發(fā)酵工程課程設(shè)計(jì)(1)(編輯修改稿)
2025-02-03 04:24 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 無(wú)機(jī)鹽對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖和外源蛋白的表達(dá)也有很大影響。 ? 溶氧濃度 ? 隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，菌體密度迅速增加，溶氧濃度隨之下降，細(xì)胞的生長(zhǎng)減慢。特別是高密度發(fā)酵的后期，由于菌體密度的擴(kuò)增，耗氧量極大，發(fā)酵罐各項(xiàng)物理參數(shù)均不能滿足對(duì)氧的供給，導(dǎo)致菌體生長(zhǎng)極為緩慢，外源蛋白的表達(dá)量也較差。 ? 在發(fā)酵過(guò)程中保證適宜的溶氧濃度，必須確定發(fā)酵罐的通氣量和攪拌速度 。 ? PH ? 大腸桿菌利用葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，特別是大量的乙酸和二氧化碳，使 pH降低，必須調(diào)節(jié) pH在適宜的范圍。 ? 溫度 ? 培養(yǎng)溫度在適宜的范圍，對(duì)于溫控誘導(dǎo)表達(dá)的基因工程菌來(lái)說(shuō)，誘導(dǎo)時(shí)機(jī)和持續(xù)時(shí)間對(duì)于重組蛋白的產(chǎn)量由很大影響。 ? 代謝副產(chǎn)物 乙酸 二氧化碳 ? 葡萄糖的濃度超過(guò)某一閾值，會(huì)產(chǎn)生乙酸，或者比生長(zhǎng)速率過(guò)高，供氧不足，也會(huì)產(chǎn)生乙酸。為降低培養(yǎng)基中代謝副產(chǎn)物的積累，可采用流加補(bǔ)料的措施，或保持適當(dāng)?shù)谋壬L(zhǎng)速率，或在培養(yǎng)基中添加某些氨基酸。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及條件的確定 首先了解幾種測(cè)定方法 還原糖的測(cè)定方法 氨基酸的測(cè)定方法 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定 ? 查閱相關(guān)資料確定最佳培養(yǎng)基組成為 成分 葡萄糖 酵母膏 蛋白胨 (魚(yú)粉 ) (NH4)2S04 K2HP043H2O KH2PO4 MgS04 微量元素母液 (g／ L) 18． 0 ? 實(shí)驗(yàn)室提供的發(fā)酵罐容積為 50L,可根據(jù)上圖中各成分的配比 ,確定最后所需要的量 成分 葡萄糖 酵母膏 蛋白胨 (魚(yú)粉 ) (NH4)2S04 K2HP043H2O KH2PO4 MgS04 微量元素母液 g 975 ? 確定了最佳培養(yǎng)條件為： 溫度 37℃ 、 培養(yǎng)基裝液量 35 ml/250 mL、 培養(yǎng)基初始 pH7． 種子培養(yǎng)時(shí)間 8 h、 接種量 1％ 。 ? 采用優(yōu)化后的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件發(fā)酵 18h， 菌體密度 A600達(dá)到 ，茵體干重為 g(DCW)／ L，酶活力達(dá)到 210 U／ mL發(fā)酵液，分別為初始條件下的
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