生物能源工作總結(jié)(編輯修改稿)
2025-05-11 04:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 5℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內(nèi)槽玻璃板上,使膠液緩慢展開,垂直輕拔梳子,取下膠帶, 1TAE電泳緩沖液至沒過膠板為止. 3）. 加樣:在點(diǎn)樣板上混合DNA樣品和上樣緩沖液, ul微量移液器分別將樣品加入膠板的樣品小槽內(nèi),每加完一個樣品,應(yīng)更換一個加樣頭,以防污染,加樣時(shí)勿碰壞樣品孔周圍的凝膠面.(注意:加樣前要先記下加樣的順序). 4）. 電泳:加樣后的凝膠板立即通電進(jìn)行電泳,電壓60100V,樣品由負(fù)極(黑色)向正極(紅色),停止電泳. 5)觀察照相:取出凝膠，在紫外燈下觀察,DNA存在則顯示出紅色熒光條帶,采用凝膠成像系統(tǒng)拍照保存結(jié)果：通過電泳檢測，得到了所需的三種帶目的基因的質(zhì)粒實(shí)施例四：酶切質(zhì)粒得到目的基因目的：該質(zhì)粒為天然提取所得，需將該質(zhì)粒上的目的基因酶切下來，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)。酶切，連接表達(dá)載體。酶切體系：質(zhì)粒DNA內(nèi)切酶緩沖劑Xho內(nèi)切酶 Xba內(nèi)切酶 無菌水電泳檢測：同實(shí)驗(yàn)三電泳檢測步驟，回收純化：以北京優(yōu)博奧生物科技有限公司所生產(chǎn)的DNA凝膠回收試劑盒為例1）． 在紫外燈下割下含DNA的瓊脂糖膠塊(TAE 或TBE凝膠)，使它盡可能的小， 離心管中。大體積的凝膠塊需要切成小塊，以縮短凝膠融化的時(shí)間。2）． 根據(jù)凝膠濃度，按下表所提供的參數(shù)加GS Buffer:凝膠濃度 GS Buffer體積% 3倍凝膠體積% 4倍凝膠體積% 5倍凝膠體積 ％的瓊脂糖凝膠重量為100mg，則應(yīng)該加入400ul GS Buffer。3）． 懸浮均勻后置65℃水浴，每3分鐘顛倒混勻一次，直至瓊脂糖膠塊完全溶化（約10mins）。 按照GS Buffer體積的50％加入PH Buffer，充分混合均勻。將混合液轉(zhuǎn)入到離心吸附柱，并將離心吸附柱置于廢液收集管中，10,000rpm離心30s，去廢液。4）
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