【正文】 引起的甲基損傷表現(xiàn)為錯配 。 ? 亞硝酸鹽能使腺嘌呤和胞嘧啶發(fā)生氧化性脫氨 ， 相應(yīng)生成次黃嘌呤和尿嘧啶 。 ? DNA是生命物質(zhì)中唯一具有自身修復(fù)能力的分子 ， 其修復(fù)過程是依賴各種各樣的酶來進(jìn)行 。 光修復(fù) (light repairing) 光裂合酶(photolyase) UV “適應(yīng)性”反應(yīng) ? 鳥嘌呤 O6位易被烷化，造成堿基錯配，這時可依賴烷基轉(zhuǎn)移酶作用，將鳥嘌呤 O6位的甲基轉(zhuǎn)給蛋白質(zhì) O6甲基鳥嘌呤 DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（ MGMT ），修復(fù)烷基化損傷，鳥嘌呤恢復(fù)正常的堿基配對特性。 二、遺傳因素對致突變作用的影響 ? 個體因素影響致突變作用有兩個方面： ? 先天因素： 即遺傳因素 ， 也就是 遺傳多態(tài)性 ， 是一個衡量遺傳變異的數(shù)據(jù) ， 即群體中多態(tài)基因的比例 。 ? 配套實(shí)驗(yàn)應(yīng)包括多種進(jìn)化程度不同的物種。 ? 在細(xì)胞質(zhì)中微核來源有二： ? 染色體斷片或無著絲粒染色體 ， 在細(xì)胞分裂后期不能定向移動 ， 而遺留在細(xì)胞質(zhì)中； ? 有絲分裂物的作用使個別染色體或帶著絲粒的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被留在細(xì)胞質(zhì)中 。染色體畸變只能在細(xì)胞分裂的中期相進(jìn)行觀察和分析。小鼠的染色體數(shù)為 40條，大鼠的染色體數(shù)為 42條。 若 DNA發(fā)生斷裂 ， 則斷裂的小片段 DNA在電泳時泳動速度和大片段的 DNA產(chǎn)生差異 ， 出現(xiàn)如彗星一樣的拖尾現(xiàn)象 。 ? 陽性結(jié)果判定條件 ? 具有劑量－反應(yīng)關(guān)系，即隨著劑量的增加，致突變作用也增加； ? 實(shí)驗(yàn)組觀察值與陰性對照比較有顯著性差異，即表明受試物具有致突變性。 它是機(jī)體為保證遺傳穩(wěn)定性而對 DNA雙鏈上出現(xiàn)的變異或損傷進(jìn)行修復(fù)合成的過程 。 ? 染色體數(shù)目改變包括： ? 整倍體變異：原先 2n的染色體變?yōu)槎啾扼w如 3n或 4n等。 ? PCE中含有的微核大小為細(xì)胞直徑的 1/201/5，呈圓形或橢圓形，邊緣光滑整齊，染色性與細(xì)胞核一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色。 ? 僅四種菌株均得到陰性結(jié)果，才認(rèn)為受試物是非致突變物。 致突變試驗(yàn)組合的原則 ? 一組可靠的試驗(yàn)系統(tǒng)應(yīng)包括每一類型的遺傳學(xué)終點(diǎn)。 DNA損傷修復(fù)的一般特點(diǎn) ? DNA損傷不僅可以因外源因素所致，也可以因內(nèi)源因素所致； ? 不同類型的 DNA損傷通過不同的 DNA修復(fù)途徑修復(fù)； ? 不同類型 DNA損傷修復(fù)速度是不同的； ? DNA損傷修復(fù)機(jī)制有些是基本的，有些是可誘導(dǎo)的； ? DNA損傷修復(fù)功能存在物種和個體差異。如細(xì)菌的重組修復(fù)機(jī)制是繞過不能配對的嘧啶二聚體或較大的化學(xué)加合物 ， 在受損對應(yīng)的新 DNA鏈留下一間隙 ， 然后通過重組過程 ， 用來自母本鏈的 DNA片段填補(bǔ)間隙 。 ? 非整倍體與多倍體的產(chǎn)生機(jī)制相似，可能有程度上的不同，如干擾紡錘體形成，完全阻止形成多倍體，部分阻止形成非整倍體。取代后會造成錯誤配對，即發(fā)生堿基置換。 ? ④ 易位 (translocation)： 一個染色體片段的位置發(fā)生改變。 ? 鏈終止突變： 指無義突變使肽鏈過早終止。 ? 當(dāng) DNA鏈上某一堿基由于致突變物作用而脫落或其配對性能發(fā)生改變 ， 在 DNA復(fù)制過程中該 DNA互補(bǔ)鏈上的相應(yīng)位點(diǎn)配上一個錯誤的堿基 ， 即 錯誤配對 (mispairing)。 ? 環(huán)境因素對遺傳所起的作用必須通過基因型才能實(shí)現(xiàn)，外界環(huán)境是基因型轉(zhuǎn)變成具體表型的必要條件。 基本作用是決定蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu) ， 即每個基因決定一條多肽鏈或一種酶 。 一、基本概念 ? 變異 (variation)： 遺傳的穩(wěn)定是相對的 ? 一方面生物的遺傳物質(zhì)在自我復(fù)制過程中可能發(fā)生改變； ? 另一方面生物個體發(fā)育在受到復(fù)雜的內(nèi)外環(huán)境條件影響下，性狀的發(fā)育可能有所不同。 一、基本概念 致突變性 “ ＜ ” 遺傳毒性 ? 致突變性（ mutagenicity）： 指引起遺傳物質(zhì)發(fā)生突變的能力，是精確的概念，在一個實(shí)驗(yàn)群體中突變率可定量檢測。 ? 生殖細(xì)胞 (gemcell)： 往往是單倍體，其染色體改變可以傳給下一代。 ? 特點(diǎn)： 發(fā)生過程短，頻率高，既可被人類利用，也可能對人類產(chǎn)生危害。 ? 絲氨酸的密碼子是 UCU、 UCC、 UCA、 CCG、 AUG、AGC共有 6種，由于堿基取代，使 mRNA上的 UCG轉(zhuǎn)換成UCU、 UCC、 UCA，仍是其密碼子。 二、染色體結(jié)構(gòu)畸變 ? 染色體結(jié)構(gòu)畸變 (chromosome aberration)： 指染色體的結(jié)構(gòu)改變，它是指遺傳物質(zhì)大的改變，一般可在細(xì)胞有絲分裂中期通過光學(xué)顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)。 丟失堿基的 DNA留下了一個無嘌呤或無嘧啶的位點(diǎn) ， 通常稱 AP位點(diǎn) (apurinic or apyrimidinic site)。 ? DNA加合物形成可活化癌基因 ， 影響調(diào)節(jié)基因和抑癌基因的表達(dá) 。 ? 基因庫（ gene pool）： 某一物種在特定時期中能將遺傳信息傳至下一代的處于生育年齡的群體所含有的基因總和。 錯配修復(fù) ? 錯配修復(fù)分識別、切除、修補(bǔ)等過程，是一類性質(zhì)截然不同的切除修復(fù)。 這些因素是產(chǎn)生突變的條件 。 鼠傷寒沙門菌突變試驗(yàn)原理 ? 鼠傷寒沙門氏菌的野生型菌株能自行合成組氨酸 （ his+） ，而人工誘變的突變株在組氨酸操縱子中有一個突變 ， 這種組氨酸缺陷型突變菌株必需依賴外源性組氨酸才能生長 ， 而在無組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能存活 （ his） 。 ? ① 體外微核試驗(yàn) ? ② 周圍血微核試驗(yàn) ? ③ 雙核細(xì)胞法 ? ④ 免疫熒光染色法和熒光原位雜交法 改進(jìn)的微核試驗(yàn) MN NCE 試驗(yàn)步驟 ? 健康成年 ICR小鼠，實(shí)驗(yàn)前 24小時予環(huán)磷酰胺 40mg/kg腹腔注射染毒。 ? 收獲細(xì)胞：處死動物前 2~4h，秋水仙堿 4mg/kg腹腔注射。如單體內(nèi) DNA鏈?zhǔn)軗p，則可能通過這種交換方式進(jìn)行重組修復(fù)。 7. 觀察方法的新進(jìn)展 ? 轉(zhuǎn)基因小鼠致突變檢測系統(tǒng) ? 微核自動化檢測技術(shù) ? 熒光原位雜交技術(shù) 三、致突變試驗(yàn)中的一些注意問題 ? 1. 陰性和陽性對照的設(shè)立 ? 2. 體外試驗(yàn)的活化系統(tǒng) 3. 致突變試驗(yàn)與致癌試驗(yàn)的關(guān)系 ? 化學(xué)物按遺傳毒性和致癌性分類：遺傳毒性致癌物，非遺傳毒性致癌物，遺傳毒性非致癌物和非遺傳毒性非致癌物四類。 ? 人類致癌物檢測方法有三大類：短期試驗(yàn)，哺乳動物誘癌試驗(yàn)和人類流行病學(xué)觀察。 ? 將 5BrdU加入合成 DNA的原料中，經(jīng)過兩個分裂周期后，兩條染色單體的其中一條雙股 DNA鏈內(nèi)胸腺嘧啶核苷均被BrdU取代，另一條只有一股被取代。 ? 低滲：打散沉淀物，加入預(yù)溫 37℃ 的 mol/L KCl約 6ml，混勻，于 37℃ 低滲 15~20min，再加固定液 l~2 ml混勻，立即以1000r/min離心 10min，棄上清液。 ? 以 1000r/min速度離心 10 min，棄上清液，留下約 勻后，滴片兩張，推片。 對于間接致突變物 ， 可經(jīng)代謝活化系統(tǒng)處理成為直接致突變物 。 觀察項(xiàng)目的選擇 ? 基因突變和染色體畸變的檢測可直接反映化學(xué)物的致突變性，是評價化學(xué)物致突變性唯一可靠方法。 三、雙鏈斷裂修復(fù) ? 雙鏈斷裂修復(fù)依賴 DNA蛋白激酶 ， 通過填補(bǔ)損傷部位 ， 使復(fù)制得以繼續(xù)進(jìn)行 ， 但 DNA損傷部位仍然存在 。 體細(xì)胞突變的后果 ? 腫瘤： 體細(xì)胞突變是細(xì)胞癌變的重要基礎(chǔ)，許多腫瘤細(xì)胞中都可觀察到癌基因的活化和抑癌基因的失活，并存在缺失、重復(fù)、易位、倒位等染色體畸變。 （二） DNA鏈?zhǔn)軗p ? 3. D