激光共聚焦顯微鏡原理和操作(編輯修改稿)
2025-06-15 02:29 本頁面
【文章內容簡介】 如 : 微管蛋白 tublin ( 抗 tublin抗體 +熒光探針 ) 肌動蛋白 actin ( Palloidine+熒光探針 ) 2)細胞膜表面受體 配體 +熒光探針 如 : nAchR、 mAchR、 多巴胺受體 (D1,D2) 標記 Gm1: 霍亂毒素受體 霍亂毒素 +FITC 激光掃描共焦顯微鏡應用 細胞器 熒光探針 1)線粒體 Mitochondria Rodamin 123 505/534 ，可染活細胞，陽離子 , 可檢 測線粒體膜電位 , 且在多數(shù)細胞中停留 時間短 JC1 線粒體膜電位低時為單體 490/527 發(fā)綠光 線粒體膜電位高時為多聚體 490/590 發(fā)紅光 可標記活細胞線粒體，且為檢測線粒體膜電位最 佳探針 Mitotracker Green FM 490/516, 染活細胞或固定細胞 , 穩(wěn)定不漏出 Mitotracker Orange CMTMRos 551/576, (氧化型 ) Mitotracker Orange 還原型 , 只能染活細胞 激光掃描共焦顯微鏡應用 2)溶酶體 Lysosome 中性紅 541/640: 微偏堿性 , 可標記溶酶體等酸性器官 為非特異性 AO : LysoTracker Green DND26 504/511, 染活細胞 LysoTracker Blue LysoTracker Red 3)內質網(wǎng) Endoplasmic Reticulum DiOC6 484/500: 非特異性 , 較 高 濃度標記 內質網(wǎng) , 較 低 濃度標記 線粒體 4)高爾基體 Golgi apparatus NBD C6ceramie 466/536, 可染活或死細胞 激光掃描共焦顯微鏡應用 ?細胞器的單克隆抗體 5)細胞核 PI propidium iodide 536/617 DNA/\RNA 死細胞 碘化丙啶 EB ethidium bromide 518/617 DNA/RNA 死細胞 Hochest 33342 352/461 DNA AT 活細胞 Hochest 33258 352/461 DNA AT 活細胞 DAPI 358/461 DNA AT 半通透細胞 Chromomycin A3 450/470 DNA GC AO 500/526 DNA 活細胞 560/650 RNA TOTO1 514/533 DNA 死細胞 SYTO11~16 20~24 488/ 520 活細胞 SYTO11~16 20~24 521/ 556 活細胞 SYTO 17 621/634 活細胞 3. GFP 綠色熒光蛋白 GFP的的發(fā)現(xiàn)： 60年代 ， Shimomura等首先從水母中分離出一種 水母發(fā)光蛋白 (aequoren)， 該蛋白與鈣和腸腔素結合后可產(chǎn)生藍色熒光 。 然而水母整體幾提取的顆粒都呈綠色 ， 后經(jīng)證實在水母體內還存在另外一種發(fā)光蛋白即 綠色熒光蛋白 GFP, 后經(jīng)研究表明 ， 在水母體內 Ca2+和腸腔素與水母發(fā)光蛋白結合后 ，水母發(fā)光蛋白產(chǎn)生藍色熒光 ， GFP在藍光的激發(fā)下 ， 產(chǎn)生綠色熒光 。 將外源基因與 GFP DNA 相連 , GFP可作為外源基因的報告基因實時監(jiān)測外源基因的表達 .
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