【正文】 ?→ ? * n→?* n→ ? * College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 27 3. n→ ?*躍遷 特點： → ?*所需能量小 (10～ 100 ) 鍵類型：連有雜原子（ N、 S、 P、 O） 的 不飽和鍵 范圍：醛、酮等 能量 成鍵 成鍵 未成鍵 反鍵 反鍵 ? ? n ?* ?* ?→?* ?→ ? * n→?* n→ ? * College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 28 4. n→ ?*躍遷 鍵類型：含雜原子（ N、 S、 P、 O） 飽和鍵 一般雜原子電負性越大， n電子被束縛得越緊，躍遷所需的能量越大，吸收的波長越短，如 CH3Cl為173nm ， CH3Br為 204nm， CH3I為 258nm。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 37 增強效應：吸收強度增強的現(xiàn)象； 減弱效應：吸收強度減弱的現(xiàn)象。 3. ? － ?* 躍遷 配體具有雙鍵的金屬絡合物 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 45 一、郎伯 比爾（ LambertBeer ） 定律 rta IIII ???0入射光強度 吸光強度 反光強度 透光強度 ＋ IS 散射光強度 均勻溶液，散射光小，可忽略 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 46 參比溶液： ，抵消池的反射光（ 10％） 。且 E1 與 E2越接近，誤差越小 單色光越純越好；一般使用靈敏度最大的吸收波長作為測定波長。其特點是：色散波長范圍寬，分辨率高，色散率基本上不隨波長改變而改變。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 67 最佳吸光度范圍 ～ (T％為 65～ 20％ ) ( ， College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 68 二、反應條件選擇 顯色劑與待測離子生成配合物組成恒定、穩(wěn)定性好、吸收能力強，即 ε 大、顯色劑與配合物的吸收波長有明顯的差別，一般要求 Δ ε ＞ 60nm。 [4] “Organic Electronic Spectral Data”， John Wiley and Sons， 1946～ （目前還在繼續(xù)編寫）。 第三份為已知 pH值的緩沖溶液，分別在堿性和酸性體的最大吸收波長處測定總吸光度，解聯(lián)立方程求得 [L][HL]，然后按前式求出 Ka。同樣可得到二階、三階 n階導數(shù)信號亦與濃度成正比。 如果仍有干擾，則可采取下列方式： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 72 例雙硫腙能與 Hg2+、 Pb2+、 Cu2+、 Ni2+、 Cd2+等形成有色配合物，其中與 Hg2+生成的配合物最穩(wěn)定，而上述其他離子在此條件下不發(fā)生反應。 吸光度校正 可用 K2CrO4標準溶液來校正吸光度標度。 : 160～ 375nm，用于紫外光區(qū)。 L1, 分子或離子間平均距離縮小 ，其電子云或電荷分布相互影響 ， 分子軌道能級之差發(fā)生變化 ， 從而改變最大吸收波長光的吸收能力 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 43 2. 電荷遷移躍遷 在金屬配合物中，配體和金屬之間發(fā)生躍遷，一般是 L→M ， 吸收波長取決于 L給電子和 M接受電子能力。 由于 n— π 共軛參與，使分子整體共軛效應增強。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長的重要依據(jù)。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 17 ?物質(zhì)不同顏色是對光的選擇性吸收 不同物質(zhì)的分子組成和結構不同， E不同， △ E也不同。 作用粒子：原子光譜法 分子光譜法和核磁共振波譜法 吸收和發(fā)射光： 吸收光譜和發(fā)射光譜 光的能量： ?射線光譜法、 x射線光譜法、 紫外可見光譜法、紅外光譜法 等 分 類 引言 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 3 紫外可見分光光度法 定義：（又稱：紫外可見吸收光譜法）是根據(jù)溶液中物質(zhì)的分子或離子對紫外 —— 可見光譜區(qū)的輻射能的吸收來研究物質(zhì)的組成和結構的方法。 白光 紅 650～ 750 紫 400～ 450 藍 450～ 480 綠藍 480～ 500 綠 500～ 560 黃綠 560～ 580 黃 580～ 600 橙 600～ 650 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 16 ?物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色與吸收光顏色是互補色關系。 吸收曲線的討論： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 23 ?③吸收曲線可以提供物質(zhì)的結構信息，并作為物質(zhì) 定性分析的依據(jù)之一 (分子內(nèi)部能級分布狀況 )。 C=O雙鍵同 C=C雙鍵的共軛作用使 n→ ?*和 ?→ ?*躍遷的吸收峰都發(fā)生紅移 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 41 （三） 無機化合物的吸收光譜 1. d— d躍遷和 f－ f 躍遷 過渡金屬離子未充滿的 d軌道，由于受配位場（或晶體場）的影響而發(fā)生分裂，當吸收光時可發(fā)生 d— d躍遷，吸收波長取決于分裂能的大小， L越強，分裂能越大，吸收波長越短。 （ 6） ε max越大表明該物質(zhì)吸光能力越強，用光度法測定該物質(zhì)靈敏度越高。 消除措施：試液濃縮富集 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 64 ?S為背景吸收 切光器 吸收池 光源 檢測器 單色器 單色器 2. 雙波長分光度計 特點：可測多組份試樣 、 混濁試樣 、 而且可作成導數(shù)光譜 、不需參比液 、 克服了電源不穩(wěn)而產(chǎn)生的誤差 ， 靈敏度高 。 4. 平行操作溶液參比 用不含被測組分的試樣，在相同條件下與被測試樣同樣進行處理，由此得到平行操作參比溶液干擾及消除方法。 利用雙波長分光光度計中差分函數(shù)放大器，把分別 (雙波長分光光度計）放大 k k2倍，則兩波長處的信號差為 S, 、 調(diào)節(jié)放大器，使λ 2和 λ 1滿足： 干擾組分 A無關，即消除了 A的干擾 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 88 1）定義：將吸光度信號轉化為對波長的導數(shù)信號的方法。這七種顏色的光波長是不一樣的。 ，化合物有強吸收而雜志無吸收，也可以用摩爾吸光系數(shù)檢查它的純度。 、溫度、放置時間 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 69 參比溶液的選擇 why使用參比溶液 只有使用參比溶液，才能真正反映待測溶液的吸光度值。 2）吸收池的光學面應垂直于光束方向。 c．散射光和反射光 渾濁溶液產(chǎn)生散射和反射，不能用空白消除影響 (被認為成吸光）， I變小，但 I0不變。 λ 不變，則只與 b、 c有關。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 39 ③醛酮：有＞ C＝ O基因，產(chǎn)生 n→π ＊； n→σ ＊ ； π→π ＊ 三種躍遷。 College of Bioengineering, Jimei University, C