫(yī)院2006年基本情況云南省腫瘤醫(yī)院（昆明醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院），建于80年代中期，是我省第一家集醫(yī)療、教學、科研為一體的以腫瘤治療為主的綜合性醫(yī)院醫(yī)院編制病床700張，職工776人，副高以上人員135人，研究生導師13人，技術(shù)力量雄厚。薈萃了省內(nèi)外許多有志獻身腫瘤事業(yè)、具有較高學術(shù)造詣和豐富臨床經(jīng)驗的專家。許多教授、主任醫(yī)師是云南省、昆明醫(yī)學院的醫(yī)療、教學、科研的學科帶頭人。對于腫瘤病人，采取科學合理、規(guī)范的綜合治療，在外科手術(shù)、內(nèi)科化療、放射治療、生物及免疫治療和中西醫(yī)結(jié)合治療上均能為病員提供高質(zhì)量的服務，腫瘤診療技術(shù)處于云南省的領先水平。開展正常人有關(guān)腫瘤方面的健康體檢、普查，特別是對中老年人定期健康體檢，通過腫瘤蛋白蕊片、基因檢測等手段為腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療提供幫助，同時提供有關(guān)腫瘤最新的科學預防、治療知識醫(yī)院編制病床700張，職工776人，副高以上人員135人，研究生導師13人，技術(shù)力量雄厚。薈萃了省內(nèi)外許多有志獻身腫瘤事業(yè)、具有較高學術(shù)造詣和豐富臨床經(jīng)驗的專家。許多教授、主任醫(yī)師是云南省、昆明醫(yī)學院的醫(yī)療、教學、科研的學科帶頭人。為滿足全省各類腫瘤患者及其它各種疾病病人的診治需求，我院現(xiàn)已開設16個臨床科室、8個醫(yī)技科室、1個研究所（腫瘤研究所）、3個省級研究中心（大腸癌研究中心、放射治療研究中心、腫瘤化療研究中心）。 對于腫瘤病人，采取科學合理、規(guī)范的綜合治療，在外科手術(shù)、內(nèi)科化療、放射治療、生物及免疫治療和中西醫(yī)結(jié)合治療上均能為病員提供高質(zhì)量的服務，腫瘤診療技術(shù)處于云南省的領先水平。開展正常人有關(guān)腫瘤方面的健康體檢、普查，特別是對中老年人定期健康體檢，通過腫瘤蛋白蕊片、基因檢測等手段為腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、 早期診斷、早期治療提供幫助，同時提供有關(guān)腫瘤最新的科學預防、治療知識：腫瘤醫(yī)院在重視醫(yī)療質(zhì)量的同時，特別重視人才培養(yǎng)和科研工作，每年都有計劃地把年輕業(yè)務骨干送到國內(nèi)外知名醫(yī)院進修學習。在省內(nèi)率先開展同種異體骨移植及異體半關(guān)節(jié)移植手術(shù)、乳腺癌改良根治同期腹直肌肌皮瓣乳房重建、開展冷循環(huán)超能射頻治療腫瘤、腹腔鏡下直腸癌根治術(shù)、立體定向適形放射治療獲得成功，并建立了云南省第一個大型超低溫冷凍骨庫；開展自體外周血造血干細胞移植支持大劑量化療。承擔著昆明醫(yī)學院研究生、本科生、大專生的教學任務。2006年開展了局部晚期肺癌擴大手術(shù)、肺癌侵犯上腔靜脈，左心房行上腔靜脈置換、左心房部分切除、肺葉切除手術(shù)等多項新技術(shù)研究；同時承擔了昆明醫(yī)學院創(chuàng)新群體基金等基金項目；編寫腫瘤學系列教材5部，其中《臨床腫瘤外科學》、《臨床腫瘤內(nèi)科學》已于2006年11月由云南省科技出版社正式出版。2006年繼續(xù)承擔昆明醫(yī)學院腫瘤學專業(yè)本科生、夜大生、高職生的教學任務和護理專業(yè)部份學生的臨床實習工作。藥學專業(yè)臨床課程的本科教學和成教學院的授課任務，醫(yī)學影像、檢驗、麻醉、護理專業(yè)的部分課程。目前，云南省腫瘤醫(yī)院有學科帶頭人3人，有105人具有高級職稱；有博士2人，碩士29人（還有在讀博士生4人，在讀碩士78人）。已招收研究生40名。 2005年計劃招收研究生 23名。2006年還成功舉辦了云南省第二屆腫瘤規(guī)范化診治培訓班經(jīng)過十二年的建設發(fā)展，醫(yī)院現(xiàn)已建設成為集醫(yī)療、教學、科研為一體的初具規(guī)模在省內(nèi)有一定知名度的省級腫瘤?？漆t(yī)院。二、所需技術(shù)的主要內(nèi)容（一）背景 非霍奇金淋巴瘤（NHL）是惡性淋巴瘤的一種，是常見的原發(fā)于淋巴組織的惡性腫瘤，全世界近二十年來其發(fā)病率每年以3％－5％的比率穩(wěn)定上升?！?，每年新發(fā)病例２．５萬人，死亡２萬人。 盡管目前淋巴瘤的治療藥物和方案種類繁多，但其治療效果并不十分令人滿意。原因一方面是對復發(fā)或難治的惡性淋巴瘤，現(xiàn)有的聯(lián)合化療（以經(jīng)典CHOP方為代表）無法顯著提高緩解率和患者的長期無病生存率；另一方面，反復多次化療后腫瘤細胞產(chǎn)生的多藥耐藥使化療難度進一步加大。因此，目前各國研究者正著力于從不同角度研制和開發(fā)新的抗淋巴瘤藥物。其中有關(guān)腫瘤細胞的凋亡是研究熱點之一。細胞凋亡(apoptosis)是具有特殊形態(tài)學和生化改變的并由基因控制的生理性或病理性細胞死亡方式，在正常的胚胎發(fā)育、組織分化、個體生長、衰老過程，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面都起著重要作用[2]。傳統(tǒng)的腫瘤治療觀念是化療藥物直接作用于核酸、微管蛋白和其他靶點來殺傷腫瘤細胞，隨著凋亡研究的逐步深入，這種觀點不斷被補充和修正。人們認識到化療藥物除通過同各自的靶點直接作用外，也可以通過誘導細胞凋亡來殺傷腫瘤細胞。目前有許多體外實驗研究證明，化療藥物是通過誘導細胞凋亡而發(fā)揮對腫瘤的治療作用[3]。而實際上許多對凋亡調(diào)節(jié)機制的認識也是通過化療藥物誘導凋亡來證實。細胞凋亡已成為衡量腫瘤化療效應的一個重要指標。吉西他濱（Gemcitabine）是20世紀90年代開發(fā)的一種新型的脫氧胞苷抗腫瘤藥，其作用機制非常復雜，已被廣泛應用于肺癌、胰腺癌的治療。近年來有人嘗試將其應用于復發(fā)和難治性淋巴瘤的臨床治療并取得一定的療效。吉西他濱已被證實具有誘導多種實體瘤細胞（非小細胞肺癌、胰腺癌、胃癌等）發(fā)生凋亡的作用 ，而關(guān)于吉西他濱誘導人復發(fā)和難治性非霍奇金淋巴瘤細胞凋亡的作用的基礎研究鮮有報道。因此擬行“吉西他濱對復發(fā)和難治性Raji細胞凋亡的實驗研究”以探討吉西他濱抗淋巴瘤的可能作用機制，為吉西他濱用于難治性和復發(fā)性非霍奇金淋巴瘤的治療提供一定的實驗依據(jù)，指導臨床治療。（二）主要技術(shù)難題耐藥的淋巴瘤細胞株的構(gòu)建。包括“上海晶美”，“北京中衫金橋”等代銷國內(nèi)外生物產(chǎn)品的大型生物試劑公司有耐藥的肺癌，舌癌等腫瘤株的生物產(chǎn)品；針對淋巴瘤細胞株，卻只有普通的B系，T系淋巴瘤細胞株，沒有耐藥的細胞株產(chǎn)品供科研需要。相應的國內(nèi)外文獻也沒有明確指導培育供科研實驗的耐藥的淋巴瘤細胞株的說明。我院也正在實踐摸索中，因此，該技術(shù)亟待相關(guān)部門給予技術(shù)，人才等方面的支持。（三）擬達到的主要技術(shù)經(jīng)濟指標基礎實驗研究以探求抗耐藥淋巴瘤的新的化療藥，為難治性和復發(fā)性非霍奇金淋巴瘤的治療提供一定的實驗依據(jù)，指導臨床治療；為盡早克服難治性和復發(fā)性非霍奇金淋巴瘤帶來希望。（四）云南省腫瘤醫(yī)院能為該技術(shù)的順利實施所提供的條件研究人員來自腫瘤?？漆t(yī)院的腫瘤臨床和科研部門，各自具有一定的臨床和科研能力能互相取長補短，團結(jié)努力的完成