【正文】 毒器械滅菌的功能鑒定試驗(yàn)應(yīng)用載體定性法，試驗(yàn)應(yīng)重復(fù) 5 次。 消毒產(chǎn)品鑒定測(cè)試項(xiàng)目的確定 （ 1）有效成分含量的測(cè)定：有效成分系指具有殺菌作用的成分。 表 11 殺滅試驗(yàn)中微生物的選擇 消毒對(duì)象 微 生 物 的 種 類 金黃色葡萄球菌 綠膿 桿菌 大腸 桿菌 白色念珠菌 黑曲 霉菌 白色葡萄球菌 龜分枝桿菌膿腫亞種 枯草桿菌黑色變種芽孢 脊髓灰質(zhì)炎病毒 手 皮膚和黏膜 + + + + + + 足 + + + 空氣 + 醫(yī)療器械和用品(滅菌與高水平消毒 ) + 醫(yī)療器械和用品 (中水平消毒 ) + + + + 醫(yī)療器械和用品 (低水平消毒 ) + + + 一般物品表面 和織物 + + 食 (飲 )具 + + 飲水和游泳池水 + 瓜果、蔬菜 + 【注】表中‘ +’為必做試驗(yàn)的微生物，消毒劑特指對(duì)某微生物具有殺滅作用者，則除按表中要求外，還需另選做該微生物殺滅試驗(yàn)。 （ 4）安全性 試驗(yàn) 包括電器安全試驗(yàn)和消毒器械產(chǎn)生的化學(xué)因子的毒理學(xué) 試驗(yàn) 。表格中每一欄目應(yīng)用藍(lán)黑或碳素墨水逐項(xiàng)填寫(xiě)。 （ 2）實(shí)用劑量不低于模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)或現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)所測(cè)得的結(jié)果。 滴定液的標(biāo)定及所有樣品測(cè)定均平行進(jìn)行兩次。 (1)第一階段 (急性毒性試驗(yàn)、皮膚刺激試驗(yàn)和黏膜刺激試驗(yàn) ) 1)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 2)急性吸入毒性試驗(yàn) 3)皮膚刺激 試驗(yàn) 4)急性眼刺激試驗(yàn) 5)陰道黏膜刺激試驗(yàn) 6)皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn) (2)第二階段 (亞急性毒性試驗(yàn)和致突變?cè)囼?yàn) ) 1)亞急性毒性試驗(yàn) 2)致突變?cè)囼?yàn) ① 體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn) (體細(xì)胞基因水平 ， 體外試驗(yàn) ) L5178Y 細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn) V79 細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn) ② 體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) (體細(xì)胞染色體水平 ， 體外試驗(yàn) ) ③ 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn) (體細(xì)胞染色體 水平 ， 體內(nèi)試驗(yàn) ) ④ 哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) (體細(xì)胞染色體水平 ， 體內(nèi)試驗(yàn) ) ⑤ 程序外 DNA 修復(fù)合成試驗(yàn) (DNA水平，體外試驗(yàn) ) ⑥ 小鼠精子畸形試驗(yàn) (性細(xì)胞基因和染色體水平，體內(nèi)試驗(yàn) ) ⑦ 睪丸生殖細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) (性細(xì)胞染色體水平 ， 體內(nèi)試驗(yàn) ) 小鼠精原細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) 小鼠精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) (3)第三階段（亞慢性毒性試驗(yàn)和致畸胎試驗(yàn)） 1)亞慢性毒性試驗(yàn) 2)致畸胎試驗(yàn) (4)第四階段（慢性毒性試驗(yàn)和致癌試驗(yàn)） 1)慢性毒性試驗(yàn) 2)致癌試驗(yàn) 各種消毒產(chǎn)品毒 理學(xué)試驗(yàn)的規(guī)定 為便于對(duì)消毒劑進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)價(jià)，將消毒劑分為三類。使用過(guò)程中，必需接觸皮膚的其它消毒劑，也應(yīng)增做完整皮膚刺激試驗(yàn)。 （ 2）高水平消毒法：可以殺滅各種微生物，對(duì)細(xì)菌芽孢殺滅達(dá)到消毒效果的方法。 （ 4）親水病毒（ 沒(méi)有脂質(zhì)包膜的病毒），例如甲型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等。 （ 4）根據(jù)消毒物品的性質(zhì)選擇消毒方法 選擇消毒方法時(shí)需考慮，一是要保護(hù)消毒物品不受損壞，二是使消毒方法易于發(fā)揮作用。 （ 4）各類傳染病 (包括非法定傳染病 )爆發(fā)流行時(shí)應(yīng)在當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督機(jī)構(gòu)的監(jiān)督指導(dǎo)下，由有關(guān)單位及時(shí)進(jìn)行消毒，或由當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督負(fù)責(zé)對(duì)其進(jìn)行消毒處理。 5)不明傳染病疫源地的消毒：應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)指征確定消毒范圍和對(duì)象，采取最嚴(yán)格的消毒方法進(jìn)行處理。 6)測(cè)量房屋、家具及地面需消毒的面積和體積，估算需消毒的污水量。 17)填寫(xiě)疫點(diǎn)終末消毒工作記錄。按此方法進(jìn)行的試驗(yàn)，只是對(duì)消毒劑的殺菌能力的重要方面進(jìn)行驗(yàn)證，側(cè)重反映消毒劑的實(shí)用劑量與殺菌能力。 （ 13）離心機(jī)。 2）用 吸管吸取 ml～ 第 3代～ 5代的 18h～ 24h 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，接種于羅氏瓶中營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面，將其搖動(dòng)使菌液布滿營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的表面，再將多余肉湯培養(yǎng)物吸出， 將羅氏瓶 置于 37℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 5d～ 7d。 6）用無(wú)菌棉花或紗布過(guò)濾芽孢懸液，清除其中的瓊脂凝塊。脫脂方法如下： ① 將載體放在含 洗滌劑 的水中煮沸 30 min； ② 以自來(lái)水洗凈； ③ 用蒸餾水煮沸 10min； ④ 用蒸餾水漂洗至 pH 呈中性； ⑤ 晾干 、 熨平備用。 （ 2）滴染時(shí)，菌液滴加量不宜過(guò)多，避免流散影響染菌的準(zhǔn)確性。而后，用電動(dòng)混合器混合 20s（或在手掌上用力振敲 80 次），將菌洗下形成菌懸液。培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間（細(xì)菌繁殖體為 48h，白色念珠菌與細(xì)菌芽孢為 72h），計(jì)數(shù)最終結(jié)果的菌落數(shù)。 （ 7）傾注時(shí)瓊脂培養(yǎng)基溫度不得超過(guò) 45℃ ，以防損傷細(xì)菌或真菌。 操作要點(diǎn)： ① 對(duì)接觸消毒劑的微生物樣本，在達(dá) 到規(guī)定作用時(shí)間，即刻取樣移入鑒定合格的中和劑溶液中； ② 所用中和劑的濃度與容量應(yīng)與鑒定試驗(yàn)結(jié)果規(guī)定的相同； ③ 即刻混勻，并按規(guī)定時(shí)間吸取樣液進(jìn)行隨后的培養(yǎng)檢測(cè)； ④ 在將樣本接種培 養(yǎng)基以前的操作，應(yīng)按規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，以免微生物與中和劑或中和產(chǎn)物接觸過(guò)久。故每進(jìn)行一種消毒試驗(yàn)（包括消毒劑或微生物的更換），均需按規(guī)定對(duì)所選方法進(jìn)行鑒定試驗(yàn)，合格者方可用于正式試驗(yàn)。若縮短作用時(shí)間后仍無(wú)菌生長(zhǎng)，在排除其他原因的基礎(chǔ)上，可適當(dāng)下調(diào)殺菌試驗(yàn)中消毒 劑 濃度，再次進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)。 第 5組 稀釋液 + 菌懸液 → 培養(yǎng) 作為菌數(shù)對(duì)照。作用至預(yù)定時(shí)間，吸此樣液 加于含 中和劑溶液管中，混勻，作用 10min。 （ 6）第 6 組。 （ 3）第 3 組。分別吸取稀釋液與中和劑各 ，倒入上述試驗(yàn)同批次的培養(yǎng)基 15ml～ 20ml，培養(yǎng)觀察。1℃ 水浴中 5min 后， 用無(wú)菌鑷子夾入 1 菌片，并使浸透于稀釋液中。吸取消毒劑 于無(wú)菌小平皿內(nèi)，將其置 20℃ 177。 （ 5）第 5組。吸取該最終樣液 ，接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 試驗(yàn)分組 第 1組 消毒劑 + 菌懸液 → 培養(yǎng) 觀察消毒劑對(duì)試驗(yàn)菌有無(wú)殺滅或抑制能力。濃度過(guò)低，則不足 — 22— 以顯示能否將高濃度消毒 劑 全部中和。 （ 2）每次吸液，均須更換一支無(wú)菌吸管，以 防交叉污染。 除藥的方法 （ 1）化學(xué)中和法：又稱中和劑法，是指在消毒劑與微生物作用到達(dá)規(guī)定時(shí)間的終點(diǎn)時(shí)，取樣加于適宜種類和濃度的中和劑中，將殘留消毒劑迅速中和，使其不再持續(xù)抑制或殺滅微生物的方法。 （ 3）注意菌液的均勻分散。 （ 6） 將冷 至 40℃ ～ 45℃ 的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，傾 注于已加入樣液的平皿中，每平皿15ml～ 20ml。 （ 1）對(duì)菌懸液可直接進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。滴染菌液后，染菌載體可置 37℃ 溫箱內(nèi)干 燥 （約 20min～ 30min），或置室溫下自然陰干后再使用。根據(jù)其特點(diǎn)選擇適宜材料載體作為代表。 4）羅氏瓶培養(yǎng)物，用 吸管加 無(wú)菌蒸餾水于每一羅氏瓶中，以 L棒輕輕推刮下菌苔。 （ 2）細(xì)菌芽孢懸液的制備 1）取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開(kāi)，以毛細(xì)吸管吸加適量營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，輕柔吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。 （ 9）恒溫水浴箱。 6)攜回的污染衣物應(yīng)立即分類作最終消毒。 15)疫點(diǎn)消毒工作完畢，對(duì)消毒人員穿著的工作服、膠靴等進(jìn)行噴灑消毒后脫下。用過(guò)氧乙酸或含氯制劑時(shí)，須戴防護(hù)眼鏡。 2)消毒持續(xù)時(shí)間：以傳染病流行情況和病原體監(jiān)測(cè)結(jié)果為依據(jù)確定消毒 的持續(xù)時(shí)間。 (5) 處理銳利器械和用具應(yīng)采取有效防護(hù)措施，以避免可能對(duì)人體的刺、割等傷害。 2）對(duì) 受到真菌、親水病毒、螺旋體、支原體、衣原體和病原微生物污染的物品，選用中水平以上的消毒方法。例如，毛巾、面盆、痰盂（杯）、地面、便器、餐具、茶具、墻面、桌面、床面、被褥、一般診斷用品 (聽(tīng)診器、聽(tīng)筒、血壓計(jì)袖帶等 )等。 3）在皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)時(shí)，采用的誘導(dǎo)濃度應(yīng)為引起皮膚刺激反應(yīng)的最低濃度或原液，激發(fā)濃度應(yīng)為不引起皮膚刺激反應(yīng)的最高濃度或原液。視其試驗(yàn)結(jié)果，判定是否需做其它試驗(yàn)項(xiàng)目。如果無(wú)法提供空白樣品，可用加入標(biāo)準(zhǔn)量法進(jìn)行方法可靠性的論證。 本規(guī)范中，“滴定液”是指經(jīng)過(guò)標(biāo)定 ， 濃度準(zhǔn)確至 mol/L～ mol/L 的溶液。 — 8— 實(shí)用劑量的要求 日常消毒與滅菌中影響殺菌效果的因素較多，而實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)所規(guī)定的條件，均應(yīng)控制在一個(gè)固定的范圍之內(nèi)，因此，需根據(jù)多種試驗(yàn)結(jié)果和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)確定。如試驗(yàn)組距設(shè)置 ， 消毒劑 (器械 )濃度 (強(qiáng)度 )測(cè)定和計(jì)算 ， 實(shí)驗(yàn)條件 (溫度、濕度、 pH值等 )是否符合規(guī)定 ， 特別要注意中和劑的選擇試驗(yàn)是否符合要求等。 （ 2）金屬腐蝕性試驗(yàn) 主要檢測(cè)殺菌器械所產(chǎn)生化學(xué)殺菌因子對(duì)金屬的腐蝕性。 在上述規(guī)定的菌 、毒株的 基礎(chǔ)上，根據(jù)消毒劑特定用途或試驗(yàn)特殊需要，還可增選其他菌 、毒 株。 （ 6）在對(duì)消毒劑進(jìn)行監(jiān)督監(jiān)測(cè)時(shí) ， 定量殺菌試驗(yàn)的消毒劑濃度和作用時(shí)間選擇消毒對(duì)象中抗力最強(qiáng)的微生物 ， 以說(shuō)明書(shū)規(guī)定的最低濃度和最短時(shí)間驗(yàn)證其消毒效果。 （ 2）消毒器械，送檢單位應(yīng)送檢 3件樣品，大型器械可送檢 1 件樣品，標(biāo)識(shí)應(yīng)與擬銷售產(chǎn)品完全相同。 預(yù)防性消毒 preventive disinfection 對(duì)可能受到病原微生物污染的物品和場(chǎng)所進(jìn)行的消毒。（有效碘及有效溴的定義和表示法與有效氯對(duì)應(yīng)）。 適用范圍 本規(guī)范適用于在中華人民共和國(guó)境內(nèi)生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、使用和檢驗(yàn)消毒產(chǎn)品的組織，醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)以及傳染病疫源地和其他一切需要消毒的場(chǎng)所。 存活時(shí)間 survival time， ST 用于生物指示物抗力鑒定時(shí) ， 指受試指示物樣本，經(jīng)殺菌因子作用后全部樣本有菌生長(zhǎng)的最長(zhǎng)作用時(shí)間 (min)。 人員衛(wèi)生處理 personnel decontamination 對(duì)污染或可能被污染人員進(jìn)行人體、著裝、隨身物品等的消毒與清洗等除污染處理。在無(wú)特殊要求的情況下 ， 一般以不銹鋼圓片為載體。所有化學(xué)消毒劑均應(yīng)進(jìn)行本項(xiàng)檢測(cè)。 （ 6）模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)與現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)：根據(jù)不同消毒對(duì)象按如下要求選 擇模擬現(xiàn)場(chǎng)或現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn) : 用于、空氣消毒的消毒劑須進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。 （ 5）模擬現(xiàn)場(chǎng) 和 現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn) 用于消毒及滅菌的器械均須進(jìn)行模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。一次試驗(yàn)填寫(xiě)一份表格。 （ 3）實(shí)用劑量應(yīng)對(duì)人體和環(huán)境無(wú)危害 ， 對(duì)物品無(wú)損害。將滴定管中滴定液補(bǔ)足至全量后滴定 。 (1)第一類消毒劑：指我國(guó)首創(chuàng)或根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道首次生產(chǎn)的消毒劑。根據(jù)消毒劑的成分 ，估計(jì)可能有致敏作用者，還需增做皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn) 。這類消毒方法應(yīng)能殺滅一切細(xì)菌繁殖體（包括結(jié)核分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢。 （ 5）分枝桿菌，例如結(jié)核分枝桿菌、龜分枝桿菌等。應(yīng)遵循以下基本原則： 1）耐高溫、耐濕度的物品和器材，應(yīng)首選 壓力蒸汽滅菌；耐高溫的玻璃器材、油劑類和干粉類等可選用干熱滅菌。 （ 5）在醫(yī)院中對(duì)傳染病病 人的終末消毒由醫(yī)院安排專人進(jìn)行。 6)注意與其它傳染病控制措施配合：搞好傳染源的管理，疫區(qū)的封鎖、隔離，殺蠅、防蠅 ，滅鼠、防鼠，滅蚤，搞好飲用水、污水、食品的消毒及衛(wèi)生管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生。 7)必要時(shí)，由檢驗(yàn)人員對(duì)不同消毒對(duì)象進(jìn)行消毒前采樣。 18)離開(kāi)病家前，讓病家開(kāi)窗通風(fēng)，擦拭打掃。不能反映消毒劑的全面特性。 （ 14）電動(dòng)混合器 （ 15）濁度計(jì)。 3）用接種環(huán)取菌樣少許涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在顯微鏡（油鏡）下進(jìn)行鏡檢。 7）將過(guò)濾后的芽孢懸液，置無(wú)菌離心管內(nèi)，以 3000 r/min 速度離心 30min。 （ 3）布片用白平紋棉布制作。 （ 3） 細(xì)菌繁殖體在烤干過(guò)程中，可引起部分死亡，如銅綠假單胞菌在 37℃ 干 燥 過(guò)程中，滴度最高可下降 1個(gè)對(duì)數(shù)值。以上操作應(yīng)嚴(yán)格按無(wú)菌要求進(jìn)行。 （ 9）對(duì)菌片和采樣棉拭 洗液的活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，先按各試驗(yàn)要求處理（如去除殘留消毒劑等），而后取其最終樣液按上法進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。傾注和搖動(dòng)時(shí)，動(dòng)作應(yīng)盡量平穩(wěn)，以利細(xì)菌分散均勻，便于計(jì)數(shù)菌落。 （ 2）過(guò)濾沖洗法 將經(jīng)消毒劑作用過(guò)的微生物樣本，立即加入適量稀釋液中混勻（通過(guò)適量稀釋，可減輕消毒劑的持續(xù)作用），并傾入裝有微孔濾膜的濾器內(nèi)，接真空泵抽吸過(guò)濾（或加壓過(guò)濾）后，再加適量稀釋液沖洗，同時(shí)過(guò)濾，可去除殘留的消毒劑。此步驟絕不可省略 ，否則極有可能導(dǎo)致試驗(yàn)產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。 （ 5）同一消毒劑擬對(duì)多種微生物進(jìn)行殺滅試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)按微生物種類分別進(jìn)行鑒定試驗(yàn) 。 第 6組 稀釋液 + 中和劑 + 培養(yǎng)基 → 培養(yǎng) 作為陰性對(duì)照。吸取該最終樣液 ，接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。分別吸取稀釋液 、 中和劑 和硬水 各 ，倒入上述試驗(yàn)同批次的培養(yǎng)基 25ml，培養(yǎng)觀察。吸取中和劑 于無(wú)菌小平皿中，將其置 20℃ 177。如出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)，提示試驗(yàn)材料或操作過(guò)程中可能有污染