激光共聚焦顯微鏡原理和操作-文庫吧在線文庫
【正文】 H2rhod123 被動擴散入細(xì)胞內(nèi) 在細(xì)胞內(nèi)被氧化成rod123（發(fā)光） 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 ? 藥物進(jìn)入細(xì)胞的動態(tài)過程及定位分布 xyzt 掃描 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 四 . 膜電位的測量 標(biāo)記膜電位探針 (慢反應(yīng)）： JC1 510nm 530/590nm Dioc5(3) 548nm 573nm Dioc6(3) 484nm 500nm 快反應(yīng)探針： Di4ANEPPS 496nm 703nm Di4ANEPPS 498nm 713nm 細(xì)胞膜靜息膜電位： 70mV 線粒體膜電位： 150mV 以上均屬于陽離子探針，更容易與線粒體親和，為線粒體膜電位探針 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 七 ． 熒光能量共振轉(zhuǎn)移 ( fluorescence Resonance Energy Transfer) 能量轉(zhuǎn)移：能量從分子的一個部位向另一個部位的傳遞 ，或能量從一個分子向另一個分子傳遞 。 將外源基因與 GFP DNA 相連 , GFP可作為外源基因的報告基因?qū)崟r監(jiān)測外源基因的表達(dá) . 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 GFP主要應(yīng)用 : ? 對活細(xì)胞中的蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定位及動態(tài)觀察 可實時原位跟蹤特定蛋白在細(xì)胞生長、分裂、分化過程中或外界刺激因子的作用下的時空表達(dá) , 如某種轉(zhuǎn)錄因子的 核轉(zhuǎn)位 、蛋白激酶 C的 膜轉(zhuǎn)位 等。 照明針孔 與 探測針孔 對 被照射點 或 被探測點 來說是 共軛 的 ， 因此被探測點即共焦點 ， 被探測點所在的平面即共焦平面 。 4) 偏振性 : 激光為平面偏振光 , 光纖耦合 激光掃描共焦顯微鏡技術(shù) 5. 四個熒光通道 , 一個透射光通道 即除了可同時采集多標(biāo)記熒光圖像外 還可以同時采集透射光圖像 ,但透射光 圖像為 非共焦圖像 。 能量的提供者叫能量供體 ， 能量的接受者叫能量受體 。 然而水母整體幾提取的顆粒都呈綠色 ， 后經(jīng)證實在水母體內(nèi)還存在另外一種發(fā)光蛋白即 綠色熒光蛋白 GFP, 后經(jīng)研究表明 ， 在水母體內(nèi) Ca2+和腸腔素與水母發(fā)光蛋白結(jié)合后 ，水母發(fā)光蛋白產(chǎn)生藍(lán)色熒光 ， GFP在藍(lán)光的激發(fā)下 ， 產(chǎn)生綠色熒光 。激光掃描共焦顯微鏡技術(shù) ? 樣品要求 ? 原理 ? 功能 ? 在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 激光掃描共焦顯微鏡技術(shù)及應(yīng)用 The techniques and application of Confocal Laser Scanning Microscopy 激光掃描共焦顯微鏡技術(shù) 人眼分辨率： 光學(xué)顯微鏡分辨率： 電子顯微鏡分辨率： 共焦顯微鏡分辨率： 二 、 原理 激光掃描共焦顯微鏡技術(shù) 原理小結(jié) : Confocal 利用放置在光源后的 照明針孔 和放置在檢測器前的 探測針孔 實現(xiàn) 點 照明 和 點 探測 ， 來自光源的光通過照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點上 ， 該點所發(fā)射的熒光成像在探測針孔上 ， 該點以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋 。 激光掃描共焦顯微鏡技術(shù) : slow 220lines/s 512?512 23秒 slow2 440lines/s（ 2：雙向掃描） medium 450lines/s 512?512 medium2 900lines/s fast 1000lines/s 512?512 128?128 fast2 2021lines/s 7. 掃描密度 : 64?64 128?128 512?512 1024?1024 2048?2048 激光掃描共焦顯微鏡 技術(shù)的應(yīng)用 The application of
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