煙草青枯病ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-04 05:09 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 根據(jù)菌株對(duì) 3種雙糖 （ 乳糖、麥芽糖、纖維二糖 ）和 3種己醇（ 甘露醇、山梨醇和甜醇 ）的利用程度，將菌株劃分為不同的生化型。 測(cè)試項(xiàng)目 生化型 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 甘露醇 － － ＋ ＋ ＋ 山梨醇 － － ＋ ＋ － 甜醇 － － ＋ － － 乳糖 － ＋ ＋ － ＋ 麥芽糖 － ＋ ＋ － ＋ 纖維二糖 － ＋ ＋ － ＋ 注：“ +”代表能利用（培養(yǎng)基變黃），“ － ”代表不能利用（藍(lán)色） 青枯菌生化型劃分標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)何禮遠(yuǎn)、華靜月等提出的青枯菌 5型劃分標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)分離菌株進(jìn)行生化型劃分，標(biāo)準(zhǔn)如下 ： 生化型測(cè)定 結(jié)果表明： 54個(gè)煙草青枯菌菌株均能利用 3種雙糖和 3種己醇， 根據(jù)青枯菌生化型劃分標(biāo)準(zhǔn) 鑒定均為生化型 Ⅲ 。 甜醇 山梨醇 甘露醇 纖維二糖 乳糖 麥芽糖 菌株對(duì) 3種己醇和 3種雙糖的利用（左為 CK，右為接菌） 參照 Fegan和 Prior的方法 ，用 7條引物擴(kuò)增青枯菌株 DNA，根據(jù)擴(kuò)增的片段大小確定供試菌株的演化型。 用于 演化型鑒定 的引物序列 引物 序列 Sequence（ 539。339。） 擴(kuò)增片段分類歸屬 片段大小 Nmult21:1F CGTTGATGAGGCGCGCAATTT 演化型 Ⅰ 144bp Nmult21:2F AAGTTATGGACGGTGGAAGTC 演化型 Ⅱ 372bp Nmult23:AF ATTACSAGAGCAATCGAAAGATT 演化型 Ⅲ 91bp Nmult22:InF ATTGCCAAGACGAGAGAAGTA 演化型 Ⅳ 213bp Nmult22:RR TCGCTTGACCCTATAACGAGTA 759 GTCGCCGTCAACTCACTTTCC 青枯菌種特異性 280bp 760 GTCGCCGTCAGCAATGCGGAATCG DNA提取 ：用 TaKaRa試劑盒 提取 菌株的 DNA。 PCR擴(kuò)增采用 25μL反應(yīng)體系，其中 包括： 10 PCR buffer ， Taq酶 2U， ， dNTPs 200181。M， 引物 759和 760各 4pmol，引物 Nmult21:1F，Nmult21:2F， Nmult23:AF， Nmult22:InF， Nmult22:RR各6pmol， DNA模板 50ng。 反應(yīng)程序?yàn)?： 96℃ 5 min； 94℃ 15s， 30 59℃ 30s， 72℃ 30s； 72℃ 延伸 10min。 取 5μLPCR產(chǎn)物于 2%的瓊脂糖凝膠中電泳，電壓 5V／ cm，通過 Biorad凝膠成像儀觀察結(jié)果。 反應(yīng)程序?yàn)?： 96℃ 5 min； 94℃ 15s， 30 59℃ 30s， 72℃ 30s； 72℃ 延伸 10min。 取 5μLPCR產(chǎn)物于 2%的瓊脂糖凝膠中電泳，電壓 5V／ cm，通過 Biorad
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1