動物繁殖新技術(shù)講座(編輯修改稿)
2025-06-17 09:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 孕馬血清促性腺激素 (PMSG)處理法 在情期的 11～ 12d， 一次肌注 PMSG2500～ 30001U，48h后宮注 PGF2α 。 發(fā)情后約 18h肌注等量的抗 PMSG。 超數(shù)排卵處理 PGF2α 處理后 40～ 48h， 大部分處理牛發(fā)情 。通常要求從注 PG第 2d傍晚開始觀察發(fā)情 ， 至少早晚各觀察一次 。 在觀察到接受爬跨后 4～ 6h進行第一次輸精 ， 間隔 12h后第二次輸精 。 每次有效精子數(shù)不得少于 50 106， 輸入兩側(cè)子宮角或子宮體 。 注意輸精時不得觸摸卵巢 。 超數(shù)排卵處理 四、 采卵 牛的胚胎移植 1．采卵時間 以發(fā)情日為第 0d， 在第 5～ 6d檢查卵巢確定黃體數(shù) ， 以便于安排受體頭數(shù) 。 第7d(或第 6～ 8d)非手術(shù)回收卵 。 采卵 2．器械和沖卵液的準(zhǔn)備 滅菌處理過的沖卵管用 PBS液沖洗 2～ 3次 ，插入鋼芯 ， 檢查氣球 。 在無菌間用導(dǎo)管連接吊瓶和集卵杯灌流裝置 。 裝入 PBS液的吊瓶在 37℃ 水浴中預(yù)溫待用 。 準(zhǔn)備好必要的麻醉劑 、 注射器 、酒精棉球和沖洗消毒劑等 。 采卵 3．供體牛的保定和麻醉 供體牛保定完畢后 ， 在第一 、 二尾椎骨間酒精消毒 ， 用 2%普魯卡因 3～ 5ml作硬膜外麻醉 ， 或肌注 2%靜松靈 l ml。 （三）采卵 采卵 4．外陰清洗、消毒 麻醉后將牛尾豎直綁在保定架上 ， 清除糞便 ， 用清水沖洗會陰部及外陰 ， 再用高錳酸鉀液沖洗消毒 ，用滅菌衛(wèi)生紙擦干 ， 最后用酒精棉球消毒外陰部 。 采卵 5．沖卵管的插入和沖卵部位 助手將準(zhǔn)備好的沖卵管交給術(shù)者的右手 ， 術(shù)者左手食指和拇指壓開陰門插入沖卵管 ， 再將左手伸入直腸 ， 仔細(xì)小心地誘導(dǎo)沖卵管經(jīng)子宮頸進入一側(cè)子宮角至大彎處 ， 抽出少許鋼芯 ， 再將沖卵管向前推 ， 使其尖端靠近子宮角深部 。 由助手持 30ml注射器一次推入 10ml空氣 ， 然后按術(shù)者要求 ， 以1ml計數(shù)充氣 。 根據(jù)子宮大小及沖卵管在子宮的位置確定充氣量 ， 一般青年牛充氣 14～ 16ml， 經(jīng)產(chǎn)牛為 18～ 25ml。 沖卵管固定后抽出鋼芯 ， 開始灌流 。 （三）采卵 采卵 6．灌流方法 將吊瓶掛在距外陰部 ， 接通三通管 (Y型 )和沖卵管 。 術(shù)者用右手控制進流和出流開關(guān) ， 每次灌注 30～ 50ml， 由少到多 ， 每側(cè)總量為 300～500ml。 左手通過直腸輔助按摩子宮角 。 每側(cè)子宮角沖 8～ 10次 。 或者用 50ml注射器 ， 每次注入30～ 50ml的 PBS沖卵液 ， 分次沖洗子宮角 ， 回收后注入加蓋量筒 。 另一側(cè)子宮角的沖洗是由術(shù)者右手拉直沖卵管 ， 助手小心插入鋼芯 。 術(shù)者的左手在直腸內(nèi)誘導(dǎo)鋼芯插穩(wěn)后 ， 給氣球放氣 。 術(shù)者再將沖卵管插入另一側(cè)子宮角 ， 用同樣的方法沖洗 。 全過程需在室溫 (20℃ 左右 )操作 。 （三）采卵 采卵 （三）采卵 采卵 7．術(shù)后處理 兩側(cè)子宮角沖卵完成后 ， 從氣球放出一部分空氣 ， 將沖卵管抽至子宮體灌注土霉素溶液 (3g土霉素粉溶于 100ml滅菌雙蒸水或生理鹽水 )或 10ml青霉素 (80萬 u)和鏈霉素(100萬 u)， 拔出沖卵管 。 （三）采卵 采卵 五、檢卵 （三）采卵 1．過濾集卵杯 (日本產(chǎn) )法 回收結(jié)束后 ， 用帶 4G針頭的注射器沖洗濾網(wǎng)2～ 3次 ， 吸去杯中的泡沫 ， 置實體顯微鏡下檢查 。 （三）采卵 檢卵 2．過濾杯 (美國產(chǎn) )法 濾去沖卵液 ， 將過濾杯中留下的 30～ 50ml倒入平皿 ， 用沖卵液沖洗過濾杯 2～ 3次 ， 一并倒入平皿 ， 置鏡下檢查 。 （三）采卵 檢卵 3．沉淀法 (或濾網(wǎng)吸液法 ) 將回收的沖卵液注入 1000ml量筒 ， 在 20～25℃ 下靜置 20～ 30min(min)， 用導(dǎo)管吸去上層液體 。 或者按好濾網(wǎng) ， 用導(dǎo)管在濾網(wǎng)上吸去上部沖卵液 ， 將殘留的 80～ 100ml倒入
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