【正文】 數(shù)，按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。 枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 6350金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 2600大腸埃希菌 CMCC（ B） 4410白色念珠菌 CMCC (F) 9800 黑曲霉 CMCC(F)98003。 取新鮮的白色念珠菌的培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中， 經(jīng) ℃177。在特 殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細菌，則應(yīng)分別點計霉菌和酵母菌，細菌菌落數(shù)。 取新鮮的黑曲霉培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基，經(jīng) ℃培養(yǎng) d，加入 ml 含 %（ ml/ml）聚 山梨酯 80 的 ％無菌氯化鈉溶液，將霉菌孢子洗脫。 計算回收率： 試驗組的菌數(shù)回收率（ %）＝（實驗組的平均菌落數(shù) — 供試品對照組的平均菌落數(shù)） /菌液組的平均菌落數(shù) 100% 稀釋劑對照組的回收率（ %）＝ (稀釋劑對照 組平均菌落 /菌液組平均菌落數(shù)數(shù) )液各 1ml，分別注入平皿中，立即傾注培養(yǎng)基，每株試 100% 判斷標準： 本次試驗各試驗組的菌回收率和各稀釋劑對照組的菌回收率均應(yīng)不低于 70%。 培養(yǎng)和計數(shù) 以上各組中做細菌計數(shù)的平皿與 ℃倒置 培養(yǎng) 天，霉菌、酵母菌與 ℃倒置培養(yǎng) 天，逐日觀察菌落生長情況，點計菌落數(shù)，必要時，可適當延長培養(yǎng)時間至 天進行菌落計數(shù)報告。細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證至少應(yīng)進行 3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。每株試驗菌平行制備 2個平皿，按平皿菌落計數(shù)法測定其細菌數(shù) 稀釋劑對照組： 用相應(yīng)的稀釋液即 無菌氯化鈉 蛋白胨緩 沖液代替供使品，加入各試驗菌 1ml，按實驗組供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù) 。細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證至少應(yīng)進行 3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。 、霉菌及酵母菌的計數(shù)方法驗證試驗 供試品對照組： 用滅菌注射器取少量 無菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液注入滅菌薄膜過濾器，潤濕濾膜，再取充分混勻的純化水樣 1ml 注入濾器，再用適量的 無菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，使總沖洗量為 100ml,沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于已制備好的平板上， 按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)；細菌、霉菌及酵母菌各制備 2 個平皿。 八 測試結(jié)果 細菌、霉菌 及酵母菌計數(shù)方法驗證結(jié)果見附表 1，此表三份次數(shù)分別為 3次。每株試驗菌平行制備 2個平皿， 按平皿菌落計數(shù)法測定其細菌數(shù) 稀釋劑對照組： 用相應(yīng)的稀釋液即 無菌氯化鈉 蛋白胨緩 沖液代替供使品，加入各試驗菌 1ml，按實驗組供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù) 。 九 結(jié)論 ： 十 再驗證周期 國家相關(guān)微生物限度檢查標準修改后需要對本方法重新進行再驗證。 菌液組： 分別取上述 5 種試驗菌懸 驗菌平行制備 2 個平皿，按平皿菌落計數(shù)法測定其菌數(shù)。 計算回收率： 試驗組的菌數(shù)回收率（ %）＝（實驗組的平均菌落數(shù) — 供試品對照組的平均菌落數(shù)） /菌液組的平均菌落數(shù) 100% 稀釋劑對照組的回收率（ %）＝ (稀釋劑對照組平均菌落 /菌液組平均菌落數(shù)數(shù) ) 100% 判斷標準： 本次試驗各試驗組的菌回收率和各稀釋劑對照組的菌回收率均應(yīng)不低于 70%?！媾囵B(yǎng) 5～ 7d，加入 3～ 5ml 含 %（ ml/ml）聚山梨酯 80 的 ％無菌氯化鈉溶液，將霉菌孢子洗脫。 三 范圍 ：純化水 四 參加人員 五 內(nèi)容 驗證需用儀器設(shè)備： 電熱恒溫培養(yǎng)箱、多用生化培養(yǎng)箱、蒸汽滅菌器 純化水微生物限度檢查質(zhì)量標準 項目 標準規(guī)定 細菌 總數(shù)≤ 100 個 /ml 霉菌、酵母菌 細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證結(jié)果判斷 在 3 次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的 菌回收率應(yīng) 不低于 70%。 備注：以上各菌懸液中大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌用 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 作為細菌計數(shù)； 白色念珠菌和 黑曲霉 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng) 作為霉菌酵母菌計數(shù)。 三 范圍 ：純化水 四 參加人員 驗證委員會負責驗證項目的確定； 質(zhì)控部負責該驗證方案的起草及組織實施；驗證小組負責驗證方案的審批； 質(zhì)控部參與驗證的實施及監(jiān)督 崗位職務(wù) 簽 名 組 長 質(zhì)量控制 室主任 成 員 質(zhì)量 保證室 成員 質(zhì)量控制 室 成員 質(zhì)量控