【正文】 進(jìn)入臨床研究。結(jié)合到腫瘤靶細(xì)胞表面的數(shù)量多，到非靶細(xì)胞的數(shù)量少；進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)的數(shù)量多，進(jìn)入非靶細(xì)胞內(nèi)的數(shù)量少。近 20 年來，中國癌癥死亡率上升了 %，癌癥死亡占城鄉(xiāng)居民總死亡構(gòu)成的 24%。但有人把 DNA 直接注射至小鼠的股四頭肌也能很好地激發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答。 在淘選過程中會(huì)出現(xiàn)高 親和力低拷貝的特異性噬菌體抗體的丟失等。1．2 人源化抗體制備技術(shù) 人源化改造主要是重構(gòu)抗體和表面重塑抗體。 另一方面，鼠 McAb 還具有免疫原性，產(chǎn)生人抗鼠抗體，既降低單抗的治療效果，又誘發(fā)變態(tài)反應(yīng)。要解決傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)所存在的問題,為單克隆抗體的應(yīng)用提供更廣闊的空間，出現(xiàn)了嵌合抗體制備技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、DNA 免疫制備抗體技術(shù)，制備單克隆抗體。 缺點(diǎn)及改進(jìn)方法SDR 移植抗體往往存在親和力和特異性降低的缺點(diǎn)。核糖體展示系統(tǒng)的抗體篩選過程與噬菌體展示系統(tǒng)的過程相類似。 技術(shù)優(yōu)點(diǎn)DNA 免疫較常規(guī)免疫產(chǎn)生的體液免疫應(yīng)答強(qiáng)而持久，因此用 DNA 免疫制備單克隆抗體和多克隆抗體可以省時(shí)省力。但是，在癌癥患者逐年上升的情況下，卻有一半患者得不到規(guī)范治療。偶聯(lián)物與相應(yīng)的游離藥物比較，一般具有更高的療效或顯示較低的毒性。在人體乳腺癌和卵巢癌常見HER2 基因擴(kuò)增而且相應(yīng)的 HER2 蛋白含量增高。（1）可變區(qū) ：重鏈（H）近氨基端 1/4 或 1/5 區(qū)域內(nèi)的氨基酸，輕鏈（L）近氨基端 1/2 區(qū)域內(nèi)的氨基酸多變稱可變區(qū)。研究發(fā)現(xiàn),美羅華與正常和惡性 B 淋巴細(xì)胞的 CD20 受體發(fā)生反應(yīng),而不與任何非造血組織和 B 細(xì)胞前體、漿細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞或干細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。濾泡型和非濾泡型低度惡性淋巴瘤有效率的不同與抗原表達(dá)水平有關(guān),濾泡型表達(dá)水平高。再次治療無效不僅與 CD20 表達(dá)丟失無關(guān),而且與宿主產(chǎn)生針對抗體的免疫反應(yīng)也無關(guān)。m 2 ,每周 1 次,2 組有效率無差異。在大劑量化療加自體造血干細(xì)胞移植的試驗(yàn)中,正在評(píng)價(jià)干細(xì)胞收集前行 CD20 陽性細(xì)胞體內(nèi)凈化,以及骨髓功能恢復(fù)后應(yīng)用美羅華行鞏固治療的價(jià)值。在推薦負(fù)荷劑量每周 250mg ,然后靜脈注射 100mg ,中位穩(wěn)態(tài)血藥濃度為 59. 7μg采用 I 期臨床研究推薦的給藥方法,8 例獲 CR ,26 例獲 PR ,有效率 15 %,中位緩解時(shí)間為 9. 1 個(gè)月,中位生存期 13 個(gè)月。在這些試驗(yàn)中與 Herceptin 相關(guān)的急性毒性見下表。（三）1721A1721A 單抗( edrecolomab [ Panorex 。189 例被隨機(jī)分為觀察組 (90 例) 或術(shù)后應(yīng)用 1721A 500mg 靜注, 然后 100mg 靜注,每月 1 次共 4 月(99 例) 。隨著單抗技術(shù)的進(jìn)步，可能存在免疫排斥反應(yīng)的鼠源性抗體產(chǎn)品逐步減少，而人源化和完全人源化抗體產(chǎn)品卻逐年增多，這反映出單抗產(chǎn)品不僅有數(shù)量的提高，而且有質(zhì)量的提升。強(qiáng)生公司早在 1999 年就收購了 Centocor，獲得了其單抗技術(shù)平臺(tái)；安進(jìn)于2022 年收購了 Immunex；禮來于 2022 年收購了 Imclone；羅氏在早期就控股基因泰克公司，在基因泰克因生物制品大獲成功后，羅氏更是斥資 468 億美金收購了基因泰克剩余的股份，不斷的并購表明單抗藥物產(chǎn)業(yè)正在吸引越來越多的投資。 在培育單抗產(chǎn)業(yè)基地方面，國內(nèi)形成了北京、上海、西安三大研發(fā)及產(chǎn)業(yè)化基地。 我國抗體藥物產(chǎn)業(yè)化的主要限制因素有三個(gè)方面：動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)、抗體大規(guī)模純化以及藥物質(zhì)量分析和質(zhì)量保證。2022 年，當(dāng)越來越多產(chǎn)品進(jìn)入到臨床研究后期及上市階段時(shí)，治療性蛋白的生產(chǎn)能力需要在現(xiàn)有基礎(chǔ)上增加 5 倍，由于生產(chǎn)廠房的建設(shè)需要 4～5 年時(shí)間，5 億美元以上的資本投入，到 2022 年時(shí)的生產(chǎn)能力最多也只能增加 倍，達(dá)到 130～140 萬升，尚無法滿足。 1987 年， “863”計(jì)劃生物技術(shù)領(lǐng)域?qū)⒖贵w導(dǎo)向藥物作為一個(gè)專題，開展了針對肝癌、肺癌、胃癌、白血病的導(dǎo)向藥物研究。 目前，我國已批準(zhǔn)的診斷性單抗有 31 個(gè)，已有 7 個(gè)治療性單抗產(chǎn)品獲準(zhǔn)在我國上市應(yīng)用。西安主要以第四軍醫(yī)大學(xué)為依托，聯(lián)合協(xié)興集團(tuán)共建國家細(xì)胞工程中試基地，在腫瘤、抗炎和抗病毒抗體藥物方面進(jìn)入了較快速的研發(fā)階段，現(xiàn)已有 3 項(xiàng)抗體藥物進(jìn)入臨床研究，其中碘［131I］美妥昔單抗注射液，現(xiàn)已完成臨床，申報(bào)新藥證書；并已完成哺乳動(dòng)物細(xì)胞 500L 無血清流加大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，形成抗體的大規(guī)模制備技術(shù)平臺(tái)，包括動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)品大規(guī)模高效培養(yǎng)技術(shù)和目標(biāo)產(chǎn)品的交聯(lián)、制備、純化、質(zhì)控和產(chǎn)業(yè)化；西安交通大學(xué)、西北大學(xué)、西北農(nóng)林科技大學(xué)、陜西力邦制藥集團(tuán)等也正在進(jìn)行此類項(xiàng)目的研發(fā)； 盡管我國在抗體藥物的研制和產(chǎn)業(yè)化方面取得了有目共睹的成績，但整體水平與西方先進(jìn)國家相比還有很大的差距。如上海單抗制藥技術(shù)有限公司，該公司的 HumyTechTM 技術(shù)平臺(tái)是以酵母為基礎(chǔ)用以高效篩選人源單抗?？贵w庫技術(shù)也被用于抗體性能改良。(2)腫瘤相關(guān)抗原，如胃癌、肝癌、大腸癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌等。但是，單克隆抗體藥物的陸續(xù)上市也引發(fā)了全球生產(chǎn)能力的不足。該項(xiàng)目的引進(jìn)將對中國人類基因研發(fā)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展產(chǎn)生巨大的影響和推動(dòng)作用。此外，公司的一個(gè)重點(diǎn)在研產(chǎn)品是噻普汀（注射用重組抗 HER2 人源化單克隆抗體），于 2022 年 7 月獲批進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，其作用靶點(diǎn)與基因泰克重磅炸彈產(chǎn)品 Herceptin(赫賽汀)的相同。在銷售類藥品前十名中，單抗類藥品占 50%，單品種銷售超過 50 億元。然而,許多其他單抗(結(jié)合和非結(jié)合) 也正在不同的臨床試驗(yàn)階段中得到驗(yàn)證。應(yīng)用放射性標(biāo)記抗體和免疫組化分析證明 1721A 可被腫瘤攝取。在近來研究的基礎(chǔ)上,建議對 Her22Pneu 表達(dá)和淋巴結(jié)均為陽性的乳腺癌輔助治療先用 ADM +CTX ,然后用 Herceptin + 紫杉醇。m 2 ,靜脈點(diǎn)滴 3h ,每 3 周 1 次。kg 1 ,然后每周給予 2mg這種抑制作用影響磷酸化及細(xì)胞增殖信號(hào)的傳導(dǎo)通道。美羅華對類巨球蛋白血癥淋巴漿細(xì)胞樣淋巴瘤( Waldenstrom’s l ike lymphoplasmacytoid lym2phoma) 的療效　與 CLL 和小 B 細(xì)胞淋巴瘤有所不同的是,這組疾病相關(guān)的 B 淋巴細(xì)胞 CD20 表達(dá)水平高。套區(qū)淋巴瘤有效率為 30 % ,大細(xì)胞淋巴瘤為 37 %。這種反應(yīng)通常在治療后 30min～2h 以后才會(huì)出現(xiàn),但也可在抗體輸注的幾分鐘內(nèi)發(fā)生。美羅華的療效,與患者年齡、LDH 水平、β2 微球蛋白水平或以前使用蒽環(huán)類藥物無關(guān)。本文介紹 2 種 1998 年底批準(zhǔn)的非放射標(biāo)記性單抗,同時(shí),第 3 種單抗在德國已經(jīng)獲批準(zhǔn),正在進(jìn)行大規(guī)模臨床試驗(yàn)。（一）免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)四肽鏈結(jié)構(gòu) 所有 Ig 的基本單位都是四條肽鏈組成的對稱結(jié)構(gòu)。有報(bào)道，抗 eGFr 單抗與長春堿衍生物的偶聯(lián)物在裸鼠體內(nèi)試驗(yàn)顯示良好的抗癌效果。免疫電鏡觀察可見單抗或單抗偶聯(lián)物能結(jié)合到細(xì)胞表面，經(jīng)過受體介導(dǎo)的內(nèi)化過程進(jìn)入細(xì)胞。目前中國每年新發(fā)病例為 220 萬，因癌癥死亡人數(shù)為 160 萬，現(xiàn)有病例 310萬。Webster 等認(rèn)為在DNA 免疫中最有效的方法和途徑是用基因槍在肌肉或皮內(nèi)免疫 DNA 包被的金顆粒。 而且對噬菌體或表達(dá)宿主的生長或功能產(chǎn)生抑制作用的抗體也難以獲得，非免疫抗體庫獲得的抗體親和力不高。因此又發(fā)展出了產(chǎn)生全人單克隆抗體的技術(shù)。單克隆抗體技術(shù)自問世以來,在臨床治療方面進(jìn)展緩慢,，主要原因是目前單克隆抗體大多是鼠源性的,而鼠源單抗應(yīng)用于人體治療時(shí)存在諸多問題:一方面，鼠源單抗與自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面 Fc 段受體親和力弱，產(chǎn)生的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用較弱，對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力較弱，人血循環(huán)中的半衰期短，它發(fā)揮細(xì)胞毒作用作用的時(shí)間較短?！蹲匀弧冯s志預(yù)測，2022 年全球銷售額前 10 名的藥物中有 6 個(gè)為抗體藥物并占據(jù)銷售額最大的前 3 位。目前重構(gòu)抗體是對鼠源性單抗人源化改造最常用、最基本的方法。 技術(shù)優(yōu)點(diǎn)核糖體展示技術(shù)的主要優(yōu)點(diǎn)是一方面能產(chǎn)生更大的抗體庫,庫容可達(dá)到1015 ,另一方面可以方便地與一些特殊的 PCR 技術(shù) ,如性別 PCR、錯(cuò)配 PCR 等結(jié)合,獲得更多的抗體遺傳多樣性,而且所表達(dá)的抗體具有正確的空間折疊構(gòu)象。DNA 肌肉注射后，被肌細(xì)胞攝取的 DNA半衰期延長，蛋白質(zhì)持續(xù)表達(dá)，并且加強(qiáng)了 B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞的記憶持久性。以醫(yī)院購藥金額計(jì)算，植物來源性抗腫瘤藥（包括紫杉醇類、替康類、泊甙類、長春堿類）仍然是份額最大的一類抗腫瘤藥，其次是抗代謝類（包括他濱類及其他核甘酸類似物類抗腫瘤藥）位居第二。曾與單抗進(jìn)行偶聯(lián)并在裸鼠進(jìn)行療效觀察的抗癌藥物有阿霉素、柔紅霉素、平陽霉素、博安霉素、絲裂霉素、新制癌菌素、氨甲蝶呤、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、順鉑以及長春堿類衍生物等?？?HER2 蛋白單抗與抗 EGFr單抗聯(lián)合使用對卵巢癌細(xì)胞的作用增強(qiáng)，顯示相加的抗增殖作用。高變區(qū)：VH 和 VL 各有 3 個(gè)區(qū)域的氨基酸組成和排列順序特別易變化，這些區(qū)域稱為高變區(qū)?？贵w與 CD20 陽性細(xì)胞結(jié)合,在補(bǔ)體和效應(yīng)細(xì)胞存在情況下發(fā)生溶細(xì)胞反應(yīng)。美羅華的主要不良反應(yīng)包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、皮疹、惡心、喉部痙攣、呼吸困難和低血壓。對美羅華耐藥很可能與缺乏依賴 CD20 受體抗凋亡效應(yīng)有關(guān),此效應(yīng)由 CD20 受體提供給細(xì)胞。美羅華對中度惡性淋巴瘤化療的效果　一項(xiàng) 31 例中度惡性淋巴瘤患者的試驗(yàn),其中 19 %為大細(xì)胞濾泡型淋巴瘤(工作分類 D) ,68 %為大細(xì)胞彌漫性淋巴瘤(工作分類 G) ,所有患者均為初治。因?yàn)?CD20 在 CLL 的淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞上表達(dá)微弱,對化療有效的 CLL 和骨髓瘤患者用美羅華行探索性鞏固治療的試驗(yàn)正在進(jìn)行。mL 1 ,中位清除半衰期為 6. 2d。在 Her22 (3 + )的患者療效為 18 % ,Her22 (2 + ) 患者有效率為 6 %( P = 0. 06) ?！D表 15 HERCEPTIN 單用或與化療聯(lián)合的毒性及不良反應(yīng)單獨(dú)使用 Herceptin 觀察到的毒性類型和發(fā)生頻率與許多單抗一樣,尤其類似于與循環(huán)細(xì)胞的抗原反應(yīng)。 Centocor ,Malvern ,PA]) 是一個(gè)鼠源 IgG2α 單抗,可與在各種腺癌和正常上皮組織中發(fā)現(xiàn)的一個(gè) 37 103 ～40 103 球蛋白發(fā)生反應(yīng)。不良反應(yīng)僅有輕微全身癥狀(如發(fā)熱和寒戰(zhàn)) 及輕～中度消化道癥狀 ( 如腹痛、惡心和腹瀉) , 371 例中 4 例(1. 1 %) 發(fā)生過敏反應(yīng)。即便存在高投入和風(fēng)險(xiǎn)大的不利因素，單抗產(chǎn)品的研發(fā)仍是未來生物制藥行業(yè)的重心，因?yàn)樗鳛樾率侄文茏屷t(yī)生們治療那些棘手的臨床疾病，以及讓制藥企業(yè)收獲高額收入和高速成長機(jī)遇。近年來，我國的單抗技術(shù)也受到越來越多的關(guān)注和重視。北京有百泰生物，上海有中信國健、張江生物、上海美恩，西安有華神集團(tuán)。（一）動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)已成為各個(gè)國家生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化的核心競爭點(diǎn)，我國動(dòng)物細(xì)胞工程行業(yè)起步晚，目前上市產(chǎn)品數(shù)量和種類少，工程細(xì)胞株表達(dá)水平低，工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模小，最大規(guī)模只有 3000L；（二）抗體下游純化成本已占 45%到 70%，高質(zhì)量純化工藝研究刻不容緩。顯而易見，對大多數(shù)生物技術(shù)公司和生物制藥公司來說要自己擁有生產(chǎn)能力是非常困難的，這些公司缺少用于投資生產(chǎn)設(shè)施的資金。經(jīng)過十幾年的努力，在實(shí)驗(yàn)室和動(dòng)物模型上評(píng)價(jià)了以鼠抗體為載體的同位素—抗體、藥物—抗體和毒素—抗體等導(dǎo)向藥物的治療作用，并逐步從實(shí)驗(yàn)室走向臨床。其中 5 個(gè)為國外進(jìn)口產(chǎn)品。主要表現(xiàn)在：(1)現(xiàn)有的產(chǎn)品開發(fā)項(xiàng)目多數(shù)原始創(chuàng)新性不夠，治療用抗體只有少數(shù)進(jìn)入臨床試驗(yàn)。上海主要是以上海生命科學(xué)院、第二軍醫(yī)大學(xué)腫瘤研究所和張江高新區(qū)的眾多抗體公司為主，在抗體的引進(jìn)、仿制、下游制備和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)方面形成了較大的合力。用抗體庫技術(shù)直接制備人源抗體，例如利用被病原微生物感染的病人外周血細(xì)胞制備噬菌體抗體庫，用特定抗原進(jìn)行篩選，獲得抗乙肝表面抗原、甲肝病毒的人源抗體。這些抗原主要有：(1)細(xì)胞表面抗原，如血型抗原、白細(xì)胞分化抗原、組織相容性抗原、膜受體等。而這些藥物所用的抗體均以人源化抗體為主，約占 39%，其次是完全人源的抗體和鼠源性抗體。 美國傲銳基因科技有限公司是美國著名的以基因?yàn)橹行牡目蒲性噭┕?是世界上少數(shù)能夠快速和準(zhǔn)確分離人體全長核糖核酸的機(jī)構(gòu)之一。目前國際上已經(jīng)應(yīng)用于預(yù)防器官。 朱錦 上海獨(dú)一味董事長兼總經(jīng)理單克隆抗體類藥物被譽(yù)為“ 生物導(dǎo)彈” ，在中國擁有巨大發(fā)展空間，增長幅度超過中藥和化學(xué)藥。本文總結(jié)了這 3 種治療性單抗在美國廣泛應(yīng)用的情況。研究顯示, 單次注射 15 ～ 1 000mg 是安全的, 但 50 %患者在單次注射后產(chǎn)生人抗鼠抗體。這樣看來,Herceptin 與紫杉類聯(lián)用時(shí)比與蒽環(huán)類聯(lián)用更安全。以前輔助治療時(shí)曾用過蒽環(huán)類藥物者被隨機(jī)分為單用單抗或抗體加紫杉醇 175mg均接受Herceptin 負(fù)荷量 4mgHercep2tin 與受體結(jié)合導(dǎo)致受體內(nèi)在化,并抑制 EGF 和Neu 分化因子與受體結(jié)合。更好的策略是尋求將該抗體用于其他方式治療有效后的維持或鞏固治療。美羅華對中度惡性淋巴瘤的療效　法國一項(xiàng) 54 例患者臨床試驗(yàn) [ 8 ] ,12 例套區(qū) (mantle zone) 淋巴瘤和30 例大細(xì)胞淋巴瘤,總有效率為 31 % ,中位緩解期大于 8 個(gè)月。h 1 。血中藥物濃度持續(xù)時(shí)間與腫瘤緩解可能性有關(guān)