hplc分離條件的優(yōu)化步驟以及定量計(jì)算公式的選擇(編輯修改稿)
2025-06-16 22:11 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 △ p 5~14MPa；理論塔板數(shù) n （ 2~5） 10 3~（2~10） 10 4塊 /m 樣品組分保留值和容量因子的選擇 選擇好操作參數(shù)后，通常希望完成一個(gè)簡(jiǎn)單樣品的分析時(shí)間控制在 10~30min之內(nèi)，若為含多組分的復(fù)雜樣品，分析時(shí)間控制在 60min以內(nèi)。 保留時(shí)間和容量因子由色譜過程的熱力學(xué)因素控制，可通過改變流動(dòng)相的組成和使用梯度洗脫來進(jìn)行調(diào)節(jié)。 若使用恒定組成流動(dòng)相洗脫，與組分保留時(shí)間對(duì)應(yīng)的容量因子 k′ 應(yīng)保持 1~10之間，以求獲得滿意的分析結(jié)果。 對(duì)組成復(fù)雜、由具有寬范圍 k′ 值組分構(gòu)成的混合物，需用梯度洗脫技術(shù)，才能使樣品中每個(gè)組分都在最佳狀態(tài)下洗脫出來。（采用梯度洗脫通常能將組分的 k′ 值減小至原來的 1/10~1/100，從而縮短了分析時(shí)間。） 相鄰組分的選擇性系數(shù)和分離度的選擇 為達(dá)到某一確定分離度，選擇性系數(shù)的優(yōu)化十分重要，對(duì)預(yù)期柱效 10 3~ 10 5塊 /m理論塔板的色譜柱，若相鄰組分 k在 1~10，且 α＞ ~，則易達(dá)到 多組分優(yōu)化分離的最低指標(biāo)（ R= ） 選定一種高效液相色譜方法時(shí)，很難將各組分間的分離度都調(diào)至最佳，只能使少數(shù)幾對(duì)難分離物質(zhì)對(duì)的分離度至少保持 R=。 R＜ ，僅呈半峰處分離，則應(yīng)通過改變流動(dòng)相組成或改變流動(dòng)相流速，調(diào)節(jié)分離度，盡可能使R=，才能滿足準(zhǔn)確定量分析的要求。 流動(dòng)相的選擇 pH的選擇： 反相色譜法分離弱酸（ 3≤pKa≤7 ）或弱堿（ 7≤pKa≤8 ）樣品 調(diào)節(jié)流動(dòng)相的 pH值： 抑制樣品組分的解離 增加組分在固定相上的保留 改善峰形 ，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象 流動(dòng)相調(diào)整的三原則 （ 1）由強(qiáng)到弱 （ 2）三倍規(guī)則 （ 3）粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào) 流動(dòng)相流速的
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