【文章內(nèi)容簡介】 因組學(xué) ” ，兩者相互結(jié)合，相互補充，相互融合，將在 21 世紀(jì)新藥開發(fā)中占據(jù)主導(dǎo)地位。 載自：生物醫(yī)藥世界 1 y is the evolution of photosynthesis thought to have favored the subsequent evolution of oxidative metabolism? O2 became abundant in Earth39。s atmosphere as a result of photosynthesis 1 ince phenylalanine residues are hydrophobic, they would probably be located in α helices or β sheets within the interior of the protein. The loop regions connecting these elements of secondary structure would be expected to contain hydrophilic amino acids. Yeasts are surrounded by cell walls。 animal cells are not 1 Aspartate is an acidic amino acid that interacts with basic amino acids in the substrates of trypsin. Substitution of aspartate with lysine (a basic amino acid) would therefore interfere with substrate binding and 8 catalysis. The refractive index of air is 。 the refractive index of oil is approximately . Since resolution = sin α (η is the refractive index), viewing a specimen through air rather than through oil changes the limit of resolution from about μm to about μm 1 One advantage of the T4 bacteriophage in the study of molecular geics is the fact that its genome is 20 times smaller than that of E. coli. How much smaller is the genome of Rous sara virus than that of its host? The genome of Rous sara virus (10,000 base pairs) is 100,000 times smaller than that of chicken cells ( billion base pairs). What is the geic map of a locus containing genes x, y, and z? The frequencies of rebination are % between x and z, % between x and y, and % between y and z. The geic map is 2 Many of the drugs in clinical use and under evaluation for the treatment of AIDS are inhibitors of the HIV reverse transcriptase. What reverse transcriptases in human cells might also be inhibited by these drugs? What would be the consequences of inhibiting these enzymes? The cellular reverse transcriptases that might be affected by these drugs include telomerase and the reverse transcriptases encoded by LINE sequences. Inhibition of the LINE reverse transcriptases would not be toxic to the cell, but inhibition of telomerase might interfere with the replication of chromosome ends. 第三章：細(xì)胞生物學(xué)研究方法 填空題： 顯微鏡的分辨率約等于光波的 _______________ ，通常把這一數(shù)值看作是光學(xué)顯微鏡分辨力的 _______ 。 HeLa 細(xì)胞具有兩種中間絲，它們是 _______________ 和 __________________ 。 用以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的技術(shù)有 ___________ 、 ___________ 。（酵母雙雜交、噬菌體展示技術(shù)） 單克隆抗體是 _______________細(xì)胞和 __________ 細(xì)胞在聚乙二醇或滅活的病毒介導(dǎo)下發(fā)生融合的。 名詞解釋： 1. 掃描隧道顯微鏡（ scanning tunneling microscpe） 2. 胞質(zhì)雜種（ cybrid） 3. 原位雜交（ hybridization in situ） 4. 激光掃描共焦顯微鏡（ Laser scanning confocal microscope） 5. 縮時顯微電影技術(shù)（ time lapse microcinematography） 6. 細(xì)胞培養(yǎng)（ cell culture） 7. 嵌合體（ chimera） 8.（ 1） knock out,（ 2） knock in（ 3） cell line（ 4） cell strain（ 5） cell engineering（ 6） cell fusi （ 7）定點突變（ 8）流式細(xì)胞術(shù)（ 9）原位雜交（ in situ hybridization）（ 10）免疫熒光技術(shù)（ 11） SEM(P58)（ 12） PCR 9．細(xì)胞、細(xì)胞質(zhì)、原生質(zhì)、原生質(zhì)體、細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、病毒、類病毒和朊病毒。 選擇題： 目前制造的單克隆抗體多為 （ a） 鼠 — 人型 （ b） 鼠 — 兔型 （ c） 人 — 鼠型 （ d） 鼠 — 鼠 型 cDNA 是指 （ a） 細(xì)菌環(huán)狀的 DNA 分子 （ b） 質(zhì)粒環(huán)狀的 DNA 分子 9 （ c） tRNA 的 DNA 拷貝 （ d） mRNA 的 DNA 拷貝 在雜交瘤技術(shù)中，篩選融合細(xì)胞時常選用的方法是： （ a） 密度梯度離心法 （ b） 熒光標(biāo)記的抗體和流式細(xì)胞術(shù) （ c） 采用在選擇培養(yǎng)劑中不能存活的缺陷型瘤系細(xì)胞來制作融合細(xì)胞 （ d） 讓未融合的細(xì)胞在培養(yǎng)過程中自然死亡 動物的正常細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下的生長行為是 （ a） 能無限增殖 （ b） 在有充分營養(yǎng)條件下，能無限增殖 （ c） 不能無限增殖，其增殖代數(shù)與 物種和供體年齡有關(guān) 正常細(xì)胞培養(yǎng)中除培養(yǎng)基外常需加入血清，主要是因為血清中含有 （ a） 大量氨基酸 （ b） 核酸 （ c） 生長因子 （ d） 維生素 不必用超薄切片、不經(jīng)染色而能觀察較厚標(biāo)本的電鏡是 （ a） 一般透射電鏡 （ b） 掃描透射電鏡 （ c） 掃描電鏡 （ d） 超高壓電鏡 Wilson 根據(jù)光學(xué)顯微鏡下所見，繪制的細(xì)胞模式圖上能見到 （ a） 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) （ b） 核糖體 （ c） 吞飲泡 （ d） 核仁 要探知細(xì)胞內(nèi)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，可以通過（ ）實現(xiàn) （ a） Southern blot （ b） Nothern blot （ c） Western blot （ d） 原位分子雜交 是非題： 1. 原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代后即成細(xì)胞株。 ??????????? （ ） 2. 帶有標(biāo)記的特定核酸分子作探針，測定與之互補的染色體 DNA 區(qū)段的位置，稱為原位雜交。 ?????...?? （ ） 。 ??????????????????? （ ） 4. 用免疫熒光技術(shù)顯示與酶解過程有關(guān)的酶是結(jié)合在微管上的。 ?????????????????????? （ ） 5. 超薄切片的電子染色，可以正染也可以負(fù)染。 ??????? （ ） 10 ，物鏡 40 下所攝得到的照片，其放大倍數(shù)就是 1040=400 。 ??????????? （ ） 7. 亞顯微結(jié)構(gòu)就是超微結(jié)構(gòu)。 ?????????????? （ ） 8. 光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡的差別在于后者的放大倍數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于前者，所以能看到更小的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。 ?????? （ ） 問答題： 1．電鏡三維重建技術(shù)的主要步驟是什么？ 2．闡明光學(xué)顯微鏡的成象原理。顯微鏡的分辨力有何意義？ 3．電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡 的結(jié)構(gòu)原理有何主要異同點？ 4．放射自顯影技術(shù)的基本原理及其用途。 5．染色體組型制做技術(shù)包括哪幾個基本步驟？ 10 6．免疫熒光技術(shù)的原理和操作步驟如何？試與放射自顯影技術(shù)相比較。 7．何為制備離心？何為分析離心？二者各有何用途？ 8．設(shè)計一套分離細(xì)胞核、葉綠體、線粒體的技術(shù)路線。 9．細(xì)胞融合有哪幾種方法？思考引起膜融合的原理。 10． DNA 分子雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的基本要點是哪些？ 11．什么叫分子雜交技術(shù)？有何用途？ 12．酶在細(xì)胞代謝中的重要作用是什么？它為什么具有化學(xué)和遺傳雙重調(diào)節(jié)作用？ 13．多酶體系分哪 幾類？各有何作用特點？理解多酶體系同細(xì)胞代謝活動高效性的關(guān)系。 14．什么叫基因擴(kuò)增？ 15．研究一個基因的功能的方法有哪些？ 16．請舉出研究基因表達(dá)的五種實驗方法。（中科院微生物所 1999 年分子生物學(xué)考研試題） 17．如何制備涂片（ Smears）、壓片（ Squashes）、介離標(biāo)本（ Mecerations）、和懸滴標(biāo)本（ Hanging drop preparations），并例舉其在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用。 18．蘭花發(fā)表于 :2022 年 1 月 28 日 12:31: 已知一個疾病基因的部分序列 ,如何克隆到該全長基因 ? RE: :339。RACE 或 539。RACE,看你缺哪部分了 ,原理我在置頂貼里已轉(zhuǎn)發(fā)過了 。 DNA 文庫中找 :用你的部分序列與文庫中的 GENES 進(jìn)行分子雜交 ,當(dāng)然是用 SSDNA 或 RNA/DNA,還涉及到 PROBE,挑出陽性片段 ,參見 :靜國忠 基因工程及其分子生物學(xué)基礎(chǔ) 北大出版社 ,1999。 PCR:見吳乃虎 基因工程原理 (上 ) 科學(xué)出版社 1998,107109. 肯定還有更好的方法 .具體操作可到 分子 CLONE3等實驗書上去找吧 . 僅供參考 蘭花 2022年 1月 28 日 21:08: 對于你的第一種方法 ,有同學(xué)答他只答了 SMART 技術(shù) ,不知道可不可以 ? 對于你第 2 種方法 ,我請問了 ,到 cDNA 文庫中篩選出來的基因就一定是全長的基因嗎 ? 我不熟悉 SMART 技術(shù) ,RACE 就是為了克隆兩端的 SEQUENCE. 我說的核 DNA文庫包括 cDNA或核 DNA文庫是從新鮮的表達(dá)目的 GENES的 TISSUE和 CELL中分離出的總 RNA或 mRNA反轉(zhuǎn)錄而成 .一般并不切開 CDNA而是采用接頭連接的辦法 CLONE入載體 ,cDNA文庫也可 .還可用電子克隆 . 僅供參考 魔 禮青發(fā)表于 :2022 年 2 月 1日 17:29: 現(xiàn)代基因操作技術(shù) 現(xiàn)代基因操作技術(shù) ISBN: 7801571118 作者：胡福泉 人民軍醫(yī) 出版 我記得上面介紹了相關(guān)方法，那本書沒在手上。 版主的方法差不多了吧。 19．魔禮青發(fā)表于 :2022 年 1月 16日 22:49: 流式細(xì)胞術(shù)是什么方法？ RE: 流式細(xì)胞術(shù) (Flow Cytometry,簡稱 FCM)是 20 世紀(jì) 70 年代發(fā)展起來的一種對細(xì)胞的物理和化學(xué)性質(zhì) ,如大小 ,內(nèi)部結(jié)構(gòu) ,DNA,RNA,PROTEIN,抗原等進(jìn)行快速測量并可分類收集的高技術(shù) . 其原理是 懸浮在液體中的分散細(xì)胞 ,一個一個地依次通過測量區(qū) ,當(dāng)每個細(xì)胞通過測量區(qū)時產(chǎn)生電信號 ,這些電信號可代表熒光 ,光散射 ,光吸收或細(xì)胞的阻抗等 ,這些信號可以被測量 ,存儲 ,顯視 ,于是細(xì)胞的一系列重要的物理特性和化學(xué)特征就被快速地 ,大量地測定 . 參見 :宋平根 李素文 主編 流式細(xì)胞術(shù)的原理和應(yīng)用 北師大出版社 1992 20． ChaoYue 主題 ://fai