【正文】 毒器械滅菌的功能鑒定試驗應(yīng)用載體定性法，試驗應(yīng)重復(fù) 5 次。 消毒產(chǎn)品鑒定測試項目的確定 （ 1）有效成分含量的測定：有效成分系指具有殺菌作用的成分。 表 11 殺滅試驗中微生物的選擇 消毒對象 微 生 物 的 種 類 金黃色葡萄球菌 綠膿 桿菌 大腸 桿菌 白色念珠菌 黑曲 霉菌 白色葡萄球菌 龜分枝桿菌膿腫亞種 枯草桿菌黑色變種芽孢 脊髓灰質(zhì)炎病毒 手 皮膚和黏膜 + + + + + + 足 + + + 空氣 + 醫(yī)療器械和用品(滅菌與高水平消毒 ) + 醫(yī)療器械和用品 (中水平消毒 ) + + + + 醫(yī)療器械和用品 (低水平消毒 ) + + + 一般物品表面 和織物 + + 食 (飲 )具 + + 飲水和游泳池水 + 瓜果、蔬菜 + 【注】表中‘ +’為必做試驗的微生物，消毒劑特指對某微生物具有殺滅作用者，則除按表中要求外，還需另選做該微生物殺滅試驗。 （ 4）安全性 試驗 包括電器安全試驗和消毒器械產(chǎn)生的化學(xué)因子的毒理學(xué) 試驗 。表格中每一欄目應(yīng)用藍(lán)黑或碳素墨水逐項填寫。 （ 2）實用劑量不低于模擬現(xiàn)場試驗或現(xiàn)場試驗所測得的結(jié)果。 滴定液的標(biāo)定及所有樣品測定均平行進(jìn)行兩次。 (1)第一階段 (急性毒性試驗、皮膚刺激試驗和黏膜刺激試驗 ) 1)急性經(jīng)口毒性試驗 2)急性吸入毒性試驗 3)皮膚刺激 試驗 4)急性眼刺激試驗 5)陰道黏膜刺激試驗 6)皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗 (2)第二階段 (亞急性毒性試驗和致突變試驗 ) 1)亞急性毒性試驗 2)致突變試驗 ① 體外哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗 (體細(xì)胞基因水平 ， 體外試驗 ) L5178Y 細(xì)胞基因突變試驗 V79 細(xì)胞基因突變試驗 ② 體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗 (體細(xì)胞染色體水平 ， 體外試驗 ) ③ 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗 (體細(xì)胞染色體 水平 ， 體內(nèi)試驗 ) ④ 哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗 (體細(xì)胞染色體水平 ， 體內(nèi)試驗 ) ⑤ 程序外 DNA 修復(fù)合成試驗 (DNA水平，體外試驗 ) ⑥ 小鼠精子畸形試驗 (性細(xì)胞基因和染色體水平，體內(nèi)試驗 ) ⑦ 睪丸生殖細(xì)胞染色體畸變試驗 (性細(xì)胞染色體水平 ， 體內(nèi)試驗 ) 小鼠精原細(xì)胞染色體畸變試驗 小鼠精母細(xì)胞染色體畸變試驗 (3)第三階段（亞慢性毒性試驗和致畸胎試驗） 1)亞慢性毒性試驗 2)致畸胎試驗 (4)第四階段（慢性毒性試驗和致癌試驗） 1)慢性毒性試驗 2)致癌試驗 各種消毒產(chǎn)品毒 理學(xué)試驗的規(guī)定 為便于對消毒劑進(jìn)行毒理學(xué)評價，將消毒劑分為三類。使用過程中，必需接觸皮膚的其它消毒劑，也應(yīng)增做完整皮膚刺激試驗。 （ 2）高水平消毒法：可以殺滅各種微生物，對細(xì)菌芽孢殺滅達(dá)到消毒效果的方法。 （ 4）親水病毒（ 沒有脂質(zhì)包膜的病毒），例如甲型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等。 （ 4）根據(jù)消毒物品的性質(zhì)選擇消毒方法 選擇消毒方法時需考慮，一是要保護(hù)消毒物品不受損壞，二是使消毒方法易于發(fā)揮作用。 （ 4）各類傳染病 (包括非法定傳染病 )爆發(fā)流行時應(yīng)在當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督機構(gòu)的監(jiān)督指導(dǎo)下，由有關(guān)單位及時進(jìn)行消毒，或由當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督負(fù)責(zé)對其進(jìn)行消毒處理。 5)不明傳染病疫源地的消毒：應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)指征確定消毒范圍和對象，采取最嚴(yán)格的消毒方法進(jìn)行處理。 6)測量房屋、家具及地面需消毒的面積和體積，估算需消毒的污水量。 17)填寫疫點終末消毒工作記錄。按此方法進(jìn)行的試驗，只是對消毒劑的殺菌能力的重要方面進(jìn)行驗證，側(cè)重反映消毒劑的實用劑量與殺菌能力。 （ 13）離心機。 2）用 吸管吸取 ml～ 第 3代～ 5代的 18h～ 24h 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，接種于羅氏瓶中營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面，將其搖動使菌液布滿營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的表面，再將多余肉湯培養(yǎng)物吸出， 將羅氏瓶 置于 37℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 5d～ 7d。 6）用無菌棉花或紗布過濾芽孢懸液，清除其中的瓊脂凝塊。脫脂方法如下： ① 將載體放在含 洗滌劑 的水中煮沸 30 min； ② 以自來水洗凈； ③ 用蒸餾水煮沸 10min； ④ 用蒸餾水漂洗至 pH 呈中性； ⑤ 晾干 、 熨平備用。 （ 2）滴染時，菌液滴加量不宜過多，避免流散影響染菌的準(zhǔn)確性。而后，用電動混合器混合 20s（或在手掌上用力振敲 80 次），將菌洗下形成菌懸液。培養(yǎng)至規(guī)定時間（細(xì)菌繁殖體為 48h，白色念珠菌與細(xì)菌芽孢為 72h），計數(shù)最終結(jié)果的菌落數(shù)。 （ 7）傾注時瓊脂培養(yǎng)基溫度不得超過 45℃ ，以防損傷細(xì)菌或真菌。 操作要點： ① 對接觸消毒劑的微生物樣本，在達(dá) 到規(guī)定作用時間，即刻取樣移入鑒定合格的中和劑溶液中； ② 所用中和劑的濃度與容量應(yīng)與鑒定試驗結(jié)果規(guī)定的相同； ③ 即刻混勻，并按規(guī)定時間吸取樣液進(jìn)行隨后的培養(yǎng)檢測； ④ 在將樣本接種培 養(yǎng)基以前的操作，應(yīng)按規(guī)定時間內(nèi)進(jìn)行，以免微生物與中和劑或中和產(chǎn)物接觸過久。故每進(jìn)行一種消毒試驗（包括消毒劑或微生物的更換），均需按規(guī)定對所選方法進(jìn)行鑒定試驗，合格者方可用于正式試驗。若縮短作用時間后仍無菌生長，在排除其他原因的基礎(chǔ)上，可適當(dāng)下調(diào)殺菌試驗中消毒 劑 濃度，再次進(jìn)行中和劑鑒定試驗。 第 5組 稀釋液 + 菌懸液 → 培養(yǎng) 作為菌數(shù)對照。作用至預(yù)定時間，吸此樣液 加于含 中和劑溶液管中，混勻，作用 10min。 （ 6）第 6 組。 （ 3）第 3 組。分別吸取稀釋液與中和劑各 ，倒入上述試驗同批次的培養(yǎng)基 15ml～ 20ml，培養(yǎng)觀察。1℃ 水浴中 5min 后， 用無菌鑷子夾入 1 菌片，并使浸透于稀釋液中。吸取消毒劑 于無菌小平皿內(nèi)，將其置 20℃ 177。 （ 5）第 5組。吸取該最終樣液 ，接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。 試驗分組 第 1組 消毒劑 + 菌懸液 → 培養(yǎng) 觀察消毒劑對試驗菌有無殺滅或抑制能力。濃度過低，則不足 — 22— 以顯示能否將高濃度消毒 劑 全部中和。 （ 2）每次吸液，均須更換一支無菌吸管，以 防交叉污染。 除藥的方法 （ 1）化學(xué)中和法：又稱中和劑法，是指在消毒劑與微生物作用到達(dá)規(guī)定時間的終點時，取樣加于適宜種類和濃度的中和劑中，將殘留消毒劑迅速中和，使其不再持續(xù)抑制或殺滅微生物的方法。 （ 3）注意菌液的均勻分散。 （ 6） 將冷 至 40℃ ～ 45℃ 的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，傾 注于已加入樣液的平皿中，每平皿15ml～ 20ml。 （ 1）對菌懸液可直接進(jìn)行培養(yǎng)計數(shù)。滴染菌液后，染菌載體可置 37℃ 溫箱內(nèi)干 燥 （約 20min～ 30min），或置室溫下自然陰干后再使用。根據(jù)其特點選擇適宜材料載體作為代表。 4）羅氏瓶培養(yǎng)物，用 吸管加 無菌蒸餾水于每一羅氏瓶中，以 L棒輕輕推刮下菌苔。 （ 2）細(xì)菌芽孢懸液的制備 1）取凍干菌種管，在無菌操作下打開，以毛細(xì)吸管吸加適量營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，輕柔吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。 （ 9）恒溫水浴箱。 6)攜回的污染衣物應(yīng)立即分類作最終消毒。 15)疫點消毒工作完畢，對消毒人員穿著的工作服、膠靴等進(jìn)行噴灑消毒后脫下。用過氧乙酸或含氯制劑時，須戴防護(hù)眼鏡。 2)消毒持續(xù)時間：以傳染病流行情況和病原體監(jiān)測結(jié)果為依據(jù)確定消毒 的持續(xù)時間。 (5) 處理銳利器械和用具應(yīng)采取有效防護(hù)措施，以避免可能對人體的刺、割等傷害。 2）對 受到真菌、親水病毒、螺旋體、支原體、衣原體和病原微生物污染的物品，選用中水平以上的消毒方法。例如，毛巾、面盆、痰盂（杯）、地面、便器、餐具、茶具、墻面、桌面、床面、被褥、一般診斷用品 (聽診器、聽筒、血壓計袖帶等 )等。 3）在皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗時，采用的誘導(dǎo)濃度應(yīng)為引起皮膚刺激反應(yīng)的最低濃度或原液，激發(fā)濃度應(yīng)為不引起皮膚刺激反應(yīng)的最高濃度或原液。視其試驗結(jié)果，判定是否需做其它試驗項目。如果無法提供空白樣品，可用加入標(biāo)準(zhǔn)量法進(jìn)行方法可靠性的論證。 本規(guī)范中，“滴定液”是指經(jīng)過標(biāo)定 ， 濃度準(zhǔn)確至 mol/L～ mol/L 的溶液。 — 8— 實用劑量的要求 日常消毒與滅菌中影響殺菌效果的因素較多，而實驗室試驗所規(guī)定的條件，均應(yīng)控制在一個固定的范圍之內(nèi)，因此，需根據(jù)多種試驗結(jié)果和實踐經(jīng)驗確定。如試驗組距設(shè)置 ， 消毒劑 (器械 )濃度 (強度 )測定和計算 ， 實驗條件 (溫度、濕度、 pH值等 )是否符合規(guī)定 ， 特別要注意中和劑的選擇試驗是否符合要求等。 （ 2）金屬腐蝕性試驗 主要檢測殺菌器械所產(chǎn)生化學(xué)殺菌因子對金屬的腐蝕性。 在上述規(guī)定的菌 、毒株的 基礎(chǔ)上，根據(jù)消毒劑特定用途或試驗特殊需要，還可增選其他菌 、毒 株。 （ 6）在對消毒劑進(jìn)行監(jiān)督監(jiān)測時 ， 定量殺菌試驗的消毒劑濃度和作用時間選擇消毒對象中抗力最強的微生物 ， 以說明書規(guī)定的最低濃度和最短時間驗證其消毒效果。 （ 2）消毒器械，送檢單位應(yīng)送檢 3件樣品，大型器械可送檢 1 件樣品，標(biāo)識應(yīng)與擬銷售產(chǎn)品完全相同。 預(yù)防性消毒 preventive disinfection 對可能受到病原微生物污染的物品和場所進(jìn)行的消毒。（有效碘及有效溴的定義和表示法與有效氯對應(yīng)）。 適用范圍 本規(guī)范適用于在中華人民共和國境內(nèi)生產(chǎn)、經(jīng)營、使用和檢驗消毒產(chǎn)品的組織，醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)以及傳染病疫源地和其他一切需要消毒的場所。 存活時間 survival time， ST 用于生物指示物抗力鑒定時 ， 指受試指示物樣本，經(jīng)殺菌因子作用后全部樣本有菌生長的最長作用時間 (min)。 人員衛(wèi)生處理 personnel decontamination 對污染或可能被污染人員進(jìn)行人體、著裝、隨身物品等的消毒與清洗等除污染處理。在無特殊要求的情況下 ， 一般以不銹鋼圓片為載體。所有化學(xué)消毒劑均應(yīng)進(jìn)行本項檢測。 （ 6）模擬現(xiàn)場試驗與現(xiàn)場試驗：根據(jù)不同消毒對象按如下要求選 擇模擬現(xiàn)場或現(xiàn)場試驗 : 用于、空氣消毒的消毒劑須進(jìn)行現(xiàn)場試驗。 （ 5）模擬現(xiàn)場 和 現(xiàn)場試驗 用于消毒及滅菌的器械均須進(jìn)行模擬現(xiàn)場試驗。一次試驗填寫一份表格。 （ 3）實用劑量應(yīng)對人體和環(huán)境無危害 ， 對物品無損害。將滴定管中滴定液補足至全量后滴定 。 (1)第一類消毒劑：指我國首創(chuàng)或根據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報道首次生產(chǎn)的消毒劑。根據(jù)消毒劑的成分 ，估計可能有致敏作用者，還需增做皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗 。這類消毒方法應(yīng)能殺滅一切細(xì)菌繁殖體（包括結(jié)核分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢。 （ 5）分枝桿菌，例如結(jié)核分枝桿菌、龜分枝桿菌等。應(yīng)遵循以下基本原則： 1）耐高溫、耐濕度的物品和器材，應(yīng)首選 壓力蒸汽滅菌；耐高溫的玻璃器材、油劑類和干粉類等可選用干熱滅菌。 （ 5）在醫(yī)院中對傳染病病 人的終末消毒由醫(yī)院安排專人進(jìn)行。 6)注意與其它傳染病控制措施配合：搞好傳染源的管理，疫區(qū)的封鎖、隔離，殺蠅、防蠅 ，滅鼠、防鼠，滅蚤，搞好飲用水、污水、食品的消毒及衛(wèi)生管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生。 7)必要時，由檢驗人員對不同消毒對象進(jìn)行消毒前采樣。 18)離開病家前，讓病家開窗通風(fēng)，擦拭打掃。不能反映消毒劑的全面特性。 （ 14）電動混合器 （ 15）濁度計。 3）用接種環(huán)取菌樣少許涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在顯微鏡（油鏡）下進(jìn)行鏡檢。 7）將過濾后的芽孢懸液，置無菌離心管內(nèi)，以 3000 r/min 速度離心 30min。 （ 3）布片用白平紋棉布制作。 （ 3） 細(xì)菌繁殖體在烤干過程中，可引起部分死亡，如銅綠假單胞菌在 37℃ 干 燥 過程中，滴度最高可下降 1個對數(shù)值。以上操作應(yīng)嚴(yán)格按無菌要求進(jìn)行。 （ 9）對菌片和采樣棉拭 洗液的活菌培養(yǎng)計數(shù)，先按各試驗要求處理（如去除殘留消毒劑等），而后取其最終樣液按上法進(jìn)行培養(yǎng)計數(shù)。傾注和搖動時，動作應(yīng)盡量平穩(wěn)，以利細(xì)菌分散均勻，便于計數(shù)菌落。 （ 2）過濾沖洗法 將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，立即加入適量稀釋液中混勻（通過適量稀釋，可減輕消毒劑的持續(xù)作用），并傾入裝有微孔濾膜的濾器內(nèi)，接真空泵抽吸過濾（或加壓過濾）后，再加適量稀釋液沖洗，同時過濾，可去除殘留的消毒劑。此步驟絕不可省略 ，否則極有可能導(dǎo)致試驗產(chǎn)生錯誤結(jié)果。 （ 5）同一消毒劑擬對多種微生物進(jìn)行殺滅試驗時，應(yīng)按微生物種類分別進(jìn)行鑒定試驗 。 第 6組 稀釋液 + 中和劑 + 培養(yǎng)基 → 培養(yǎng) 作為陰性對照。吸取該最終樣液 ，接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。分別吸取稀釋液 、 中和劑 和硬水 各 ，倒入上述試驗同批次的培養(yǎng)基 25ml，培養(yǎng)觀察。吸取中和劑 于無菌小平皿中，將其置 20℃ 177。如出現(xiàn)細(xì)菌生長，提示試驗材料或操作過程中可能有污染