【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 驗(yàn)檢疫的樣品 ? 同一國(guó)家和地區(qū)來(lái)源，同一運(yùn)輸工具，同一品名（種苗則為同一品種）的貨物統(tǒng)稱為一 批 ，按批進(jìn)行檢驗(yàn)、放行或處理。 ? 通常一批貨物的數(shù)量很大，不可能全部檢驗(yàn)，必須按規(guī)定的方法從批的總體中抽取適當(dāng)數(shù)量的代表性部分，稱為 樣品 ，用以檢驗(yàn)。 ? 每份送檢樣品量的規(guī)定：谷物、棉籽、瓜子、飼料類為 1000g；大粒種子（玉米、蠶豆等） 1000~1500g；小粒種子（芝麻） 500g；蔬菜、煙草： 10~100g；蔥頭、紅棗、馬鈴薯等： 2022~5000g。 取樣方法的依據(jù) ? 有害生物的分布規(guī)律 ? 貨物的數(shù)量 ? 裝載方式等因素確定 樣品數(shù)量（容量）大小依據(jù) ? 有害生物的帶有率 。 ? 檢驗(yàn)方法的靈敏度 。 ? 檢驗(yàn)所要求的精度 。 ? 貨物種類與特點(diǎn) 。 ? 檢驗(yàn)所允許的時(shí)間和花費(fèi)等許多因素確定。 ? 有害生物的帶有率越低，檢驗(yàn)方法的靈敏度越低，檢驗(yàn)精度要求越高，所需樣品數(shù)量就越多。 檢驗(yàn)檢疫的方法 ? 真菌主要由培養(yǎng)方法檢出，根據(jù)形態(tài)特征鑒定； ? 細(xì)菌、病毒及與之類似的有害生物則需應(yīng)用多種生物學(xué)的、生理生化的和免疫學(xué)的技術(shù)檢驗(yàn)； ? 線蟲(chóng)和雜草種子主要由直接檢驗(yàn)和機(jī)械分離而檢出，根據(jù)形態(tài)特征鑒定。 第一節(jié) 植物病原真菌的檢驗(yàn)檢疫技術(shù) ? 病原真菌的屬、種主要依據(jù)其形態(tài)特征鑒定，有時(shí)形態(tài)相似的近似種類需接種寄主，測(cè)定其致病性。鑒定病原真菌?；秃托》N，也需接種鑒別寄主。 ? 除洗滌檢驗(yàn)法的檢驗(yàn)結(jié)果用單位重量種子的孢子負(fù)載量表示外，其它檢驗(yàn)方法都能獲得帶菌百分率或發(fā)病百分率。 一、直接檢驗(yàn) ? 是用于檢驗(yàn)檢疫具有明顯癥狀的植物材料，可作初步的診斷 ? 現(xiàn)場(chǎng)快速檢查 ? 肉眼，放大鏡或?qū)嶓w顯微鏡。 二、過(guò)篩檢驗(yàn) ? 檢驗(yàn)糧谷、種子、油料、干果和生藥材，檢驗(yàn)病粒，菌嬰、菌核、病殘?bào)w等 ? 種子過(guò)篩后可檢出夾雜的菌癭、菌核、病株殘屑和土壤，都需仔細(xì)鑒別。 ? 小麥矮腥黑穗病的菌嬰 三、比重檢驗(yàn)法 ? 原理：菌嬰、菌核和病秕籽粒都要比健康的籽粒輕。 ? 用于種子、糧谷、豆類中的菌嬰、菌核和病秕籽粒。 四、染色檢驗(yàn)法 ? 某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原菌本身，常可用特殊的化學(xué)藥品處理，使其染上特有顏色，利于檢出和區(qū)分病蟲(chóng)種類 洗滌檢驗(yàn)法 ? 用于檢測(cè)種子表面附著的真菌孢子，包括黑粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、銹菌的夏孢子以及多種半知菌的分生孢子等。 洗滌檢驗(yàn)的操作程序 一定數(shù)量的種子樣品放入容器并加入定量蒸餾水或其它洗 滌液，振蕩 510 min，使孢子脫離種子，轉(zhuǎn)移到洗滌液中。 洗脫孢子 將孢子洗滌液移入離心管，低速離心（ 25003000r／ min） 1015min，使孢子沉集在離心管底部。 離心富集 棄去離心管內(nèi)的上清液，加入一定量蒸餾水或其它浮載液， 重新懸浮沉集在離心管底部孢子，取懸浮液。滴加在血球 計(jì)數(shù)板上，用高倍顯微鏡檢查孢子種類并計(jì)數(shù)，據(jù)此可計(jì) 算出種子的帶菌量。 鏡檢計(jì)數(shù) 用常規(guī)孢子萌發(fā)測(cè)定法、分離培養(yǎng)法或紅四氯唑（ TTC） 染色法判定孢子死活。 孢子生活 力測(cè)定 影響洗滌檢驗(yàn)的因素 ? 種子或其他糧谷類產(chǎn)品表面所黏附的病菌孢子不一定能完全洗滌下來(lái) 。 ? 離心管內(nèi)容已形成一層極難沉降的孢子薄膜 。 管壁也可能黏附孢子 。 ? 視野內(nèi)孢子分布不均勻 。 ? 操作不規(guī)范，不嚴(yán)格 。 保濕萌芽檢驗(yàn)法 ? 適用于病菌隨種子萌發(fā)或幼苗生長(zhǎng)階段就開(kāi)始侵然危害，并表現(xiàn)癥狀的病原菌。 ? 優(yōu)點(diǎn) ：容易檢查根部和綠色部分，也可避免相互傳染。 ? 缺點(diǎn) ：腐生菌干擾；病菌之間干擾 。 ? 沙內(nèi)萌芽檢驗(yàn) － 主要用于植物繁殖材料的入境后隔離檢疫。供試材料種植在經(jīng)過(guò)高壓蒸汽滅菌處理或干熱滅菌的沙礫、石英砂中，在隔離場(chǎng)所和適宜條件下栽培，根據(jù)幼苗和成株的癥狀鑒定。 ? 土內(nèi)萌芽檢驗(yàn) ? 試管幼苗癥狀測(cè)定 － 在試管中水瓊脂培養(yǎng)基斜面上播種種子，在適宜條件下培養(yǎng)，根據(jù)幼苗癥狀、結(jié)合病原菌檢查，確定種傳真菌種類。生長(zhǎng)檢驗(yàn)花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，使其應(yīng)用受到限制。 ? 保濕培養(yǎng)檢驗(yàn) 優(yōu)點(diǎn)－設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、花費(fèi)少、快速準(zhǔn)確 。 缺點(diǎn)－某些菌絲生長(zhǎng)不旺盛和產(chǎn)孢少，雜菌已影響 有利于病原菌形成孢子，同時(shí)又避免因種子萌芽伸長(zhǎng)過(guò)快造成相互覆蓋，便于檢查 冰凍吸水法： 含水量均勻一致，有利于病菌生長(zhǎng)，皿內(nèi)潔凈，雜菌少。 瓊脂平皿法： 吸水紙法 ： 培養(yǎng)皿 培養(yǎng)皿 吸水紙 培養(yǎng)皿 蒸餾水 種子 培養(yǎng)皿 日光或 紫外燈 2025℃ 710d 實(shí)體顯微鏡下 逐粒種子檢查 特別注意觀察種子上菌絲體的顏 色、疏密程度和生長(zhǎng)特點(diǎn)、真菌 繁殖結(jié)構(gòu)的類型和特征。 培養(yǎng)皿吸水紙培養(yǎng)檢驗(yàn)法實(shí)例 種子 1％ 2％次氯酸鈉溶液和抗菌 素表面消毒 510 min 植床于培養(yǎng)基平板上，在適宜 溫度和光照下培養(yǎng) 710d 手持放大鏡從培養(yǎng)皿兩面觀察，依 據(jù)菌落形態(tài)、色澤來(lái)鑒別真菌種類 必要時(shí)挑取培養(yǎng)物制片，用 高倍顯微鏡檢查 瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)檢驗(yàn) 七、分離培養(yǎng)檢驗(yàn) ? 主要應(yīng)用于檢驗(yàn)潛伏于種子、苗木或其他之物產(chǎn)品內(nèi)部，不易發(fā)現(xiàn)和鑒定的病原菌； ? 當(dāng)種子、苗木或其他植物產(chǎn)品上雖有病斑，但無(wú)特殊的病原菌可供鑒定的場(chǎng)合。 分離培養(yǎng)檢驗(yàn)方法 ? 根據(jù)不同的目的分為 5種： ? 種子表面或深層的病菌 ? 檢測(cè)病菌的潛伏部位 ? 了解種子外部附著的病菌種群 ? 檢驗(yàn)病菌種類、菌落類型和萌發(fā)率 ? 分離塊莖、塊根和苗木、接穗等繁殖材料所帶的病菌 分離培養(yǎng)檢驗(yàn)步驟 消毒 接種 培養(yǎng) 研究方法 ? 進(jìn)境美國(guó)小麥中黑麥草腥黑穗病菌的檢測(cè)和鑒定（洗滌檢測(cè)和熒光 PCR） ? 水稻腥黑粉病菌的單孢檢測(cè)（分離培養(yǎng)） ? 大豆疫病的田間鑒定與防治 第二節(jié) 病原細(xì)菌的檢疫檢驗(yàn)技術(shù) ? 植物細(xì)菌病害有軟腐、環(huán)腐、萎蔫、潰瘍、瘡痂、枝枯、葉斑、組織增生（癭瘤、發(fā)根）等多種癥狀。葉片上病斑常呈水漬狀，上有細(xì)菌溢膿。病部切片鏡檢可見(jiàn)細(xì)菌溢。 ? 田間診斷 ―― 了解病害和寄主的群體特征，即病害在田間發(fā)生的情況，以及當(dāng)?shù)氐淖魑镌耘嗉案髑闆r 。 ? 初步診斷 ―― 通過(guò)肉眼觀察植株的癥狀、病原分泌物以及鏡檢觀察。 ? 例如 水稻細(xì)菌性條斑?。∫恍K病葉組織，低倍鏡下觀察，微管束有噴菌現(xiàn)象。 進(jìn)一步診斷 ? 分離培養(yǎng)：選擇新鮮的病斑或病鍵組織交界處 ―― 表面消毒 ―― 清水洗凈 ―― 碾碎稀釋―― 劃線培養(yǎng) ―― 觀察 提取液系列稀釋 在金氏 B（ KB）培養(yǎng)基平板上涂布 在 25℃ 和無(wú)光照條件下培養(yǎng) 3d后 紫外光或近紫外光照射下有藍(lán)色熒光的 菌落，為假單胞桿菌，可能是暈?zāi)璨【? 選擇典型菌落作進(jìn)一步的鑒定 菜豆種傳暈?zāi)璨【姆蛛x ? 致病性測(cè)定：目的是區(qū)分致病性細(xì)菌和腐生菌。 ? 過(guò)敏性反應(yīng) (Hypersensitive reaction, HR)是指病原細(xì)菌在非寄主植物上引起枯斑反應(yīng)的現(xiàn)象，腐生性細(xì)菌則不表現(xiàn)典型的枯斑。 大部分病原細(xì)菌，