抗原與抗體的相互作用及免疫學檢測(編輯修改稿)
2025-06-18 20:18 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 免疫方法：淋巴結(jié)注射、腹部皮下注射、四足掌皮內(nèi)注射。 免疫次數(shù)：每隔 710天免疫一次，共需 34次。第二次免疫后開始測效價。 二、抗血清制備和抗體效價測定 采血方法：兔頸動脈放血、兔心臟取血、兔耳緣靜脈放血、鼠心臟取血、剪尾采血、眼窩采血。 抗血清制備：血液室溫放置 12h或冰箱內(nèi) 4度過夜，血清便可充分析出，用滴管吸出或離心分離取得。分離好的血清加入 %疊氮化鈉，在 4度冰箱內(nèi)保存可長達半年。 效價測定：用免疫動物時的抗原濃度作抗體效價測定的抗原濃度。以出現(xiàn)沉淀反應(yīng)的抗血清的最大稀釋倍數(shù)來表示抗血清的效價。 三、免疫球蛋白的純化 由于抗原抗體的結(jié)合具有高度的特異性，在免疫檢測中常常直接運用抗血清進行，而無需對抗體進行純化。 隨著免疫檢測技術(shù)的發(fā)展，如用鐵蛋白、膠體金等標記抗體作免疫電鏡觀測，用熒光素、酶、同位素標記抗體作組織細胞染色，或?qū)乖M行定量測定，就必須對抗體進行純化，但這類的純化多數(shù)是類別的純化。 ? 抗體純化的方法： 硫銨鹽析法：簡便、蛋白質(zhì)變性較少，33%飽和度的硫銨可以沉淀所有各類免疫球蛋白；缺點是分離的純度較差，對 IgA類抗體來說，濃鹽可使其形成二聚體，不宜采用。 Cohn冷酒精沉淀法： ? IgA相對分子量 160000， IgM相對分子量1000000，故可通過分子篩將兩者分開而得到純品。 硫銨鹽析和 DEAE纖維素柱層析法純化 IgG 在 IgG帶正電，其他血清蛋白帶負電，因此陰離子交換劑 DEAE纖維素可以一次將 IgG提純到很高的純度 IgM的純化方法： 18%飽和度硫銨沉淀+DEAE纖維素柱層析法。 第三節(jié) 抗原與抗體反應(yīng) 免疫檢測法 抗原與抗體結(jié)合后，只有出現(xiàn)可見的反應(yīng)，如凝集、溶血、沉淀實驗等，或用熒光素、酶、放射性同位素等標記方法提高可測性，才便于在免疫檢測中運用。可見性反應(yīng)的出現(xiàn)，對抗原抗體分子合適比例的要求遠比對彼此絕對量方面要高得多。這就是說，一方面在進行免疫檢測時要注意抗原抗體的用量；另一方面只要提高可見度或可測性，便可大大提高免疫檢測方法的靈敏度。 一、凝集反
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