【正文】 球表面環(huán)境變遷 (大陸漂移、陸地表面的升降等 )的認識，有助于人類更好地保護和利用我們賴于生存的 環(huán)境。正是由于以上結構和進化上的特點， mtDNA 已成為研究生物 (主要是動物 ) 進化的重要材料。它只產(chǎn)生一個帶有分支長度估計的拓撲結構。然而，如果轉換替代的頻率大大顛換替代時，鄰接法要優(yōu)于最大似然法的結果。樣本詳情見表 1。 9 DAN 沉降溶液于 4℃ 10000rpm下離心 15min，取沉淀，小心棄上清。此程序可自動對序列進行編輯選擇，當然也可手工對其進行編輯，最后將編輯后的最終序列輸出，保存成 fasta 格式。 15 結 論 葉蜂總科是廣腰亞目中最大的總科，長期以來，葉蜂總科昆蟲的系統(tǒng)學都是建立在形態(tài)學的基礎上，葉蜂總科昆蟲在亞科水平爭議 一直就比較大。 d39。MuWFA5ux^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。 MuWFA5ux^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 6a*CZ7H$dq8Kqqf HVZFedswSyXTyamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK! zn% Mz849Gx^Gj qv^$U*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 MuWFA5ux^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。MuWFA5ux^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849 Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 ksv*3t nGK8!z89Am YWv*3t nGK8! z89Am YWpaza dNuKNamp。 ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am v^$UE9wEwZQcUE%amp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK! zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9amp。gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 ksv*3tnGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwc^vR9CpbK! zn% Mz849Gx^ Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。同時跟我一起實驗的同學對我的幫助也是我實驗及論文能完成不可缺少的，對他們也表 示內(nèi)心的感謝。 NJ 分析選用的模型是 Kimura 2parameter，在 NJ 分析樹中只有屬內(nèi)種形成了一個分支，構成了單 系群， 結果表明： 28S DNA 平均堿基組成無明顯 T\A 的偏好，而 cytb 基因堿基組成有明顯 T\A的偏好。 (4) [33] PAUP 是 Phylogeic Analysis Using Parsimony 的簡稱，是 一款用于構建進化樹 （ 系統(tǒng)發(fā)育樹 ） 及進行相關檢驗的軟件，包含了眾多分子進化模型和方法，可利用 最大似然法 、簡約法、距離法等分析分子數(shù)據(jù)（ DNA、蛋白質(zhì) 序 列）、形態(tài)學數(shù)據(jù)及其他類型的數(shù)據(jù) 。 5 將上述所得溶液于 60℃ 下恒溫水浴 3— 4h。 魏美才博士 完成標本鑒定。當序列之間的進化速率差異很大 或替代型式不同時，同型事件出現(xiàn)的可能性就較大，這也直接限制了簡約法的應用。 距離矩陣法（ distance matrix method）首先獲得所有分類群間的進化距離，再基于這些距離值之間的關系構建系統(tǒng)發(fā)育樹。 線粒體基因 (mtDNA)序列 mtDNA 廣泛存在于昆蟲體內(nèi)富含線粒體的飛行肌中和卵內(nèi) ,昆蟲的 mtDNA 大小一般為 1514～ 1613 kb，以高拷貝數(shù)目存在于線粒體內(nèi)。該基因的產(chǎn)物是細胞色素氧化酶亞基 I，后者是細胞色素氧化酶的重要組成部分。這些分類依據(jù)在大多數(shù)情況下能清晰地反映一個物種的分類地位或系統(tǒng)發(fā)育關系 [13]。mtDNA 主要用于 RFLP 和克隆后或 PCR 擴增后的測序 [9—10 ]。劉曉麗在 2020 年報道了 9 種擬步甲 16S rDNA 部分序列及其親緣關系，部分擬步甲 16S rRNA 和和 18S rRNA 基因序列與分子系統(tǒng) [1415]。 最大似然法（ maximum likelihood method， ML）對每個譜系拓撲結構，計算出可觀察到符合特定替代模式的一組特定的序列數(shù)據(jù)的最大概率（似然率），然后挑選最大似然值最高的拓撲結構（樹＼分支圖）作為重建的譜系樹。葉蜂總科內(nèi)的節(jié)點目前大部分還處于模糊狀態(tài)。 TBE緩沖液（ 5儲存液）：每升含 54g Tris堿， ， 20ml （ ）。 （ 2） PCR 反應循環(huán)體系及參數(shù) PCR 反應體系 1 為 50ul 體系，成分如下： 28S DNA 基因的 PCR 反應的參 數(shù)： 94℃預變性 1 分鐘， 33 個循環(huán)（ 94℃變 濃度 體積 ddH2O Primer Buffer 5ul Mix dNTP 4ul Primer1 10ul/mol 2ul Primer2 10ul/mol 2ul Template 2ul Taq DNA polymer 酶 9 性 30 秒， 55℃退火 30 秒， 72℃延伸 60 秒）；最后 72℃延伸 10 分鐘。 11 圖 1所測樣品 PCR檢測結果 1 M 1 2 3 4 注： M： Marker： 200bpDNA，從下往上依次是 200bp， 400bp， 600bp， 800bp，1000bp,1200bp......圖中， 1： Arge xanthogaster； 2： Arge vulnerata； 3： Arge lingulopygia； 4： Eutomostethus formosanus。葉蜂總科中 6 個科的演化關系復雜。 6a*CZ7H$dq8Kqqf HVZFedswSyXTyamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2 zVkum amp。qYpEh5pDx2zVkumamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwc^vR9CpbK! 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zn% Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z8vGt YM*Jgamp。 ksv*3tnGK8! z89Am UE9aQGn8xp$Ramp。 UE9aQGn8xp$Ramp。本實驗所用的是核糖體的基因，測得的序列長度不夠長，在未來的工作中我們可以延長核酸序列的長度，使其包含更大的遺傳信息；可以加入一些編碼蛋白質(zhì)的基因，如 COⅠ和 EF1a 基因這些分子標記，把更多的基因聯(lián)合起來分析；另外，本文僅用了NJ 一種方法構建分子系統(tǒng)樹，還可結合 Baysain 和 ML 多種統(tǒng)計學方法來綜合討論這 些類群之間的關系。 12 從以上圖 圖 2 可以看出， 28S DNA 的引物擴增結果特異性強，條帶均清晰，測序長度約在 1050bp。 PCR 產(chǎn)物檢測、純化及測序 PCR 產(chǎn)物檢測 ,取 5ul 的反應產(chǎn)物，經(jīng) %瓊脂糖凝膠電泳后 （ 57V， 小時） EB 染色 小時 ，在凝膠成像系統(tǒng)中檢測是否有目標條帶并照相；產(chǎn)物的純化和測序均有上海博尚生物技術公司完成。提取具體步驟如下： 1 將 2%CTAB Buffer 預熱至 60℃ 。蕭剛柔先生于 1991 年總結了中國葉蜂的系統(tǒng)分類研究成果 [28]。 貝葉斯法 [16]（ Bayesain analysis）建立在 ML基礎上的但比 ML更為捷徑的一種統(tǒng)計學方法，它采用了 ML法的基本原理，同時引進了馬爾科夫鏈蒙特卡洛方法 (the Markov Chain Monthe Carloanlysis， MCMC)途徑，將運算效率提高，大大地縮短運算時間，最終獲得一組似然率最大樹構成的合意樹，直接估算貝葉斯后驗概率 (Bayesain Posterior Probabilities)。有學者認為，由于核基因沒有線粒體基因的替代偏異特征，昆蟲分子系統(tǒng)學應該更加關注核基因數(shù)據(jù)而不是線粒體基因數(shù)據(jù)。核基因中含有更加豐富的生物學信息，用適當?shù)暮嘶蜓芯坷ハx的系統(tǒng)發(fā)育，其結果更有可能比較真實地反映出昆蟲的進化歷史。但隨著學科的發(fā)展也遇到了一些傳統(tǒng)方法難以解決的困難，例如，一些近緣種很難確定其分類地位，對于種群、生態(tài)型的研究更是如此。 20年來，昆蟲分子系統(tǒng)學快速發(fā)展， 目前應用核酸序列分析技術測定昆蟲特定的核苷酸序列，以比較不同昆蟲之間的演化關系，建立符合自然發(fā)育的分子系統(tǒng)譜系，是昆蟲分子系統(tǒng)發(fā)育方面的主要研究方向之一。對細胞色素 b 氨基酸組成和結構基因的 脫氧核糖核酸 (DNA)順序研究指出 ,約 68％的氨基酸為非極性的。但是目前在實驗技術、資料積累、數(shù)據(jù)處理分析以及序列數(shù)據(jù)的可比性等方面還有待于進一步的完善和充實。鄰接法和轉換距離法不包括速率一致的假設，但均采用校正距離矩陣來減少各分支不同速率的影響。 葉蜂總科是廣腰亞目最大的總科，中國己記載 6 個科，分別為三節(jié)葉蜂科Argidae，葉蜂科 Tenthredinidae，松葉蜂科 Diprionidae，錘角葉蜂科 Cimbicidae，筒腹葉蜂科 Pergidae 和茸蜂科 Blas