【正文】 球表面環(huán)境變遷 (大陸漂移、陸地表面的升降等 )的認(rèn)識，有助于人類更好地保護(hù)和利用我們賴于生存的 環(huán)境。正是由于以上結(jié)構(gòu)和進(jìn)化上的特點(diǎn)， mtDNA 已成為研究生物 (主要是動物 ) 進(jìn)化的重要材料。它只產(chǎn)生一個帶有分支長度估計(jì)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。然而，如果轉(zhuǎn)換替代的頻率大大顛換替代時，鄰接法要優(yōu)于最大似然法的結(jié)果。樣本詳情見表 1。 9 DAN 沉降溶液于 4℃ 10000rpm下離心 15min，取沉淀，小心棄上清。此程序可自動對序列進(jìn)行編輯選擇，當(dāng)然也可手工對其進(jìn)行編輯，最后將編輯后的最終序列輸出，保存成 fasta 格式。 15 結(jié) 論 葉蜂總科是廣腰亞目中最大的總科，長期以來，葉蜂總科昆蟲的系統(tǒng)學(xué)都是建立在形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上，葉蜂總科昆蟲在亞科水平爭議 一直就比較大。 d39。MuWFA5ux^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。 MuWFA5ux^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 6a*CZ7H$dq8Kqqf HVZFedswSyXTyamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK! zn% Mz849Gx^Gj qv^$U*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 MuWFA5ux^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。MuWFA5ux^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849 Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 ksv*3t nGK8!z89Am YWv*3t nGK8! z89Am YWpaza dNuKNamp。 ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am v^$UE9wEwZQcUE%amp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK! zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9amp。gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 ksv*3tnGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwc^vR9CpbK! zn% Mz849Gx^ Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。同時跟我一起實(shí)驗(yàn)的同學(xué)對我的幫助也是我實(shí)驗(yàn)及論文能完成不可缺少的，對他們也表 示內(nèi)心的感謝。 NJ 分析選用的模型是 Kimura 2parameter，在 NJ 分析樹中只有屬內(nèi)種形成了一個分支，構(gòu)成了單 系群， 結(jié)果表明： 28S DNA 平均堿基組成無明顯 T\A 的偏好，而 cytb 基因堿基組成有明顯 T\A的偏好。 (4) [33] PAUP 是 Phylogeic Analysis Using Parsimony 的簡稱，是 一款用于構(gòu)建進(jìn)化樹 （ 系統(tǒng)發(fā)育樹 ） 及進(jìn)行相關(guān)檢驗(yàn)的軟件，包含了眾多分子進(jìn)化模型和方法，可利用 最大似然法 、簡約法、距離法等分析分子數(shù)據(jù)（ DNA、蛋白質(zhì) 序 列）、形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)及其他類型的數(shù)據(jù) 。 5 將上述所得溶液于 60℃ 下恒溫水浴 3— 4h。 魏美才博士 完成標(biāo)本鑒定。當(dāng)序列之間的進(jìn)化速率差異很大 或替代型式不同時，同型事件出現(xiàn)的可能性就較大，這也直接限制了簡約法的應(yīng)用。 距離矩陣法（ distance matrix method）首先獲得所有分類群間的進(jìn)化距離，再基于這些距離值之間的關(guān)系構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。 線粒體基因 (mtDNA)序列 mtDNA 廣泛存在于昆蟲體內(nèi)富含線粒體的飛行肌中和卵內(nèi) ,昆蟲的 mtDNA 大小一般為 1514～ 1613 kb，以高拷貝數(shù)目存在于線粒體內(nèi)。該基因的產(chǎn)物是細(xì)胞色素氧化酶亞基 I，后者是細(xì)胞色素氧化酶的重要組成部分。這些分類依據(jù)在大多數(shù)情況下能清晰地反映一個物種的分類地位或系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系 [13]。mtDNA 主要用于 RFLP 和克隆后或 PCR 擴(kuò)增后的測序 [9—10 ]。劉曉麗在 2020 年報(bào)道了 9 種擬步甲 16S rDNA 部分序列及其親緣關(guān)系，部分?jǐn)M步甲 16S rRNA 和和 18S rRNA 基因序列與分子系統(tǒng) [1415]。 最大似然法（ maximum likelihood method， ML）對每個譜系拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，計(jì)算出可觀察到符合特定替代模式的一組特定的序列數(shù)據(jù)的最大概率（似然率），然后挑選最大似然值最高的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)（樹＼分支圖）作為重建的譜系樹。葉蜂總科內(nèi)的節(jié)點(diǎn)目前大部分還處于模糊狀態(tài)。 TBE緩沖液（ 5儲存液）：每升含 54g Tris堿， ， 20ml （ ）。 （ 2） PCR 反應(yīng)循環(huán)體系及參數(shù) PCR 反應(yīng)體系 1 為 50ul 體系，成分如下： 28S DNA 基因的 PCR 反應(yīng)的參 數(shù)： 94℃預(yù)變性 1 分鐘， 33 個循環(huán)（ 94℃變 濃度 體積 ddH2O Primer Buffer 5ul Mix dNTP 4ul Primer1 10ul/mol 2ul Primer2 10ul/mol 2ul Template 2ul Taq DNA polymer 酶 9 性 30 秒， 55℃退火 30 秒， 72℃延伸 60 秒）；最后 72℃延伸 10 分鐘。 11 圖 1所測樣品 PCR檢測結(jié)果 1 M 1 2 3 4 注： M： Marker： 200bpDNA，從下往上依次是 200bp， 400bp， 600bp， 800bp，1000bp,1200bp......圖中， 1： Arge xanthogaster； 2： Arge vulnerata； 3： Arge lingulopygia； 4： Eutomostethus formosanus。葉蜂總科中 6 個科的演化關(guān)系復(fù)雜。 6a*CZ7H$dq8Kqqf HVZFedswSyXTyamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2 zVkum amp。qYpEh5pDx2zVkumamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkum amp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwc^vR9CpbK! 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zn% Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z8vGt YM*Jgamp。 ksv*3tnGK8! z89Am UE9aQGn8xp$Ramp。 UE9aQGn8xp$Ramp。本實(shí)驗(yàn)所用的是核糖體的基因，測得的序列長度不夠長，在未來的工作中我們可以延長核酸序列的長度，使其包含更大的遺傳信息；可以加入一些編碼蛋白質(zhì)的基因，如 COⅠ和 EF1a 基因這些分子標(biāo)記，把更多的基因聯(lián)合起來分析；另外，本文僅用了NJ 一種方法構(gòu)建分子系統(tǒng)樹，還可結(jié)合 Baysain 和 ML 多種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法來綜合討論這 些類群之間的關(guān)系。 12 從以上圖 圖 2 可以看出， 28S DNA 的引物擴(kuò)增結(jié)果特異性強(qiáng)，條帶均清晰，測序長度約在 1050bp。 PCR 產(chǎn)物檢測、純化及測序 PCR 產(chǎn)物檢測 ,取 5ul 的反應(yīng)產(chǎn)物，經(jīng) %瓊脂糖凝膠電泳后 （ 57V， 小時） EB 染色 小時 ，在凝膠成像系統(tǒng)中檢測是否有目標(biāo)條帶并照相；產(chǎn)物的純化和測序均有上海博尚生物技術(shù)公司完成。提取具體步驟如下： 1 將 2%CTAB Buffer 預(yù)熱至 60℃ 。蕭剛?cè)嵯壬?1991 年總結(jié)了中國葉蜂的系統(tǒng)分類研究成果 [28]。 貝葉斯法 [16]（ Bayesain analysis）建立在 ML基礎(chǔ)上的但比 ML更為捷徑的一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，它采用了 ML法的基本原理，同時引進(jìn)了馬爾科夫鏈蒙特卡洛方法 (the Markov Chain Monthe Carloanlysis， MCMC)途徑，將運(yùn)算效率提高，大大地縮短運(yùn)算時間，最終獲得一組似然率最大樹構(gòu)成的合意樹，直接估算貝葉斯后驗(yàn)概率 (Bayesain Posterior Probabilities)。有學(xué)者認(rèn)為，由于核基因沒有線粒體基因的替代偏異特征，昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)應(yīng)該更加關(guān)注核基因數(shù)據(jù)而不是線粒體基因數(shù)據(jù)。核基因中含有更加豐富的生物學(xué)信息，用適當(dāng)?shù)暮嘶蜓芯坷ハx的系統(tǒng)發(fā)育，其結(jié)果更有可能比較真實(shí)地反映出昆蟲的進(jìn)化歷史。但隨著學(xué)科的發(fā)展也遇到了一些傳統(tǒng)方法難以解決的困難，例如，一些近緣種很難確定其分類地位，對于種群、生態(tài)型的研究更是如此。 20年來，昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)快速發(fā)展， 目前應(yīng)用核酸序列分析技術(shù)測定昆蟲特定的核苷酸序列，以比較不同昆蟲之間的演化關(guān)系，建立符合自然發(fā)育的分子系統(tǒng)譜系，是昆蟲分子系統(tǒng)發(fā)育方面的主要研究方向之一。對細(xì)胞色素 b 氨基酸組成和結(jié)構(gòu)基因的 脫氧核糖核酸 (DNA)順序研究指出 ,約 68％的氨基酸為非極性的。但是目前在實(shí)驗(yàn)技術(shù)、資料積累、數(shù)據(jù)處理分析以及序列數(shù)據(jù)的可比性等方面還有待于進(jìn)一步的完善和充實(shí)。鄰接法和轉(zhuǎn)換距離法不包括速率一致的假設(shè)，但均采用校正距離矩陣來減少各分支不同速率的影響。 葉蜂總科是廣腰亞目最大的總科，中國己記載 6 個科，分別為三節(jié)葉蜂科Argidae，葉蜂科 Tenthredinidae，松葉蜂科 Diprionidae，錘角葉蜂科 Cimbicidae，筒腹葉蜂科 Pergidae 和茸蜂科 Blas