【正文】 出來的基因在乙生物體內(nèi)進行表達，首先得將這個基因送到乙生物的細胞內(nèi)去。 第二步：核酸酶 H使 RNADNA雜交分子中的 RNA鏈降 解，使之變成單鏈的 DNA。小圖為子彈 新式的基因槍靠高壓氦氣為動力，將微粒載片上的ＤＮＡ送出，成功率在１５％左右。 ①特點 : 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法： （ 1）將目的基因?qū)?植物細胞 能感染 雙子葉植物 和 祼子植物 ,對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力 ② 過程 ： Ti質(zhì)粒的 T— DNA可轉(zhuǎn)移至受體細胞并整合到其染色體上 ③ 適用生物： 雙子葉植物、祼子植物。 基因文庫中包含了一種生物所有的基因 ,這種基因文庫叫做 基因組文庫 。 二、“分子縫合針” —— DNA連接酶 DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，是把梯子兩邊扶手的斷口連接起來，這樣一個重組的 DNA分子才能形成。 基因工程的操作步驟中，目的基因的獲取年年考。 限制性內(nèi)切酶 特點： 特異性，即識別特定核苷酸序列，在特定的切點切割。 （ 2）真核生物基因結(jié)構(gòu) 主要是指編碼 蛋白質(zhì) 基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。 （ 1） 將目的基因?qū)胫参锛毎? ③ 基因槍法：單子葉植物。 提取 （ 3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法：抗原 抗體雜交 蘇云金桿菌 Bt毒素蛋白 將 Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi) 從小鼠血管抽出血液分離出抗 Bt毒素的抗體 抗體 蛋白質(zhì) 出現(xiàn)雜交帶 脫分化 組織培養(yǎng) 證明： 提取蛋白質(zhì)與 Bt毒素蛋白質(zhì)一樣 例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達。 （ 2） 應(yīng)用 PCR技術(shù)擴增目的基因 ① 定義： ② 原理： DNA復(fù)制 PCR是多聚酶鏈式反應(yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)，在短時間內(nèi)大量擴增目的基因 DNA分子熱變性（在 90～ 95 OC時，解旋，雙鏈分開溫度降低又結(jié)合成雙鏈）因此，在PCR技術(shù)中 不需要解旋酶 （與復(fù)制不同之在處 ) ③ 儀器： PCR擴增儀（自動調(diào)控溫度的儀器） ④ 條件： 有一段已知的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物，脫氧核苷酸，酶等。 分子運輸車 — 運載體 載體的種類 質(zhì)粒：是一種裸露、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細菌擬核 DNA之外，具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀 DNA分子； λ 噬菌體的衍生物； 動植物病毒等。 （一）基因工程的概念 基因工程的別名 操作環(huán)境 操作對象 操作水平 基本過程 結(jié)果 基因拼接技術(shù)或 DNA重組技術(shù) 生物體外 基因 DN