植物生理生化試題材料(編輯修改稿)
2025-04-21 04:49 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 d法（考馬斯亮藍(lán)法）、紫外吸收法。（186194頁(yè)）簡(jiǎn)述斐林－酚試劑法測(cè)定植物可溶性蛋白質(zhì)的原理。（188頁(yè)）答：Folin酚試劑法也稱Lowry法，斐林(Folin)一酚試劑法結(jié)合了雙縮豚試劑和酚試劑與蛋白質(zhì)的反應(yīng)，其中包括兩步反應(yīng)：第一步是在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅試劑作用生成紫紅色的蛋白質(zhì)一銅絡(luò)合物（雙縮脲反應(yīng)）；第二步是此絡(luò)合物以及蛋白質(zhì)中酪氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸的殘基使磷鉬酸磷鎢酸試劑（Folin試劑）還原，產(chǎn)生磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)的深藍(lán)色混合物質(zhì)，在一定的條件下，顏色深淺與蛋白含量成正相關(guān)。因此，可利用其在650nm波長(zhǎng)下的特定吸收進(jìn)行比色測(cè)定。植物組織可溶性蛋白質(zhì)含量的測(cè)定中，斐林－酚試劑法、考馬斯亮藍(lán)法兩種方法各有何優(yōu)缺點(diǎn)？答：①斐林－酚試劑法其優(yōu)點(diǎn)是：由于加入了Folin酚試劑后使蛋白質(zhì)肽鍵顯色效果增強(qiáng)，從而減少了因蛋白質(zhì)種類引起的偏差。其靈敏度比雙縮豚法高100倍。此法操作簡(jiǎn)便，適于蛋白質(zhì)含量較微小的樣品測(cè)定?？蓹z測(cè)的最低蛋白質(zhì)含量達(dá)5ug，通常測(cè)定范圍5～100ug?！?，也可用于酪氨酸和色氨酸的定量測(cè)定。缺點(diǎn)是操作煩瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，要精確控制操作時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)曲線不是嚴(yán)格的直線形式，且專一性差，干擾物質(zhì)（酚類、檸檬酸、Tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等）較多。（189頁(yè)的注意事項(xiàng)）②考馬斯亮藍(lán)法是靈敏度更高的一種方法，優(yōu)點(diǎn)有：靈敏度高，比lowry法高4倍左右，最低檢測(cè)達(dá)1－5微克；測(cè)定快速、簡(jiǎn)便，染色穩(wěn)定；干擾物質(zhì)少。缺點(diǎn)是用于不同蛋白質(zhì)測(cè)定時(shí)有較大的偏差；仍有干擾，如SDS、去污劑、Triton x100等；標(biāo)準(zhǔn)曲線有輕微的非線性。Folin酚試劑法測(cè)定植物可溶性蛋白質(zhì)時(shí)受哪些因素的干擾？答： Folin酚試顯色反應(yīng)是由絡(luò)氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起的，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基類化合物均有干擾作用。此外，不同蛋白質(zhì)音絡(luò)氨酸、色氨酸含量的不同而使顯色強(qiáng)度稍有差異。用茚三酮顯色法測(cè)定植物組織氨基酸時(shí)，加入Vc的作用是什么？ 答：由于該反應(yīng)的第一步是茚三酮的還原，而還原型茚三酮在含氧量高的情況下很容易再氧化，對(duì)反應(yīng)有干擾，因此，常在反應(yīng)體系中加入還原劑，以阻止還原型茚三酮的再氧化。所以，… …茚三酮顯色法測(cè)定植物組織氨基酸時(shí)為什么要除去蛋白質(zhì)？用10%乙酸除去蛋白質(zhì)的原理是什么？答：由于蛋白質(zhì)和多肽中的游離氨基酸也會(huì)產(chǎn)生同樣反應(yīng)，因此，對(duì)于含大量蛋白質(zhì)和多肽的樣品，應(yīng)先用蛋白質(zhì)沉淀劑將其除去。常用的蛋白質(zhì)沉淀劑有10%乙酸、磺基水楊酸（SSA）、三氯乙酸（TCA）、過(guò)氯酸（PCA）等，其中以乙酸提取總氨基酸的效果較好。 原理:10%乙酸和蛋白質(zhì)反應(yīng) 使之沉淀下來(lái)（?）用茚三酮顯色法測(cè)定植物組織氨基酸時(shí)，為什么要用無(wú)氨蒸餾水？答: 氨基酸與茚三酮反應(yīng)的實(shí)質(zhì)是還原型茚三酮與另一分子茚三酮和一分子氨的縮合脫水反應(yīng)。故，若蒸餾水中含有氨將使氨基酸含量增大。帶來(lái)誤差。1測(cè)定植物組織中游離氨基酸總量有何生理意義？ 答:測(cè)定植物體內(nèi)游離氨基酸含量對(duì)研究植物在不同條件下及不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期氮代謝變化、植物對(duì)氮素的吸收、運(yùn)輸、同化及營(yíng)養(yǎng)狀況等有重要意義。1測(cè)定淀粉酶活性時(shí)，3，5二硝基水楊酸試劑（DNS）的作用是什么？ 答: 淀粉酶水解淀粉生成的麥芽糖，可用3，5–二硝基水楊酸試劑測(cè)定。由于麥芽糖能將后者還原生成3–氨基–5–硝基水楊酸的顯色基團(tuán)，在一定范圍內(nèi)其顏色的深淺與糖的濃度成正比，故可求出麥芽糖的含量。1測(cè)定（α＋β）淀粉酶總活力時(shí)，為什么要將淀粉酶原液稀釋成淀粉酶稀釋液后進(jìn)行反應(yīng)。 答：淀粉酶原液主要是用于鈍化β淀粉酶，從而測(cè)定a淀粉酶的活力。而淀粉酶稀釋液主要是用于測(cè)出（α＋β）淀粉酶總活力，從而可得出β淀粉酶的活力。1測(cè)定淀粉酶活性時(shí)，為什么要將酶提取液和淀粉溶液分別放在40℃水浴中預(yù)保溫？答:因?yàn)閍淀粉酶的最適溫度在40℃～50℃之間，在這一溫度范圍內(nèi)a淀粉酶的活性最強(qiáng)，催化淀粉的能力最強(qiáng)。因此，將酶提取液和淀粉溶液分別放在40℃水浴中預(yù)保溫，有利于淀粉酶活性的測(cè)定，減少誤差。1測(cè)定硝酸還原酶活性的離體法和活體各有何特點(diǎn)？（125頁(yè)）答：活體法步驟簡(jiǎn)單,適合快速、多組測(cè)定，重復(fù)性不好，應(yīng)在4℃離體法步驟復(fù)雜,但重復(fù)性較好。需要在低溫和NADH的條件下進(jìn)行。1為什么用活體法測(cè)定硝酸還原酶的材料，在取樣前要進(jìn)行一段時(shí)間的光合作用？答：因?yàn)闇y(cè)定前材料在進(jìn)行光合作用，會(huì)積累能量物質(zhì)，可促進(jìn)硝酸還原酶的產(chǎn)生。1活體法測(cè)植物體內(nèi)硝酸還原酶活力實(shí)驗(yàn)中，硝酸鹽還原過(guò)程為何在黑暗中進(jìn)行？答：硝酸鹽還原過(guò)程應(yīng)在黑暗中進(jìn)行,以防亞硝酸鹽還原為氨。1活體法測(cè)植物體內(nèi)硝酸還原酶活力實(shí)驗(yàn)中，如何判斷真空抽氣的終點(diǎn)？答：真空抽氣時(shí)，葉片完全軟化沉入杯底，則代表葉片組織間隙的氣體得以全部排除，那么就是真空抽氣的終點(diǎn)。1用2,6二氯酚靛酚滴定法測(cè)定維生素C含量時(shí)，為什么強(qiáng)調(diào)滴定時(shí)間不超過(guò)2分鐘? 答：維生素C具有很強(qiáng)的還原性，如果滴定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，維生素C就會(huì)被空氣中的氧氣氧化，從而減少維生素C的含量，最終影響到維生素C含量的測(cè)定。0000000000為什么用2,6二氯酚靛酚滴定法測(cè)定維生素C含量時(shí)，要在測(cè)定的同時(shí)進(jìn)行2,6二氯酚靛酚溶液的標(biāo)定?答：①是為了知道此時(shí)2，6D染料的滴定度（每ml染料相當(dāng)于抗壞血酸的mg數(shù)）。②是因?yàn)?，6D染料很不穩(wěn)定，隨著時(shí)間的推移，其滴定度一直在變化中，因此只能現(xiàn)測(cè)現(xiàn)用。2簡(jiǎn)述滴定法測(cè)定Vc含量的實(shí)驗(yàn)原理。（267頁(yè)）答：還原型抗壞血酸還原染料2，6二氯靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原后紅色消失。還原型抗壞血酸還原2，6二氯靛酚后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒(méi)有雜質(zhì)干擾時(shí)，一定量的樣品提取液還
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