血凝抑制實(shí)驗(yàn)報(bào)告(編輯修改稿)
2024-12-07 01:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 H值，以提高試驗(yàn)的精確度。 ?、苋吭囼?yàn)均采用同一種稀釋液。 %紅細(xì)胞的制備。 ?、贋楸苊庥行╇u只的紅細(xì)胞有自凝現(xiàn)象，因此配制1%紅細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)選擇采取23只SPF雞或未進(jìn)行過任何免疫過的成年公雞血液。當(dāng)然采血的前提條件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝劑，如肝素、枸椽酸鈉、檸檬酸鈉等?！ 、诓裳戤吅蠓盅b至2ml容量的圓底離心管中，，離心后，離心管底部紅細(xì)胞不易與加入的PBS液混勻，易沉積在管底部，達(dá)不到洗脫干凈的目的?！ 、劢?jīng)20xx~3000r/min，5~10min，棄去上液和紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下緩慢顛倒（切忌用力過大使紅細(xì)胞破裂），使其充分混勻，再離心棄去上清液，反復(fù)幾次直至上清液清亮透明為止?！ 、茉诩蛹t細(xì)胞過程中還須不斷輕搖以確保紅細(xì)胞均勻，使其每孔加入相同數(shù)量的紅細(xì)胞?！ 、葜苽浜玫募t細(xì)胞液如果放置后上清液變紅，說明有溶血，不可再使用?！ 、傧茸鲅囼?yàn)測(cè)定效價(jià)，以抗原與紅細(xì)胞完全凝集的孔為1HUA抗原，配制4HUA抗原應(yīng)往前推算兩孔，即除以4后的值?！ 、诿看巫鲈囼?yàn)前，必須重新檢測(cè)禽流感抗原的血凝效價(jià)，以免效價(jià)發(fā)生改變而導(dǎo)致抗原稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，從而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。 ?、蹫楸ＷC配制的抗原準(zhǔn)確，還要進(jìn)行抗原回滴試驗(yàn)。具體方法：做二排抗原回滴，在兩排的第1~8孔各加25微升PBS，取4HAU抗原25微升加在兩排的第第2孔，混勻，從第2孔倍比稀釋至第4孔，棄去25微升，另一排同樣。從第2至第8孔補(bǔ)25微升PBS，以保持75微升總量不變，另一排同樣。兩排的第1至第8孔各加25微升1%紅細(xì)胞，震蕩10秒鐘。靜置30分鐘觀察結(jié)果。這樣在第1孔為4HAU抗原，第2孔為2HAU抗原，第3孔為1HAU抗原，第4孔為1/2HAU抗原，均為75微升總量，第5至第8孔為空白對(duì)照。如果抗原回滴試驗(yàn)不成立，應(yīng)相應(yīng)調(diào)整抗原濃度直至回滴試驗(yàn)成立。因?yàn)槿绻乖瓭舛冗^高，則所測(cè)定的抗體效價(jià)水平偏低，如果抗原濃度過低，則所測(cè)定的效價(jià)偏高。所以不調(diào)整抗原濃度至實(shí)驗(yàn)成立的話會(huì)對(duì)結(jié)果有很大影響?！ ?結(jié)果的判定 每次試驗(yàn)必須設(shè)陽性及陰性（空白）對(duì)照血清，判別試驗(yàn)是否成立。判讀結(jié)果時(shí)
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