【文章內(nèi)容簡介】 氮液（滴） 1 2 3 4 5 5（傷流） 50％醋酸（滴） 1 1 1 1 1 1 硝酸試粉（勺） 1 1 1 1 1 1 3 無機(jī)磷的測定（磷鉬藍(lán)比色法） 磷鉬藍(lán)比色法測磷反應(yīng)體系 將各管充分搖勻， 45℃ 水浴中保溫 25min，以空白作對照在650nm下測定光密度值。以 1~6號管磷含量為橫坐標(biāo)，光密度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 據(jù) 6號管的光密度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出測定液含磷量（ ug）。 項 目 管號 0 1 2 3 4 5 6 各管含磷量（ 181。g ） 0 2 4 6 8 10 X(未知 ) 10mg/L磷標(biāo)準(zhǔn)液（ mL） 0 樣品 蒸餾水（ mL） 定磷試劑（ mL ） ? 4 氨基酸的快速鑒定 按上表加入各試劑，放入沸水浴 5min，觀察兩管在加熱前后顏色的變化。判斷傷流液中有無氨基酸的存在。 項 目 管號 1 2 蒸餾水（滴） 10 0 傷流液（滴） 0 10 3％茚三酮（滴） 5 5 五 結(jié)果計算 1 硝態(tài)氮的測定 根據(jù)顏色判斷出該傷流液的硝態(tài)氮濃度。 2 無機(jī)磷的測定 傷流液無機(jī)磷濃度（ 181。g /mL） =測定液磷含量（ 181。g ） /傷流液用量（ mL） 3 氨基酸的快速鑒定 如果 2號管呈現(xiàn)藍(lán)紫色，則證明傷流液有氨基酸存在。 實驗注意事項 ： 1 分光光度計的正確使用 2 溶液必須冷卻后再進(jìn)行測定其吸光度值 3 玻棒攪拌溶液時應(yīng)從低濃度向高濃度進(jìn)行 4 做標(biāo)準(zhǔn)曲線的溶液必須充分混勻 思考題 ： 1 硝態(tài)氮測定時加入醋酸的作用是什么？ 2 以上測定無機(jī)磷的分光光度法，可否修改成快速測定方法？如何修改？ 植物組織中可溶性糖含量的測定 （蒽酮比色法） 可溶性糖是植物體內(nèi)重要的有機(jī)物之一，與以下過程密切相關(guān)： （ 1）植物體內(nèi)有機(jī)物的轉(zhuǎn)化，如：蔗糖轉(zhuǎn)化成淀粉 貯藏在 植物體內(nèi)； （ 2）種子的形成、果實品質(zhì)形成，可衡量果實品質(zhì)好壞； （ 3）植物的抗性，如土壤干旱時，植物體內(nèi)積累可 溶性糖，降低細(xì)胞的水勢，利于細(xì)胞從外界吸水。 一、目的意義 二、實驗原理 可溶性糖（包括還原糖和非還原糖）能與蒽酮試劑反應(yīng)，生成藍(lán)綠色的糠醛衍生物，該產(chǎn)物在620nm處有最大吸收峰?？啡┥闪浚伾顪\）與可溶性糖總含量成正比，故可用分光光度計測其吸光度，從而測知糖含量。 此法反應(yīng)靈敏，適用于含糖量不高的樣品。 H2SO4 糠醛 脫水 （ 1） （ 2） 糠醛 +蒽酮 藍(lán)綠色的縮合物 可溶性糖 三、材料、設(shè)備及試劑 材料 ： 小麥全株干粉（或各種植物 的根、莖、葉、種子） 設(shè)備 ： 分光光度計、天平、水浴鍋、電爐、移液管、 試管、離心機(jī)、容量瓶。 試劑 ： （ 1） － 1蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 （ 2）蒽酮 — 濃硫酸試劑 四、操作方法 1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取洗凈烘干的試管 6支編號 0— 5號 ， 按下表加入各試劑 。 管 號 0 1 2 3 4 5 6 糖含量 (181。g ) 0 10 20 30 40 50 待測 蔗糖母液 0 樣品 蒸餾水 蒽酮－濃硫 酸試劑（ ml） 5 5 5 5 5 5 5 吸光度（ A620） 加入濃硫酸時要沿著試管壁緩緩加入，邊加邊搖，待試管冷卻后，以空白作參比，于 620nm波長下，測其吸光度，在 Excel中以吸光度為縱坐標(biāo)，糖含量為橫坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得相關(guān)的回歸方程 y=Ax。 米亞東y = R2 = 00 50 100 150糖含量吸光度系列1線性 (系列1)樣品提取 大試管 干粉 100mg 沸水浴 20min 20～ 30ml蒸餾水 過濾入 100ml容量瓶，定容 樣品測定 取一試管，按上表中管 6加入各項目，以空白作參比 測定樣品的吸光度，帶入由標(biāo)準(zhǔn)曲線得的方程中，可 得糖含量。 五、結(jié)果計算 可用性糖含量 = mx V V1 W 103 100％ mx：標(biāo)準(zhǔn)曲線得的糖含量（ μg） V： 樣品總體積（ ml） V1：測定時取用體積（ ml） W：樣品重（ mg） 103：樣品單位 μg mg換算 注意事項： （ 1）加入蒽酮 —— 濃硫酸試劑時，要邊加邊搖，加入后還要猛搖試管數(shù)次，直到試管內(nèi)的顏色均一為止。 （ 2）移蒽酮 —— 濃硫酸的移液管放到固定位置，注意移液時不要將其滴到桌面上或他人身上，如滴到桌面上，迅速用濕毛巾擦干凈；如滴到他人身上，先用濕毛巾擦拭，再用大量流水沖洗。 （ 3）比色時，一定要將比色杯表面的液體用擦境紙擦干凈，以免對儀器造成腐蝕。 思考題： 你還知道其它測定植物組織中可溶性糖含量的方法嗎？在何時采用何種方法更適宜？ 用蒽酮法測定糖的操作中，應(yīng)注意什么？ 實驗 5 種子生活力的快速測定 目的意義 種子的生活力指的是種子發(fā)芽的潛力 ，是鑒定種子質(zhì)量、研究種子生理、種子貯藏生理的重要指標(biāo)。種子檢驗中有一項重要的指標(biāo)是種子的發(fā)芽率，用直接發(fā)芽的方法測定發(fā)芽率所需時間較長，尤其是遇到休眠的種子時，所需時間更長，可用快速測定法在較短的時間內(nèi)獲得結(jié)果。快速測定法測定的指標(biāo)主要是種子的生活力，所依據(jù)的原則是種子的生活力與發(fā)芽率是呈正相關(guān)的，種子的生活力高，發(fā)芽率也高。 我們今天要使用的方法是 TTC法和紅墨水染色法 氯化三苯基四氮唑 (TTC)法 TTC又名 “ 紅四氮唑 ” ，是標(biāo)準(zhǔn)的氧化 還原色素，溶于水后呈無色的溶液。當(dāng) TTC 與種胚、幼根、花粉等組織或器官的 活細(xì)胞 接觸時，被還原型脫氫輔酶（ NADH2或 NADPH2）還原， 由無色的 TTC變成紅色的TTF（三苯甲腙）使 種胚染成紅色 ； 無生活力 的種子沒有呼吸代謝活動，不能還原 TTC，所以 胚部不著色 。 紅墨水染色法 植物 活細(xì)胞 的原生質(zhì)膜具有 選擇透性， 某些 染料分子 （如紅墨水） 不能透過 ，因而 不 能將 種胚染色 。而 死 的種胚，其